Name: Abstimmen eines Parallel Segmented Flow Säule und Aktivieren von Mehrfachanalysen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: Lernen Sie die Abstimmung einer Parallel Segmented Flow Säule für die Multiplex-Detektion in der HPLC. Diese Methode ermöglicht die schnelle Analyse komplexer Proben wie Kaffee und Wein zur chemischen Fingerabdruckbildung.

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Diese Arbeit wurde unterstützt von UWS und ThermoFisher Scientific. Einer der Autoren (DK) bedankt sich für den Erhalt eines Australian Postgraduate Award.

Hinweis: Dieses Protokoll enthält eine Anleitung, wie man ein PSF-Säule auf einem HPLC-System in Verbindung mit mehreren Detektoren zur Mehrfachdetektion zu verwenden. Das Protokoll geschrieben wurde unter der Annahme der Leser grundlegende Kenntnisse und Erfahrung in der Chromatographie und HPLC verschiedenen Nachweismethoden. Achtung: Bitte den Sicherheitsdatenblätter (MSDS) für alle Materialien und Reagenzien beziehen sich vor der Verwendung (dh MSDS für Methanol). Achten Sie darauf, den Einsatz aller geeigneten Sicherheitspraktiken beim Umgang mit Lösungsmitteln und High Performance Liquid Chromatography (HPLC) Laufmittel. Stellen Sie sicher, angemessene Nutzung von Engineering-Kontrollen der HPLC, Analysenwaage und Detektor Instrumentierung, und sorgen für die Verwendung von persönlicher Schutzausrüstung (Schutzbrille, Handschuhe, Labormantel, in voller Länge Hosen und geschlossene Schuhe). 1. Setup-HPLC-Instrument <ol><li> Bereiten Sie die HPLC-Instrument mit hochreinem Wasser (zB 100% Milli-Q-Wasser) für line A und 100% Methanol Linie B als mobile Phase und bereinigen die Pumpen nach Hersteller Anforderung. Wenn eines der verwendeten Detektoren MS, da es hier mit 0,1% Ameisensäure zu beiden mobilen Phasen A und B. </li><li> Die HPLC instrumental Komponenten und Detektoren, wie in 2 gezeigt an. Dies erfordert bequeme Platzierung der Detektoren in bezug auf die Säule, so dass das Totvolumen zwischen dem Detektor und Spalte zu minimieren. Flexibilität in das HPLC-System-Konfiguration ist wünschenswert. </li></ol> 2. Richten von UV-Vis und MS-Detektoren <ol><li> Stellen Sie die UV-Vis-Detektor auf die gewünschte Wellenlänge abhängig von der interessierenden Probe (beispielsweise 280 nm). </li><li> Legen Sie die MS-Detektor im positiven Modus für die Gesamtionenzahl (TIC) Analyse mit Full Scan-Erfassungsverfahren. Auch die folgenden MS-Parameter entsprechend anpassen: Verdampfertemperatur 500 ° C, Kapillartemperatur 350 ° C Mantelgas mit einer Rate von 60 Einheiten, Hilfsgasstrom eingestellt40 und fegen Gasstrom bei 5 Einheiten und Spritzspannung 3,5 kV. Diese Einstellungen können später für spezifische Benutzeranforderungen abhängig von der untersuchten Probe eingestellt werden. </li></ol> 3. Herstellung von 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl Radical (DPPH •) Reagenz-Setup von DPPH • System-Detektor <ol><li> Wiegt 25 mg DPPH • und lösen sich in 250 ml Methanol in einem volumetrischen Kolben. </li><li> Fügen Sie 250 ul von Ameisensäure zu dem DPPH • Reagenz. Bedecken Sie den Kolben in der Folie die Einwirkung von Licht zu verhindern. </li><li> Beschallen den Kolben, der die DPPH • Reagenz für 10 min. </li><li> Spülen Sie die DPPH • Pumpe mit der vorbereiteten DPPH • Reagenz gemäß Hersteller Anforderung. </li><li> Das DPPH • System nach Figur 2 durch Befestigen der Pumpleitung zu dem Einlaß eines T-Stück einzustellen. </li><li> Bringen Sie ein 100 ul