Name: Knochen konditioniertem Medium: Vorbereitung und Bioassay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 18 s
Description: Erfahren Sie die Herstellung von Knochen-konditioniertem Medium aus Schweinekiefer und dessen Testung in vitro mittels qPCR. Diese Methode ermöglicht die Analyse genetischer Zellantworten auf knochenabgeleitete Faktoren.

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Die Autoren möchten Catherine Solioz für ihre geschickte Hilfe danken.

1. BCM Vorbereitung <ol><li> Erhalten Schweinekiefer aus dem lokalen Metzger so frisch wie möglich. Legen Sie die Mandibeln auf eine feste Oberfläche und lassen eine vollständige Dicke Klappe besondere Aufmerksamkeit, keine Weichteile lassen oder Periost bis auf die Knochen befestigt. Arbeiten Sie in einer sauberen Umgebung ohne die Notwendigkeit, im Rahmen des Flow-Haube arbeiten. </li><li> Sobald eine volle Dicke Klappe freigegeben wird, verwenden Sie einen Knochenschaber, um die Knochenspäne aus der bukkalen Seite zu ernten. Bitte beachten Sie, dass die Knochenschaber hat scharf sein. Griff fest das Knochenschaber und mit langen Bewegungen sammeln die Knochen. Entsorgen Knochenchips kleiner als 1 mm. <ol><li> Nativen Knochenchips zu erhalten, setzen Sie sich direkt die Knochenspäne in Plastikschalen von 10 cm Durchmesser mit Dulbecco modifiziertem Eagle-Medium (DMEM) mit 1% Antibiotika und Antimykotika lassen sie nicht austrocknen, ergänzt. </li><li> Um die Auswirkungen der thermischen Verarbeitung zu bewerten, unterliegt Knochenspänen für 30 min bei 80 ° C Pasteurisierung oderAutoklav für 20 Minuten bei 121 ° C. </li><li> Zur Bewertung der Auswirkungen der Entmineralisierung, schütteln Knochenspäne in 1 M HCL für 4-6 Stunden bei 4 ° C und immer wieder abwaschen mit Kulturmedium, bis der pH-Wert neutral. </li></ol></li><li> Zeigen insgesamt 5 g Knochenchips pro 10 ml frischem DMEM mit 1% Antibiotika und Antimykotika ergänzt in eine neue Kunststoffschale. </li><li> Setzen Sie die Kunststoffschalen in einer feuchten Atmosphäre bei 37 ° C für 24 Stunden. Dann Ernte BCM. Zentrifugieren Sie die BCM bei 200 × g für 10 min, um Ablagerungen zu entfernen, zu filtern sterile (0,2 nm), und halten Aliquots bei -80 ° C eingefroren. </li><li> Auftauen BCM Lager unmittelbar vor der Verwendung und zur Vermeidung von wiederholten Zyklen von Einfrieren und Auftauen. </li><li> Für Experimente angegeben, tränken Kollagenmembranen mit BCM oder Serum-freien Medium für 1 h bei RT. Waschen Sie kräftig die Membranen mit PBS und legen Sie sie in 96-Well-Platten. Nassen Membranen werden mit Zellen beimpft. </li><li> BCM Herstellverfahren ist in 1 zusammengefasst. </li&gt; </ol> 2. Bioassays Basierend auf mesenchymale Zellen <ol><li> Samen humanen mesenchymalen Zellen (zB Knochenzellen, gingivalen und Parodontalligament Fibroblasten) in eine Platte mit 12 Vertiefungen mit einer Konzentration von 30.000 Zellen / cm 2. Auf Saatgut, die Zellen verwenden, Wachstumsmedium, bestehend aus DMEM, das 10% fötales Kälberserum und Antibiotika. Lassen Sie die Zellen heften sich an die Platte O / N. </li><li> Entsorgen Sie das Kulturmedium und waschen Sie die Zellen mit vorgewärmten PBS bei 37 ° C. Stimulieren die Zellen durch Zugabe von vorgewärmten serumfreien Kulturmedium mit und ohne 20% BCM. Platzieren Sie die Zellen in einer befeuchteten Atmosphäre bei 37 ° C für 24 Std. </li><li> Entsorgen Sie das Kulturmedium, spülen Sie die Zellen mit vorgewärmten PBS und extrahieren Sie die RNA nach Ihren bevorzugten Protokoll. </li><li> Einstellen der Konzentration von RNA, um die gleiche Menge an RNA in jeder Probe zu haben. Bereiten cDNAs und führen Sie eine qRT-PCR, um die ausgewählten Gene unter Verwendung der in Tabelle 1 gezeigten Primer zu analysieren. Hinweis: Dies sind die Verdünnungen der einzelnen Komponenten: 2x SYBR Green, 20x Primer nach vorn, 20x Primer Reverse, 5x sterile DD Wasser, 5x cDNA. Die qRT-PCR wird in 40 Zyklen bei 95 ° C 15 sec und 60 ° C 1 min lang durchgeführt. </li><li> Berechnen der relativen Expressionsniveaus durch Normierung auf die Haushaltsgens GAPDH mit der Δ (ACt) Verfahren, bei dem ACt ist CT Ziel - CT GAPDH und Δ (ACt) ist ACt stimulierten - ACt Kontrolle. </li><li> Nach dieser Qualitätskontrolle, hinzuzufügen BCM zum Kulturmedium, um alle Arten von Zellen, einschließlich mesenchymalen Zellen, hämatopoetischen Zellen oder endotheliale Zellen zu stimulieren. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren. Jordi Caballé-Serrano erhielt ein Stipendium der Stiftung of Dental Research und Education, Basel, Schweiz.

