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DOI: 10.3791/52722-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Diese Protokollinformationen ein Verfahren zur extrazellulären Vesikeln (EVs), kleine membranöse Teilchen aus Zellen freigesetzt zu isolieren, von so wenig wie 10 ul Serumproben. Dieser Ansatz umgeht die Notwendigkeit von Ultrazentrifugation, nur wenige Minuten von Testzeit erfordert und ermöglicht die Isolation von Elektrofahrzeugen aus Proben von begrenzten Mengen.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, extrazelluläre Vesikel mit Hilfe einer papierbasierten Plattform zu isolieren. Dies wird erreicht, indem zunächst mit zwei Polystyrolplatten mit zirkulärer Zellulose laminiert wird, wobei Papierausschnitte auf einer Anordnung von registrierten Durchgangslöchern ausgerichtet sind. Der zweite Schritt besteht darin, Moleküle, die extrazelluläre Vesikel an die Papiertestzone binden würden, chemisch zu konjugieren.
Anschließend kann die biologische Probe direkt auf die Papiertestzone pipettiert werden, und nach dem Spülschritt werden extrazelluläre Vesikel isoliert. Der letzte Schritt besteht darin, eingefangene extrazelluläre Vesikel mittels Elektronenmikroskopie, Eliza oder Transkriptomanalyse zu charakterisieren. Letztendlich können Untergruppen extrazellulärer Vesikel aus nur 10 Mikroliter großen Serumproben gereinigt und konzentriert werden.
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