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DOI: 10.3791/51528-v
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Immunfärbung ist eine effektive Technik zur Visualisierung spezifischer Zelltypen und Proteine innerhalb von Geweben. Durch die Verwendung von Ultraschall verringert das hier beschriebene Protokoll die Notwendigkeit, Drosophila melanogaster-Gewebe von Embryonen und Larven im Spätstadium vor der Immunfärbung zu präparieren. Wir bieten eine effiziente Methodik für die Immunfärbung von Formaldehyd-fixierten Whole-Mount-Larven.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, Gewebe in C zwei mittels Fluoreszenzmikroskopie nach Ultraschall sichtbar zu machen oder zu sättigen. Dies wird erreicht, indem zunächst Embryonal- und Larvenproben entnommen und dann mit Formaldehyd, Heptan und Methanol fixiert werden. Der zweite Schritt besteht darin, die fixierte Probe zu beschallen, um die Kutikula zu entfernen und das Eindringen von Antikörpern zu ermöglichen.
Als nächstes wird die Probe mit primären und fluoreszierenden Sekundärantikörpern immungefärbt. Der letzte Schritt besteht darin, die Probe in eine Antifa-Lösung auf Glycerinbasis einzubetten. Letztendlich wird die konfokale oder epi-Fluoreszenzmikroskopie verwendet, um das sich entwickelnde Gewebe sowie die Proteinexpression und -lokalisation sichtbar zu machen.
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