Knochen-konditionierten Medium reflektiert die Freigabe Aktivität von Knochentransplantaten in den frühen Phasen der Knochenregeneration. Das hier beschriebene Protokoll angepasst ist, die Reaktion der verschiedenen Arten von Zellen in der Knochenregeneration zu studieren. Darüber hinaus kann das Protokoll, mit dem konditionierten Medium von verarbeiteten Knochen oder Knochen Füllstoffe verwendet werden. Die Methoden sind einfach durchzuführen und sich auf ein einfaches Konzept: der Faktoren aus verschiedenen einheimisc...

Autologem Knochen wird häufig eingesetzt, um Mängel, die als Folge der Fehlbildung, resektive Chirurgie, Rekonstruktive Unfallchirurgie, und vor der Implantation 1,2 aufgetreten brücken. Das Verständnis der biologischen Grundlagen, wie Knochentransplantate unterstützen den Prozess der Konsolidierung Transplantat ist nicht nur Schlüssel, um zu verstehen, warum Autotransplantate gelten als der Goldstandard in der rekonstruktiven Chirurgie, ist es auch bionic der verbesserten Gestaltung von Knochenersatz 3. Dennoch ist Transplantat Konsolidierung schneller mit autologem Knochen im Vergleich zu Knochenersatz 4,5. Daher ist es zwingend notwendig, um die molekularen und zellulären Mechanismen, die autologe Knochen so wirksam ist, um die Knochenregeneration zu unterstützen offenbaren. Es gibt drei Lehrbuch Merkmale der Autotransplantate, die berücksichtigt werden, um den Konsolidierungsprozess 6,7 unterstützt. Zunächst wird autologen Knochen ist osteokonduktive, die Beratung für den neu gebildeten Knochen zu wachsenin den Defekt. Zweitens ist die autologe Knochen osteogenen, dh es mesenchymalen Zellen, zu Osteoblasten differenzieren können 8 enthält. Drittens autologem Knochen osteoinduktiven Wachstumsfaktoren wie bone morphogenetic proteins in der Matrix vergraben können den Prozess der enchondralen oder sogar intramembranous Knochenbildung 9 einzuleiten. Es ist ein weiterer Aspekt: ​​frisch hergestellten Knochenchips halten eine parakrine Funktion auf der Grundlage der in vitro-Beobachtungen mit &quot;Knochen-konditioniertes Medium&quot; 10-15. Auch die Auswirkungen der Myelopoese sollte erwähnt 16 werden. Ein ähnlicher Begriff &quot;demineralisierte Knochenmatrix-konditioniertes Medium&quot; wurde bereits 1996 geprägt und unterstützt das Gesamtkonzept einer parakrinen Funktion von Knochen, selbst wenn sie durch Demineralisierung 17 verarbeitet. Für unsere Zwecke können BCM von frischem Schweinefleisch hergestellt werden Mandibeln 10,11. Proteom-Analysen von BCM zeigte die komplexe Zusammensetzung, einschließlich des Wachstums der Tators und Bestandteile der extrazellulären Matrix 10, der sich auch das vorhandene Wissen auf dem Proteasom der ganzen Knochen 18,19. So sollte BCM spiegeln die Freigabe Aktivität verschiedener Modifikationen von Knochentransplantaten in vitro. Was passiert, wenn mesenchymalen Zellen, beispielsweise die aus Knochenspäne oder von oralen Weichgewebe isoliert, ausgesetzt sind BCM? In vitro, BCM verringert osteogene und adipogenen Differenzierung und provoziert eine starke Zunahme der IL11 Ausdruck 11. Genomweite Mikroarray ergab mehr Gene differentiell in mesenchymalen Zellen in Reaktion auf BCM ausgedrückt werden. Unter diesen Genen sind Adrenomedullin (ADM), IL11, IL33, NADPH-Oxidase-4 (NOX4), Proteoglycan 4 (PRG4 oder lubricin) und Pentraxin 3 (PTX3) 15. BCM autoklaviert Knochenspänen erhalten konnte die Expression der jeweiligen Gene 14 ändern. BCM von Knochenchips, die Pasteurisierung unterzogen und das Einfrieren der Lage war,ändern Genexpression 14. Auch konditionierte Medium demineralisierte Knochenmatrix (DBM-CM) verändert die Expression von TGF-β-regulierte Gene 20. Interessanterweise Kollagen Barrieremembranen verwendet, um die Knochenspäne aus dem umgebenden Weichgewebe 21,22 abzuschirmen, adsorbiert die Teile des BCM, das für die Veränderungen in der Genexpression, 23 verantwortlich sind. BCM Forschung kann auf andere in der Knochenregeneration beteiligt wie Knochen-Osteoklasten und Endothelzellen Zelltypen erweitert werden, um einige zu nennen. Insgesamt sind die anfallenden in-vitro-Daten liefern die wissenschaftliche Grundlage für die Gestaltung einer präklinischen Studie. Dieses Protokoll ist zweifach: Erstens zeigt es, wie man BCM vorzubereiten. Zweitens zeigt sie, wie seine biologische Aktivität getestet anhand von mesenchymalen Zellen in vitro.

<table><tbody><tr><td>Schweine Mandibeln Local</td><td>bucher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Knochenschaber</td><td>Hu-Friedy</td><td>PPBUSE2/36</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotika & Antimikotika</td><td>All life Technologies</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenmembranen (Bio-Gide)</td><td>Geistlich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fetal Calf Serum</td><td>Invitrogen Corporation</td><td>16030074</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen Corporation</td><td>21885-025</td><td></td></tr><tr><td> High Pure RNA Isolation Kit</td><td>Roche</td><td>11828665001</td><td></td></tr><tr><td>Transcriptor First Strang-cDNA-Synthesekit</td><td>Roche</td><td>4379012001</td><td></td></tr><tr><td>Primer</td><td>Microsynth</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SYBR Grün (für Q-RT-PCR)Roche</td><td></td> <td>4673484001</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Roche</td><td>11666789001</td><td></td></tr></tbody></table>