Reaktionsschlange zu the Auslass des T-Stücks und das andere Ende der Reaktionsspule zum Detektor. </li><li> Encase Reaktionsspule in einer Säulenheizung und stellen Sie die Spaltenheizungstemperatur bis 60 ° C. </li><li> Stellen Sie die DPPH • UV-Vis-Detektor bis 520 nm. </li></ol> 4. Aufbau von PSF Spalte <ol><li> Verbinden des Einlasses des PSF Spalte zu der HPLC-Instrument. </li><li> Verbinden Sie den zentralen Anschluss mit dem MS-Detektor, mit einem 15 cm Länge von 0,13 mm id Schlauch. </li><li> Verbinden einer Peripherieschnittstelle zu der UV-Vis-Detektor unter Verwendung einer 15 cm-Länge von 0,13 mm id Schläuche. </li><li> Schließen Sie ein anderes Peripherieschnittstelle an das T-Stück des DPPH • Detektionssystem mit einem 15 cm Länge von 0,13 mm id Schlauch. </li><li> Blockieren Sie die unbenutzte Peripherieschnittstelle unter Verwendung einer Säule Stopper. </li><li> Bringen die Strömungsgeschwindigkeit des HPLC-Pumpe auf 1 ml min -1 auf 100% der Linie B - 100% Methanol (0,1% Ameisensäure). </li><li> Äquilibrieren der Säule mit dem 100% Methanol Mobil phase 20 Minuten für eine 4,6 mm ID x 250 mm Länge Spalte. Diese Zeit wird entsprechend den Abmessungen der anderen Spalten der Benutzer verwenden kann, skaliert. </li></ol> 5. Einstellen des PSF Spalte für Mehrfachanalysen <ol><li> Messen Sie die Gesamtmasse von mindestens zwei leere Sammelgefäße (eine für den Anschluss mit dem UV-Vis-Detektor und eine für die DPPH • Detektor) mit einer Analysenwaage. </li><li> Sammeln mobile Phase von der UV-Vis und den DPPH • Anschlüsse in zwei separate, vorgewogen Sammelgefäße (5.1). Notieren Sie sich die Zeit für die Sammlung. Sammeln Sie mindestens 500 mg des Lösungsmittels in jedem Gefäß. </li><li> Wiegen Sie die Sammelgefäße und bestimmen die Masse der mobilen Phase. Angesichts der Dichte von Methanol 0,791 g ml -1, bestimmen das Volumen der von jedem Port gesammelt mobilen Phase. </li><li> Mit dem Unterschied, das heißt, Nennpumpenaggregat Flussrate abzüglich der Fließgeschwindigkeit durch das DPPH • und UV-Vis Detector Flussöffnungen, den Volumenstrom zu dem MS-Detektor. Express jedem Strömungs Anteils als Prozentsatz des Gesamtdurchflusses. Hinweis: Im Idealfall sind die Strömungsprozente: um die MS 18% der Gesamtströmungsrate, um die UV-Vis 22%, auf das DPPH • Detektor 60%. </li><li> Wenn nicht, die Durchflussprozentsätze durch Änderung der Gegendruck auf die UV-Vis-Detektor. Zum Beispiel, wenn der Ablauf zu dem UV-Vis zu hoch ist, zu verringern, den Anteil durch Zugabe Eine 15 cm Schnitt von 0,13 mm id Schlauch mit dem Auslaß des UV-Vis-Detektor. Wiederholen Sie die Schritte 5.1 bis 5.5. </li></ol> 6. Schluss Setup-Bedingungen <ol><li> Die Durchflussrate des DPPH • Reagenzienpumpe zu der gleichen Strömungsgeschwindigkeit Verlassen der Austrittsöffnung zu der DPPH • Detektor verbunden. Anmerkung: Die PSF Säule mit UV-Vis gemultiplext DPPH • MS und ist nun bereit für die Analyse. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Diese Studie umfasst die Charakterisierung und Profilierung von Kaffee unter Verwendung von HPLC mit Multiplex-Nachweis unter Verwendung eines parallelen segmentierten Flusses (PSF) Spalte. Multiplex HPLC mit PSF Säulen ermöglicht die Charakterisierung und Identifizierung der wichtigsten chemischen Einheiten durch eine Verringerung der Daten Komplexität der Probe unter Gewinnung einen höheren Grad der molekülspezifischen Information in einem Bruchteil der Zeit, die unter Verwendung von herkömmlichen Mehrfachnachweisverf...

