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Beschallung-erleichtert Immunfluoreszenzfärbungen der Late-Stage embryonalen und Larven Droso...
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JoVE Journal Biology
Sonication-facilitated Immunofluorescence Staining of Late-stage Embryonic and Larval Drosophila Tissues In Situ

Beschallung-erleichtert Immunfluoreszenzfärbungen der Late-Stage embryonalen und Larven Drosophila Gewebe In-situ

Full Text
13,248 Views
10:10 min
August 14, 2014

DOI: 10.3791/51528-v

Ashley Fidler*1, Lauren Boulay*1, Matthew Wawersik1

1Department of Biology,College of William & Mary

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Immunfärbung ist eine effektive Technik zur Visualisierung spezifischer Zelltypen und Proteine innerhalb von Geweben. Durch die Verwendung von Ultraschall verringert das hier beschriebene Protokoll die Notwendigkeit, Drosophila melanogaster-Gewebe von Embryonen und Larven im Spätstadium vor der Immunfärbung zu präparieren. Wir bieten eine effiziente Methodik für die Immunfärbung von Formaldehyd-fixierten Whole-Mount-Larven.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, Gewebe in C zwei mittels Fluoreszenzmikroskopie nach Ultraschall sichtbar zu machen oder zu sättigen. Dies wird erreicht, indem zunächst Embryonal- und Larvenproben entnommen und dann mit Formaldehyd, Heptan und Methanol fixiert werden. Der zweite Schritt besteht darin, die fixierte Probe zu beschallen, um die Kutikula zu entfernen und das Eindringen von Antikörpern zu ermöglichen.

Als nächstes wird die Probe mit primären und fluoreszierenden Sekundärantikörpern immungefärbt. Der letzte Schritt besteht darin, die Probe in eine Antifa-Lösung auf Glycerinbasis einzubetten. Letztendlich wird die konfokale oder epi-Fluoreszenzmikroskopie verwendet, um das sich entwickelnde Gewebe sowie die Proteinexpression und -lokalisation sichtbar zu machen.

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Molecular Biology Ausgabe 90 Drosophila Embryo Larven Beschallung Fixierung immunostain Immunfluoreszenz Organogenese Entwicklung

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