knochen konditioniertem medium: vorbereitung und bioassay

Bone Conditioned Medium: Preparation and Bioassay

Autologe Knochentransplantate sind weit verbreitet in der MKG-Chirurgie, Orthopädie, Traumatologie und verwendet. Autologe Knochentransplantate nicht nur fehlenden Knochen zu ersetzen, sie unterstützen auch den komplexen Prozess der Knochenregeneration. Dieses günstige Verhalten des Autografts ist mit den drei Eigenschaften zugeschrieben: Osteokonduktivität, osteogenicity und Osteoinduktivität. Es besteht jedoch ein weiterer Aspekt: ​​Knochentransplantate setzen eine Vielzahl von Molekülen, einschließlich Wachstumsfaktoren, die mesenchymalen Zellen in der Knochenregeneration beteiligten Ziel kann. Die parakrine Eigenschaften von Knochentransplantaten in vitro durch die Verwendung von Knochen-konditionierten Mediums (BCM) untersucht werden. Hier präsentieren wir ein Protokoll, wie man Knochen-konditioniertes Medium von einheimischen Schweine kortikalen Knochen vorzubereiten und Knochen, die thermische Verarbeitung oder Entsalzung unterzogen. Zellen können direkt an BCM ausgesetzt oder auf Biomaterialien, wie Kollagen Membranen, die zuvor mit BCM getränkt ausgesät werden. Wir geben Beispiele für die in vitro bioassays mit mesenchymalen Zellen auf die Expression von TGF-β reguliert Gene. Die vorgestellten Protokolle sollten ermutigen, die parakrine Wirkung von Knochentransplantaten weiter enthüllen während die Knochenregeneration und öffnen Sie einen Pfad für die translationale Forschung auf dem weiten Feld der rekonstruktiven Chirurgie.

Knochen konditionierte Medium wird aus frischen Schweineknochenspänen hergestellt. Allgemeine Übersicht über den Prozess zu BCM vorzubereiten und Biomaterialien in Verbindung mit BCM Verwendung wird in Abbildung 1 und 2 dargestellt. Während des BCM Vorbereitung, ist es wichtig, große Knochenchips mit langen Bewegungen so kurz Bewegungen oder sehr kleine Knochensplitter zu erhalten können die Qualität des endgültigen BCM beeinflussen. ADM, PTX3, IL11, IL33, NOX4 und PRG4 (Abbildu...

Wir beschreiben hier, wie man Knochen-konditionierten Medium (BCM) vorbereiten und testen ihre Aktivität in vitro.

Knochen konditioniertem Medium: Vorbereitung und Bioassay

Autologous bone grafts are widely used in oral and maxillofacial surgery, orthopedics, and traumatology. Autologous bone grafts not only replace missing ...