Aktive Flow Technology Columns Aktive Flow-Technologie (AFT) Chromatographiesäulen wurden kürzlich entwickelt, um Ineffizienz bei Trennungen mit Flußheterogenität 1-6 zu überwinden und auch zu Mehrfachdetektion zu ermöglichen. In diesem speziellen Kommunikations wir ausführlich die Betriebsprozess der parallel segmentiert Strom (PSF) Säule mit Multiplex-Detektion. Die wichtigsten funktionalen Vorteile der PSF Spalte sind: (1) die Strömung von der radialen Mittelbereich des Säulenbett von dem Peripheriegerät oder Wandbereich der Strömung isoliert ist, (2) das Volumen der mobilen Phase, die durch ein Erfassungs verarbeitet werden müssen, Quelle reduziert wird, und (3) Detektion Quellen können gemultiplext werden, um Probeninformationen ohne Einträufeln Detektionsverzögerungen für jeden Erfassungsvorgang oder nachfolgend erfordern die Spaltung eines Nachsäulenderivatisierung Strömung 7,8 erweitern. Das Schlüsselmerkmal in der Gestaltung der PSF Spalte, die eine ermöglichtV orteil gemultiplexter Detektion ist die neuartige Auslaßarmatur und Fritte Montage. 1 ist eine Fotografie des AFT Spalte im Vergleich zu einem herkömmlichen Spalte. Es ist wichtig zu verstehen, dass das Spaltverfahren unter Verwendung von parallelen segmentierten Flusssäulen ist nicht die gleiche wie Nachsäulenderivatisierung Strömung Spaltung erhalten. In einer post-Säule Strömung spaltete die gesamte Probe-Band von der Vorderkante zu den Extremitäten des Schwanzes wird gleichmäßig abgetastet (dh axial), wodurch, gleich in Bezug auf Effizienz und Empfindlichkeit jeder Strömungsstrom; der Betrag der Empfindlichkeit wodurch er geteilt durch die Anzahl spaltet. In PSF jedoch die Spaltprozess tastet das Band radial, axial nicht. Als solche sind die zentrale Öffnung tastet das Peakspitzen - die konzentrierten Bereich des Peaks. Somit ist die Empfindlichkeit hier höchste als Peak nicht durch die diffuse Tailing Bereich verdünnt. Die Probe durch Elution von den peripheren Ports ist nicht so effizient wie in der CentraL-Zone, aber, da das Band radial abgetastet, anstatt axial, ist die Breite der Spitze geringer als es der Fall für einen Abtastprozeß, der die Spitze in der Axialrichtung teil, dh eine Nachsäulenderivatisierung aufgeteilt werden. Daher ist die Empfindlichkeit mit einem konzentrationsabhängigen Detektor wird nicht reduziert. In der PSF-Spalte umfasst die Auslaßarmatur mehreren Austrittsöffnungen und an der Innenseite dieses Endstück ist ein ringförmiger Fritte gebracht. Der innere Abschnitt dieses ringförmigen Fritte Kanäle strömen aus der Kolonne über den radialen zentralen Auslaßöffnung, während der äußere radiale Teil der Auslassfritte Kanäle strömen aus der Kolonne über den peripheren Wandbereich oder Austrittsströmungsöffnungen. Die inneren und äußeren Abschnitte des Auslassfritte werden durch eine undurchlässige Barriere, die Querströmung zwischen diesen Strömungsbereichen 2 verhindert getrennt. Als Folge dieser Konstruktion der zentrale radiale Strömung durch das Säulenbett wird von den Wandbereich fließen ins abgetrenntide die Spalte. Der relative Anteil der Strömung aus diesen beiden Bereichen kann auf fast jedem gewünschten Verhältnis durch Druckregelung, um verschiedene funktionale Aspekte der Säule Technik wie Trennleistung oder die Nachweisempfindlichkeit zu optimieren variiert werden. Im wesentlichen stellt diese Konstruktion effektiv in dem größeren Format Spalte eine Spalte &quot;virtuelle&quot;, mit einem engeren Innendurchmesser und damit die Funktionen der Spalten als eine wahre wandlosen Spalte Überwindung Säulenbett