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Nehmen Sie eine polymerbeschichtete Petrischale.
Oligodendrozyten-Zellen oder OL-Zellen in ein geeignetes Kulturmedium geben und inkubieren.
Die positive Ladung auf der Polymerbeschichtung zieht die negativ geladene Zellmembran an und verbessert so die Zellanhaftung an die Schale. Die Wachstumsfaktoren und Nährstoffe im Medium erleichtern die Zellexpansion.
Ersetzen Sie das Medium durch ein nährstoffarmes Medium und inkubieren Sie.
Niedrige Nährstoffgehalte induzieren leichten Stress in den Zellen, was dazu führt, dass sie Proteine, Lipide und andere Moleküle, einschließlich Wachstumsfaktoren und Zytokine, in den extrazellulären Raum absondern.
Sammeln Sie das Medium in einer Tube.
Der Filter sterilisiert das Medium, um Zelltrümmer und unlösliche Bestandteile zu entfernen.
Das Filtrat, das die löslichen bioaktiven Moleküle enthält, die von OL-Zellen sezerniert werden, wird als Oligodendrozyten-konditioniertes Medium oder OCM bezeichnet.
Lagern Sie das OCM bis zur weiteren Verwendung bei niedrigeren Temperaturen, um den Abbau von Proteinen und anderen Molekülen zu verhindern und so die Wirksamkeit des OCM zu erhalten.
Beschichten Sie zwei oder drei vorbeschichtete 100-Millimeter-Petrischalen mit 10 Millilitern der Zellsuspension.
Inkubieren Sie in einem befeuchteten Inkubator bei 37 Grad Celsius unter 5 % Kohlendioxid.
Erneuern Sie das Nährmedium in einer Laminar-Flow-Haube unter sterilen Bedingungen mit 10 Millilitern warmem Mbb 27 low medium.
Inkubieren Sie 2 Tage lang in einem befeuchteten Inkubator bei 37 Grad Celsius unter 5% Kohlendioxid.
Um das OCM zu entnehmen, sammeln Sie den Überstand, der Oligodendrozyten-sezernierte Faktoren enthält. Sterilisieren Sie das OCM mit einem 0,22-Mikron-Filter.