Abstimmen eines Parallel Segmented Flow Säule und Aktivieren von Mehrfachanalysen

Das übergeordnete Ziel dieses HPLC-Verfahrens ist es, eine parallel segmentierte Flusssäule so abzustimmen, dass eine Multiplex-Detektion möglich ist. Diese Methode beantwortet Schlüsselfragen in den Bereichen Gesundheit und Wohlbefinden, Umweltwissenschaften, Forensik und alle Bereiche, die die Analyse komplexer Proben erfordern, wie z. B. die Bioforschung. Diese Technik ermöglicht eine umfassende Probenanalyse und liefert gleichzeitig Informationen über die chemische und bioaktive Natur von Substanzen in komplexen Gemischen.

Die Multi-Detektionsprotokolle ermöglichen zudem eine schnelle Analyse. Diese Methode ermöglicht die Entwicklung von Strategien zur Definition des chemischen Fingerabdrucks komplexer Mischungen wie Kaffee und Wein, die es den Herstellern ermöglichen, den Unterschied zwischen ihren Produkten und billigen gefälschten Sorten zu erkennen. Anfangs mag es unorthodox erscheinen, nicht die gesamte Probe an nur einen Detektor zu senden, um eine genaue Analyse zu erhalten.

Die Analytkonzentration in jedem Strömungsstrom ist jedoch höher als die Gesamtströmung einer herkömmlichen Säule. Richten Sie das HPLC-Gerät zunächst mit 100 % UE-Wasser und reinem Methanol für die mobilen Phasen A bzw. B ein. Wenn ein MS-Detektor verwendet werden soll, fügen Sie 0,1 % Ameisensäure zu beiden mobilen Phasen hinzu und spülen Sie dann die HPLC-Pumpen gemäß den Anweisungen des Herstellers.

Montieren Sie die MS UV VS. Und DPPH-Detektoren. Gemäß den Anweisungen des Herstellers. Stellen Sie sicher, dass die Komponenten so angeordnet sind, dass das Totvolumen in den Detektorleitungen minimal ist.

Stellen Sie dann die Wellenlänge des UV-VISTA-Detektors auf die hier für die Probe spezifische Wellenlänge ein. 280 Nanometer für den MS-Detektor. Verwenden Sie den positiven Modus für die Gesamtionenzählung oder die TIC-Analyse mit der Vollscan-Erkennungsmethode.

Äquilibrieren Sie die Temperatur und den Gasfluss des MS-Detektors auf die folgenden Werte. Verdampfertemperatur von 500 Grad Celsius, Kapillartemperatur von 350 Grad Celsius, Hilfsgasstrom von 40 Einheiten, Sweep-Gasfluss von fünf Einheiten, Mantelgasrate von 60 Einheiten und Sprühspannung von 3,5 Kilovolt. Zur Herstellung des DPPH-Radikalreagenzes werden zunächst 25 Milligramm DPPH-Radikal in 250 Millilitern Methanol in einem Messkolben gelöst.

Geben Sie 250 Mikroliter Ameisensäure in die Lösung und beschallen Sie die Lösung 10 Minuten lang. Decken Sie dann den Kolben und die Folie ab, um Lichteinwirkung zu vermeiden. Spülen Sie anschließend die Pumpe mit der DPPH-Radikallösung, wie vom Hersteller empfohlen, um das DPPH-Radikalsystem einzurichten.

Stellen Sie sicher, dass die Pumpenleitung am Einlass eines T-Stücks befestigt ist, und schließen Sie dann die 100-Mikroliter-Reaktionsspule an den Auslass des T-Stücks an. Befestigen Sie den Detektor am anderen Ende des ENC-Gehäuses der Reaktionsspule, der Reaktionsspule und einer Säulenheizung. Stellen Sie abschließend den DPPH-Radikal-UV-V-Detektor auf 520 Nanometer ein.

Um die parallele segmentierte Strömung oder PSF-Säule zu konstruieren, verbinden Sie zunächst den Säuleneinlass mit dem HPLC-Gerät. Verwenden Sie als Nächstes ein Stück Schlauch, um den zentralen Anschluss mit dem MS-Detektor zu verbinden. Verwenden Sie Schläuche mit den gleichen Abmessungen, um einen peripheren Säulenanschluss mit dem UV VS-Detektor und einen anderen mit dem T-Stück des DPPH-Radikaldetektionssystems zu verbinden.

Blockieren Sie alle ungenutzten Peripherieanschlüsse mit Spaltenstoppern. Passen Sie die Flussrate der HPLC auf einen Milliliter pro Minute der 100%mobilen Phase B für eine Säule von 4,6 Millimetern, einem Innendurchmesser und einer Länge von 250 Millimetern an. 20 Minuten lang äquilibrieren.

Um mit der Abstimmung des PSF-Systems zu beginnen, reißen Sie zuerst die leeren Auffanggefäße auf. Verwenden Sie diese Fläschchen, um die mobile Phase separat vom UV VS zu sammeln. Und DPPH-Radical-Ports. Notieren Sie sich die Entnahmezeit und sammeln Sie mindestens 500 Milligramm Lösungsmittel in jedem Gefäß.

Wiegen Sie anschließend die Sammelgefäße, um die Masse der mobilen Phase zu bestimmen, und dividieren Sie die Masse durch die Dichte des Methanols, um das Volumen der mobilen Phase zu berechnen, das an jedem Anschluss gesammelt wird. Bestimmen Sie abschließend die Durchflussrate zum MS-Detektor und berechnen Sie die Durchflussanteile aller Detektoren als Prozentsatz des Gesamtdurchflusses, wie im Textprotokoll angegeben. Wenn die Durchflussverhältnisse erheblich von den Idealwerten abweichen, fügen Sie bei Bedarf zusätzliche Schläuche hinzu, um den Gegendruck anzupassen, und wiederholen Sie den Erfassungs- und Berechnungsvorgang.

Stellen Sie abschließend die Durchflussrate der DPPH-Radikalreagenzpumpe so ein, dass sie der Durchflussrate des an den Detektor angeschlossenen Auslassanschlusses entspricht. Eine Multiplex-HPLC-Analyse wurde an einer Kaffeeprobe durchgeführt. Die Möglichkeit, DPPH-Radikale UV VS. Und Ms.Chromatogramme ermöglichen gleichzeitig eine einfache Abgleichung der Verbindungen in der Probe, die positiv auf das DPPH-Radikal reagiert haben

UV- vs. MS-Reaktionen auf der Grundlage der Retentionszeitausrichtung, bei der eine positive Reaktion vom MSS TIC-Detektor beobachtet wurde, wurde die Molekülmasse des Peaks aufgezeichnet. Die einfache Zuordnung von Peaks zwischen verschiedenen Detektionsprozessen ermöglicht eine schnelle und effizientere Form des Screenings und der Charakterisierung einer komplexen Probe wie z. B. Kaffee Sobald diese Technik beherrscht ist, kann sie in nur etwa einer Stunde eingerichtet und nach diesem Verfahren für die Probenanalyse bereit sein. Andere Detektoren wie die Brechungsindex-Fluoreszenz und chemisch basierte Detektion wie die chemische Lumineszenz können verwendet werden, um zusätzliche Probeninformationen zu erhalten.

Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie erkennen, wie wichtig Multiplexing-Detektionsprozesse sind, um ein besseres Verständnis einer komplexen Probe zu erlangen. Darüber hinaus ist die Multiplex-Detektion mit parallel segmentierten Strömungssäulen eine äußerst effiziente Methode zur Bioexploration.