Das übergeordnete Ziel dieses Videos ist es, zu beschreiben, wie man knochenkonditioniertes Medium herstellt und seine Aktivität in vitro testet. Dazu werden zunächst Knochenspäne aus einem Schweineunterkiefer mit einem Knochenschaber entnommen. Der zweite Schritt besteht darin, die Knochenchips vor der 24-stündigen Inkubation in Kulturmedium zu erhitzen, zu behandeln, zu demineralisieren oder nichts zu tun.Als nächstes wird das knochenkonditionierte Medium gesammelt, das alle Faktoren enthält, die von den Knochenspänen freigesetzt werden. Der letzte Schritt besteht darin, die Zellen mit dem knochenkonditionierten Medium zu stimulieren oder ein Biomaterial mit dem knochenkonditionierten Medium und den darauf befindlichen Samenzellen nach der Inkubationszeit vorzuinkubieren. Letztendlich wird die quantitative real-time PCR verwendet, um Veränderungen in der Genexpression der Zellen nach der Behandlung zu zeigen.Die Verwendung von autologen Knochentransplantaten allein oder in Kombination mit anderen Biomaterialien stimuliert die Knochenregeneration bei periimplantären Knochendefekten und sorgt so für langfristig gute Ergebnisse. Dieses Video zeigt einen in vitro Bioassay, der nützlich ist, um die genetische Reaktion von Massenzellen auf die Biomoleküle im Knochenzustand zu bestimmen. Mittel Knochenzustand mittel kann helfen, wichtige Fragen im Bereich Trauma, Kiefer- und Zahnmedizin zu beantworten, z. B. warum autologer Knochen das Ziel eines Standardtransplantats bei der Knochenregeneration ist.Die Herstellung von Bedingungsmedium aus bearbeitetem Knochen, wie z. B. wärmebehandeltes Knochenautotransplantat oder isierte Knochenmatrix, kann schwierig zu standardisieren sein. Daher ist es wichtig, präzise zu sein. Besorgen Sie sich zunächst frische Schweinemandibeln von einem örtlichen Metzger und legen Sie sie auf eine feste Unterlage.Verwenden Sie als Nächstes ein Periost, um einen Lappen des Periosts in voller Dicke freizugeben, wobei Sie besonders darauf achten, dass kein Weichgewebe am Knochen haftet. Sobald das Periost entfernt ist, halten Sie den Knochenschaber fest und entnehmen Sie mit langen Bewegungen Knochenspäne von der bukkalen Seite des Unterkiefers. Entsorgen Sie alle Knochensplitter, die kleiner als einen Millimeter sind.Verhindern Sie das Austrocknen der Knochenspäne, indem Sie sie in einer 10 Zentimeter großen Petrischale schnell mit Nährboden abdecken. Nachdem genügend Knochenspäne gesammelt wurden, bereiten Sie eine Charge zur thermischen Kontrolle vor, indem Sie fünf Gramm der Knochenspäne pasteurisieren. Pasteurisieren Sie die Chips, indem Sie sie 30 Minuten lang bei 80 Grad Celsius erhitzen oder 20 Minuten lang bei 121 Grad Celsius autoklavieren.Bereiten Sie als Nächstes eine demineralisierte Kontrolle vor, indem Sie fünf Gramm Knochenspäne in eine einmolare Salzsäurelösung geben und sie vier bis sechs Stunden lang bei vier Grad Celsius auf einen Schüttler legen. Waschen Sie dann die Knochenchips wiederholt mit Kulturmedium, bis ein neutraler pH-Wert erreicht ist. Fünf Gramm frische Knochenchips und jeweils fünf Gramm der Kontrollpräparate werden in separate Schalen gegeben und 10 Milliliter frisches Nährmedium in jede Schale gegeben.Anschließend werden die Proben in einer befeuchteten Atmosphäre bei 37 Grad Celsius 24 Stunden lang inkubiert, um am nächsten Tag das konditionierte Medium herzustellen. Nehmen Sie das Medium aus jeder Schale und geben Sie es in ein konisches 15-Milliliter-Röhrchen. Zentrifugieren Sie das knochenkonditionierte Medium 10 Minuten lang bei der 200-fachen Schwerkraft, um Ablagerungen zu entfernen.Entfernen Sie dann den Überstand und passieren Sie ihn durch einen 