Abstimmen eines Parallel Segmented Flow Säule und Aktivieren von Mehrfachanalysen

Das übergeordnete Ziel dieses HPLC-Verfahrens besteht darin, eine parallel segmentierte Flusskolonne einzustellen, um eine multiplexe Detektion zu ermöglichen. Diese Methode beantwortet zentrale Fragen in den Bereichen Gesundheit und Wohlbefinden, Umweltwissenschaften, Forensik sowie weiteren Gebieten, die die Analyse komplexer Proben wie die biochemische Entdeckung erfordern. Diese Technik ermöglicht eine umfassende Probenanalyse und liefert gleichzeitig Informationen über die chemischen und bioaktiven Eigenschaften von Substanzen in komplexen Gemischen.

Die Multidetektionsprotokolle ermöglichen ebenfalls eine schnelle Analyse. Diese Methode erlaubt die Entwicklung von Strategien zur Bestimmung des chemischen Fingerabdrucks komplexer Gemische, wie beispielsweise Kaffee und Wein, wodurch Hersteller ihre Produkte von billigen Fälschungen unterscheiden können. Anfangs mag es unkonventionell erscheinen, die gesamte Probe nicht zur genauen Analyse an nur einen Detektor zu senden.

Jedoch ist die Analytkonzentration in jedem Flussstrom höher als im Gesamtflussstrom einer herkömmlichen Säule. Richten Sie zunächst das HPLC-Gerät mit 100 % UE-Wasser und reinem Methanol als mobile Phasen A bzw. B ein. Falls ein MS-Detektor verwendet werden soll, geben Sie 0,1 % Ameisensäure zu beiden mobilen Phasen hinzu und spülen Sie die HPLC-Pumpen gemäß den Anweisungen des Herstellers.

Bauen Sie die MS-UV-VIS- und DPPH-Detektoren zusammen, wie in der Bedienungsanleitung des Herstellers beschrieben. Stellen Sie sicher, dass die Komponenten so angeordnet sind, dass das Totvolumen in den Detektorleitungen minimal ist.

Danach stellen Sie die Wellenlänge des UV-VISTA-Detektors auf die für die Probe spezifische Wellenlänge ein. 280 Nanometer für den MS-Detektor. Verwenden Sie den positiven Modus für die Gesamtionenzählung oder TIC-Analyse mit der Vollscan-Detektionsmethode.

Stellen Sie die Temperatur und den Gasfluss des MS-Detektors auf folgende Werte ein: Verdampfertemperatur von 500 Grad Celsius, Kapillartemperatur von 350 Grad Celsius, Hilfsgasfluss von 40 Einheiten, Spülgasfluss von fünf Einheiten, Mantelgasflussrate von 60 Einheiten und Sprühspannung von 3,5 Kilovolt. Um das DPPH-Radikal-Reagenz vorzubereiten, lösen Sie zunächst 25 Milligramm DPPH-Radikal in 250 Milliliter Methanol in einer Messkolben.

Fügen Sie 250 Mikroliter Ameisensäure zur Lösung hinzu und beschallen Sie die Lösung 10 Minuten lang. Danach decken Sie den Kolben ab und umwickeln ihn mit Aluminiumfolie, um eine Lichteinwirkung zu verhindern. Als Nächstes spülen Sie die Pumpe gemäß den Herstellerangaben mit der DPPH-Radikallösung durch, um das DPPH-Radikalsystem einzurichten.

Stellen Sie sicher, dass die Pumpenleitung am Einlass eines T-Stücks befestigt ist, und verbinden Sie dann die 100-Mikroliter-Reaktionswendel mit dem Auslass des T-Stücks. Befestigen Sie den Detektor am anderen Ende der Reaktionswendel ENC-Gehäuse, der Reaktionswendel und einem Säulenvorwärmer. Stellen Sie abschließend den DPPH-Radikal-UV-V-Detektor auf 520 Nanometer ein.

Um die parallel segmentierte Fluss- oder PSF-Säule aufzubauen, verbinden Sie zuerst den Säuleneingang mit dem HPLC-Gerät. Verbinden Sie anschließend den mittleren Port über ein Stück Schlauch mit dem MS-Detektor. Verwenden Sie Schläuche mit denselben Abmessungen, um einen peripheren Säulenanschluss mit dem UV-VIS-Detektor und einen weiteren mit dem T-Stück des DPPH-Radikal-Detektionssystems zu verbinden.

Blockieren Sie alle ungenutzten Peripherieanschlüsse mit Säulenschließstopfen. Stellen Sie die Flussrate der HPLC auf eine Milliliter pro Minute von 100 % mobiler Phase B für eine Säule mit 4,6 Millimetern Innendurchmesser und einer Länge von 250 Millimetern ein. Puffern Sie 20 Minuten lang ein.

Um das PSF-System einzustellen, beginnen Sie damit, leere Sammelgefäße vorzubereiten. Sammeln Sie mit diesen Gefäßen getrennt das mobile Phaseneluat aus den Anschlüssen der UV-VS- und DPPH-Radikal-Detektoren. Notieren Sie den Zeitraum der Probensammlung und sammeln Sie mindestens 500 Milligramm Lösungsmittel in jedem Gefäß.

Als Nächstes wiegen Sie die Sammelgefäße, um die Masse der mobilen Phase zu bestimmen, und teilen Sie die Masse durch die Dichte von Methanol, um das Volumen der mobilen Phase zu berechnen, das von jedem Port gesammelt wurde. Bestimmen Sie abschließend die Durchflussrate zum MS-Detektor und berechnen Sie die Durchflussanteile aller Detektoren als Prozentwert des Gesamtdurchflusses gemäß dem schriftlichen Protokoll. Falls die Durchflussanteile erheblich von den idealen Werten abweichen, fügen Sie gegebenenfalls zusätzliche Schläuche hinzu, um den Gegendruck anzupassen, und wiederholen Sie den Sammel- und Berechnungsvorgang.

Schließlich sollte die Flussrate der DPPH-Radikal-Reagenzpumpe so eingestellt werden, dass sie der Flussrate des Auslasshakens entspricht, der mit dem Detektor verbunden ist. Eine multiplexe HPLC-Analyse wurde an einer Kaffeeprobe durchgeführt. Die Fähigkeit, DPPH-Radikal-UV- und MS-Chromatogramme gleichzeitig aufzuzeichnen, ermöglicht es, die Verbindungen in der Probe, die auf das DPPH-Radikal positiv reagiert haben, leicht den UV- vs.

Und MS-Antworten, die auf der Retentionszeit-Korrektur basieren, wobei eine positive Antwort vom MSS-TIC-Detektor erfasst wurde, führten zur Aufzeichnung der molaren Masse des Peaks. Die einfache Zuordnung von Peaks zwischen verschiedenen Detektionsverfahren ermöglicht eine schnelle und effizientere Form der Screening- und Charakterisierung komplexer Proben wie Kaffee. Sobald die Methode beherrscht ist, kann sie innerhalb von etwa einer Stunde eingerichtet und für die Probenauswertung bereitgemacht werden. Im Anschluss an dieses Verfahren können weitere Detektoren wie Refraktionsindex- oder Fluoreszenzdetektoren sowie chemisch basierte Nachweisverfahren wie Chemilumineszenz verwendet werden, um zusätzliche Informationen über die Probe zu erhalten.

Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie die Bedeutung der Multiplex-Detektionsverfahren für ein besseres Verständnis einer komplexen Probe erkennen. Darüber hinaus ist die Multiplex-Detektion mithilfe paralleler segmentierter Flusskolonnen eine äußerst effiziente Methode, um biologische Erkundungen durchzuführen.