Hoch effiziente Ligation kleine RNA-Moleküle für MicroRNA Quantifizierung von Hochdurchsatz-Sequenzierung

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, microRNAs unvoreingenommen für die Hochdurchsatzsequenzierung vorzubereiten. Dies wird erreicht, indem zunächst DNA-Oligonukleotide hergestellt oder gekauft werden, die für die Ligation an das drei primierende Ende der Mikro-RNA zuständig sind. Der zweite Schritt besteht darin, die drei Prime-DNA-Oligonukleotide an die drei Primzahlen der microRNA zu ligieren.

Als nächstes wird das Ligationsprodukt gelgereinigt und der Fünf-Prime-RNA-Oligonukleotid-Linker wird an das Fünf-Prime-Ende der Mikro-RNA ligiert. Der letzte Schritt besteht darin, die Hybridmoleküle in CDNA umzuwandeln und dann das CDNA durch Polymerase-Kettenreaktion zu amplifizieren. Letztendlich werden die Mikro-RNA-Klonierung und die Hochdurchsatz-Sequenzierung verwendet, um das transkriptomweite Profil von microRNAs quantitativ mit individueller Nukleotidauflösung zu zeigen.