0,2-Mikron-Sterilfilter. Lagern Sie die Ali-Quads gefroren bei minus 80 Grad Celsius, bis sie benötigt werden. Beginnen Sie mit der Aussaat menschlicher mesenchymaler Zellen wie Knochenzellen oder gingivaler und parodontaler Bandfibroblasten in eine 12-Wal-Platte in einer Konzentration von 30.000 Zellen pro Quadratzentimeter. Decken Sie die Zellen mit Wachstumsmedium ab und lassen Sie die Zellen am nächsten Morgen über Nacht an der Platte haften.Entsorgen Sie das Kulturmedium und waschen Sie die Zellen mit vorgewärmtem PBS bei 37 Grad Celsius. Stimulieren Sie dann die Zellen, indem Sie vorwarmes serumfreies Kulturmedium mit und ohne 20% knochenkonditioniertes Medium hinzufügen. Wenn auch die Absorptionsfähigkeit eines Biomaterials getestet wird, geben Sie das knochenkonditionierte Medium, einschließlich aller Kontrollen, zu den Röhrchen, die das betreffende Biomaterial enthalten, und inkubieren Sie die Röhrchen eine Stunde lang bei 37 Grad Celsius.Spülen Sie dann das Biomaterial kräftig mit vorgewärmtem PBS ab und säen Sie menschliche mesenchymale Zellen in einer Konzentration von 30.000 Zellen pro Quadratzentimeter auf das Material. Inkubieren Sie die Zellen allein oder die auf den Biomaterialien besiedelten Zellen in einer befeuchteten Atmosphäre bei 37 Grad CS für 24 Stunden. Entsorgen Sie dann das Nährmedium.Spülen Sie die Zellen mit vorwarmem PBS und extrahieren Sie die RNA der Zellen unter Verwendung eines Standard-RNA-Isolierungsprotokolls. Sobald die RNA isoliert wurde, bereiten Sie CD-NA-Proben jeder Behandlungsgruppe vor, indem Sie mit gleichen Konzentrationen der extrahierten RNA beginnen und eine reverse Transkriptase-Reaktion an jeder Probe durchführen. Führen Sie dann eine quantitative Echtzeit-PCR an den Proben durch, um unter Verwendung der im Begleittextprotokoll aufgeführten Primer und Bedingungen nach Konzentrationen ausgewählter Gene zu suchen.Berechnen Sie schließlich die Qualität des knochenkonditionierten Mediums auf der Grundlage der relativen Genexpressionsniveaus, indem Sie mit der Delta-Delta-CT-Methode auf Zyklusschwellenwerte der Gene auf das Haushaltsgen Gabb dh normalisieren. Hier sind einige typische Ergebnisse, die die Veränderungen in der Genexpression von oralen Fibroblasten zeigen, die 24 Stunden lang knochenkonditioniertem Medium ausgesetzt waren. Zwei Gene, Adrenalin und Pent Trax und drei, wurden beide signifikant auf 40% des ursprünglichen Niveaus herunterreguliert, während die Interleukine 11 und 33 zusammen mit N-A-D-P-H-Oxidase vier und Prot-Glykan vier bis zu 200-fach hochreguliert wurden.Interessanterweise absorbieren Kollagenbarrieremembranen, die verwendet werden, um die Knochenspäne vom umgebenden Weichgewebe abzuschirmen, einen Großteil des knochenkonditionierten Mediums, das für die Veränderungen in der Genexpression verantwortlich ist. Die Kollagenmembranen konnten jedoch die Faktoren, die die Interleukin-33-Expression steuern, nicht absorbieren. Daher ist die Interleukin-33-Expression in diesem Setting nicht reguliert.Das hier beschriebene Protokoll kann angepasst werden, um die Reaktion verschiedener Zelltypen auf die Knochenregeneration zu untersuchen. Darüber hinaus kann das Protokoll zur Herstellung von Konditionsmedium aus Prozessknochen und anderen Knochenfüllstoffen verwendet werden. Die klinische Relevanz dieses Bioassays bleibt unklar.Die zelluläre Antwort auf BCM in vivo ist wahrscheinlich komplexer und umfasst ein großes Spektrum an Genen und verschiedenen Zielzellen, die das hier vorgestellte erweitern. Nichtsdestotrotz liefert unser Bioassay erste Einblicke in die vermutlich komplexe Zusammensetzung von Knochen-RAF-Molekülen und die in vitro zelluläre Reaktion.

