Von Konstrukten Crystals - Auf dem Weg zu Strukturbestimmung von β-Fass-Außenmembranproteine

Das übergeordnete Ziel dieser Methode ist es, Milligramm-Mengen an Beta-Fass-Proteinen der äußeren Membran zu erhalten, die kristallisieren und defraktieren. Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Faltung und des Transports von Membranproteinen zu beantworten, z. B. wie Beta-Fass-Proteine in Zellmembranen eingefügt werden. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie robust für Beta-Barrel-Proteine ist.

Im Allgemeinen werden Personen, die mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, Schwierigkeiten haben, da die Auswahl der Reinigungsmittel für die Reinigung, Kristallisation und Zerlegung eine Herausforderung darstellt. Jeremy Guerin, ein Postdoc aus dem Labor von Susan Buchanan, wird das Verfahren demonstrieren, neben mir und meinen Kollegen im Labor. Beginnen Sie dieses Verfahren mit der Konstruktion eines T7-Expressionsvektors, der das Codon-optimierte Ziel-Außenmembranprotein (OMP-Gen) für die In-vivo-Expression auf der Membran enthält, wie im Textprotokoll beschrieben.