Heterogenität und die Wandeffekte 9,10. Die Hauptvorteile der PSF-Säulen sind Verbesserungen in Säuleneffizienz, Minimierung des Lösungsverarbeitung zur Detektion Quelle (n) und damit eine Mehrfachdetektion. Ist jedoch ein zusätzlicher Vorteil, dass seit der Tailing und Fronting Regionen jeder Band aus dem Gesamt Elution entfernt Profile den gelösten Stoff bei Elution oder Detektion in einer höheren Konzentration, als es sonst für die gleichen s einzuhalten vorhanden istolut Einspritzung und der Konzentration Last auf einer herkömmlichen Säule, in Abhängigkeit von der Segmentierung Verhältnis eingesetzt. Als Folge gibt es oft eine Verstärkung der Signalintensität für Trennungen auf PSF Spalten 2 geführt beobachtet. In der Tat, wenn die Segmentierungsverhältnis so eingestellt wird, dass 25% der Strömung tritt aus jedem der vier Ausgangsanschlüsse, die Signalstärke, die mit ultraviolettem (UV) Detektion beobachtet weist praktisch genau die gleiche Signalintensität offensichtlich unter Verwendung eines herkömmlichen Spalte, wo die gesamte (100%) der mobilen Phase analysiert 7. Ferner eine Feinabstimmung des Austrittsverhältnis zwischen der zentralen und Wandströmungsbereiche ermöglicht die Säuleneffizienz zu optimieren. (1) die Durchflussrate, (2) die Segmentierung Verhältnis, und (3) der gelöste Stoff Retentionsfaktor: Die Gewinne in der Säuleneffizienz mit AFT Spalten können nicht auf einen einzelnen Wert anzugeben, da diese Effizienzgewinne sind eine Funktion der drei Faktoren zu beachten . Dennoch Effizienzgewinne im Vergleich zu konventionelle Spalten sind fast immer beobachtet und manchmal diese Gewinne sind mehr als 100% der Zahl der theoretischen Trennstufen 1,2. Durch die Manipulation der die Segmentierungsverhältnis erlaubt es dem Analysten effektiv anzupassen den Durchmesser der Säule &quot;virtuelle&quot;, und dies ist ein wichtiger Faktor in Bezug auf die Erkennung aktiviert. Beispielsweise wird eine virtuelle Durchmesser (id) -Säule 2,1 mm Innen aus physikalischer 4,6 mm ID-Säule hergestellt wird, wenn die Segmentierungsverhältnis 21% der mobilen Phase eluiert von der radialen zentralen Austrittsöffnung. Unter diesen Bedingungen führt die 2,1 mm-ID-Säule virtuelle mit einer Effizienz, die mehr als 70% größer ist als die herkömmlichen 2,1 mm-ID-Säule sein kann, abhängig von Durchflussmenge, und Stoffretentionsfaktor 10. Die aktuelle PSF Spalte Design, das für die Multiplex-Nachweis verwendet wird, umfasst ein 4-Port Auslassfitting, aber die Spalte kann versehen sein mit einem 2-Port-End-Montage auch begrenzt jedoch diese Erkennung to nur zwei Detektoren. Der Grundbetrieb dieser Spalten ist jedoch derselbe, außer daß vier Detektoren gleichzeitig zu dem 4-Port-Auslass PSF Spalte der Geltungsbereich zur Mehrfachdetektion gekoppelt werden. Abgesehen von Pre-und Post-Säule Verbindungsschläuche, die nur zusätzliche Anforderungen, um eine PSF Kolonne betrieben wird Schlauch bis in die Rand Auslassöffnungen verbunden werden kann, und ein Mittel, mit dem die Menge der mobilen Phase, die durch jedes Rohr gemessen werden kann, typischerweise entweder eine Massenmessung oder eine volumetrische Messung. Zur Erleichterung der Tuning, sollte der Innendurchmesser aller Abströmung Schläuche die gleiche sein. Das Strömungsverhältnis zwischen den peripheren und radialen zentralen Austrittsöffnungen wird dann durch die Verwendung von Druckregelung, indem einfach die Länge der Rohrleitung auf der Umfangsauslaufarmatur oder die Länge der Rohrpost Detektor auf der radialen zentralen Auslassöffnung befindet