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Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dieses Video zeigt die Bewertung mehrerer Caspase-Aktivierungen in aus dem Knochenmark stammenden Makrophagen durch Stimulation mit dem Influenzavirus. Nach der Makrophagenlyse, der Hitzeinaktivierung von Lysat und der Zentrifugation werden intrazelluläre Caspasen für die anschließende immunologische Analyse gesammelt.

Bewertung der Aktivierung multipler Caspasen in Makrophagen

Dieses Video zeigt die Produktion von Oligodendrozyten-konditioniertem Medium (OCM) aus Zellen der Oligodendrozytenlinie, indem es sie betont, um ihre molekulare Freisetzung in das Medium zu verbessern. Dieses Medium, das reich an Wachstumsfaktoren, Zytokinen und anderen bioaktiven Molekülen ist, kann Neuronenkulturen zugesetzt werden, um Einblicke in den Einfluss von Oligodendrozyten-sezernierten Faktoren auf die neuronale Physiologie und Konnektivität zu erhalten.

Verfahren zur Erzeugung von Oligodendrozyten-konditioniertem Medium

Die Bodenplatte ist eine wichtige Struktur der Entwicklung des Rückenmarks und bietet diffusionsfähige Signale an Vorläuferzellen und Neuronen differenzieren. Wir beschreiben eine Methode zur Bodenplatte konditionierten Medium zu produzieren, um es an die frische Rückenmarksgewebe anzuwenden und die Auswirkungen auf die Proteine ​​von Interesse durch Biochemie beurteilen.

