Charakterisierung von Thymic Einschwingzeit Vorläufern in der Mouse Embryo Verwendung In Vivo Und In-vitro- Assays

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Phänotyp-Kinetik der Entstehung und die Anzahl der T-Zellen zu analysieren, die von E 13 oder E 18 thymusansiedelnden Vorläuferzellen produziert werden. Dazu werden zunächst die Thymuslappen aus Mausembryonen E 13, E 14 und E 18 isoliert. Im zweiten Schritt werden die E 14 Thymuslappen bestrahlt und anschließend mit flusssortierten E 13 oder E 18 Zellen für 48 Stunden in einem hängenden Tropfen besiedelt.

Im letzten Schritt werden die besiedelten Lappen unter die Nierenkapsel von adulten Zöliakie-3-Knockout-Mäusen transplantiert. Letztendlich kann die Durchflusszytometrie verwendet werden, um das Vorhandensein der E 13 und E 18 thymusabsetzenden Vorläufer im Blut der chimären Tiere zu beurteilen. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber unseren bestehenden Methoden, wie z.B. der in vitro T-Zellkultur auf Sinuszellen, besteht darin, dass diese Technik die Methoden kombiniert, die eine vollständige T-Zell-Reifung aus definierten Vorläuferzellen in einem dreidimensionalen Assay ermöglichen, mit der Transplantation von Organkulturen des Thymusorgans in intakten Empfängermäusen, was die Bewertung der Differenzierung und Funktion der Thymus-Vorläuferzellen und der Nachkommen ermöglicht.