Kultur von isolierten Bodenplatte Tissue und Produktion von konditioniertem Medium, um funktionelle Eigenschaften von Bodenplatte aufgelegt Signale beurteilen

Dieses Manuskript beschreibt ein ex vivo-Modellsystem, das aus organkonditionierten Medien besteht, die aus dem Lymphknoten, dem Knochen, der Lunge und dem Gehirn von Mäusen stammen. Dieses Modellsystem kann verwendet werden, um aus Organen gewonnene lösliche Faktoren und ihre Auswirkungen auf den Organtropismus und das Metastasierungsverhalten von Krebszellen zu identifizieren und zu untersuchen.

Die Erzeugung von Orgelanlage Medien und Anwendungen für das Studium Organspezifische Einflüsse auf Brustkrebs Metastasiertem Verhalten

Die Anzahl der neue Biomaterialien für die Reparatur von großen Knochenläsionen entwickelt wird laufend erweitert, mit dem Ziel zu verbessern, Knochenheilung und Komplikationen im Zusammenhang mit Knochentransplantation überwinden. Hier präsentieren wir Ihnen eine multidisziplinäre Strategie zu Testzwecken vorklinischen Biokompatibilität von Biomaterialien für die Knochen-Reparatur.

Biologische Verträglichkeit Profil auf Biomaterialien für Knochenregeneration

Dieses Protokoll stellt einen radioaktiv markierten Aminosäureaufnahmetest vor, der für die Bewertung des Aminosäureverbrauchs entweder in Primärzellen oder in isolierten Knochen nützlich ist.

Bewertung des Aminosäureverbrauchs in kultivierten Knochenzellen und isolierten Knochenschäften

Der Echtzeit-Zellstoffwechselfluss-Assay misst die Sauerstoffverbrauchsrate und die extrazelluläre Säuerungsrate, die der mitochondrialen und glykolytischen Adenosintriphosphatproduktion entspricht, unter Verwendung von pH- und Sauerstoffsensoren. Das Manuskript erklärt eine Methode zum Verständnis des Energiestatus von Osteoblasten und die Charakterisierung und Interpretation des zellulären bioenergetischen Status.

Verwendung eines Echtzeit-Zellstoffwechselflussanalysators zur Überwachung der Bioenergetik des Osteoblast

Dieses Protokoll beschreibt eine umfassende Methode zur Beurteilung der Caspase-Aktivierung (Caspase-1, Caspase-3, Caspase-7, Caspase-8, Caspase-9 und Caspase-11) als Reaktion auf In-vitro - und In-vivo-Modelle (in Mäusen) von Infektionen, sterilen Beleidigungen und Krebs, um die Initiierung von Zelltodwegen wie Pyroptose, Apoptose, Nekroptose und PANoptose zu bestimmen.

Evaluierung der Caspase-Aktivierung zur Beurteilung des angeborenen Immunzelltods

Wir präsentieren ein zweistufiges Protokoll für die qualitativ hochwertige Isolierung von Mitochondrien, das mit der Entdeckung und Quantifizierung von Proteinen auf Proteomebene kompatibel ist. Unser Protokoll kommt ohne Gentechnik aus und eignet sich daher für die Untersuchung von Mitochondrien aus allen primären Zellen und Geweben.

Zweistufige tag-freie Isolierung von Mitochondrien für eine verbesserte Proteinentdeckung und -quantifizierung

Dieses Video beschreibt ein Verfahren zur Reinigung von Wolbachia pipientis von einer Anopheles gambiae Zelllinie und dann Kultivierung des Endosymbionten in zellfreien Medium. Ein Test für die Lebensfähigkeit des Bakteriums nachgewiesen ist.

Die Aufrechterhaltung Wolbachia in zellfreien Medium

Erfahren Sie die Herstellung von Knochen-konditioniertem Medium aus Schweinekiefer und dessen Testung in vitro mittels qPCR. Diese Methode ermöglicht die Analyse genetischer Zellantworten auf knochenabgeleitete Faktoren.

Knochen konditioniertem Medium: Vorbereitung und Bioassay

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