variiert. Multiplex-Nachweis unter Verwendung PSF Columns </strong&gt; Ein wichtiger Vorteil der PSF Spalten ist, dass jede der Austrittsaustrittsöffnungen können direkt auf ein Erfassungsquelle verbunden werden, wodurch Multiplex-Detektion. In einem gut gestalteten Nachweissystem eine einzelne Analyse mit Mehrfachdetektion können sachdienliche Informationen in Bezug auf die Art der Komponenten in der Probe bereitzustellen. Wichtig ist, dass zerstörende und zerstörungsfreie Prüfungen an genau der gleichen Zeit durchgeführt werden kann, ohne Erfassungsverzögerung. Dies ermöglicht die absolute Zuordnung von zum Beispiel Antioxidationsmittel mit DPPH • Reagens mit Komponenten beobachtet mit UV- und / oder Massenspektrometrie (MS) Erfassungsantworten 7,11 eluieren. Daher können vier unabhängigen Detektoren gleichzeitig mit entsprechenden Anteilen der Strömung zu jeder Detektor über jede der vier Auslaßöffnungen gerichtet betrieben werden. Da die Strömung durch diese Anschlüsse können Sie bequem die Menge des gelösten Stoffes Erreichen einer der Detektoren eingestellt werden können, um Anzug angepasst werdendie Empfindlichkeit des gegebenen Detektor Quelle. Es sollte jedoch angemerkt werden, dass die effizienteste Migration gelöster Stoff ist durch die radiale zentrale Auslaßöffnung beobachtet. Jedes der Peripheriegerätetore gleichwertige Abscheidegrad, die, wenn sie zu 25% durch jeden Port wird, ist nur geringfügig weniger effizient als eine herkömmliche Säule. Als solches ist es wichtig, dass das Mengendetektor eingestellt Probe von der radialen zentralen Austrittsöffnung zu analysieren. Beim Einrichten eines PSF Kolonne zwecks Multiplexdetektion gibt es eine Reihe von Überlegungen, die vorgenommen werden, um effiziente und hochwertige Ergebnisse erzielt werden müssen; dh Rohrabmessungen für jeden Port, Wahl, welche Port für einen Detektortyp und Durchflusseinstellung. Rohr Abmessungen für jeden Port In der Chromatographie spielt die Länge des Pfostens Spalte Schlauch eine entscheidende Rolle in der Effizienz und Leistung der Trennung. Große dead-Volumen infolge der langen oder breiten id Schlauch vom Säulenausgang zum Detektor wird in einem Verlust an Effizienz, Auflösung und Empfindlichkeit führen. Somit entsprechende Schlauchdimensionen bei der Einrichtung der PSF Spalte das maximale Potential der Bereitstellung effiziente Trennung zu gewährleisten und gleichzeitig die Vorteile des Multiplex erreichen, verwendet werden. Port-Detektor Figur 2 ist eine Darstellung eines beispielhaften Aufbau des Multiplexdetektion (Ultra Violet-Visible (U-Vis), Massenspektrometer (MS) und 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH •) Erkennung). Die Abbildung zeigt die zentrale Port wird der MS-Detektor angebracht ist, während die DPPH • und UV-Vis-Detektoren sind mit den peripheren Ports angeschlossen. Da die MS ist die empfindlichen Detektor der drei, zu fließen, um diesen Detektor wurde von der zentralen Auslassöffnung gerichtet ist. Wie DPPH • Erkennung ist selektiv auf die Presence von Antioxidantien und die am wenigsten empfindliche und besonders tolerant gegenüber der Bandverbreiterung, fließen, um diesen Detektor wurde von einer Peripherieschnittstelle gerichtet ist. Das UV-Vis war ein Sekundär &quot;Generika&quot; Detektors, so fließt dieser Detektor wurde von einer zweiten Peripherieschnittstelle gerichtet ist. Flow Adjustment Sobald die geeignete Rohre ist von einem Port zu Detektor angebracht ist, sind die Austrittsströmung von jedem der Detektoren auf das erforderliche Maß eingestellt werden kann. Ein einfacher Weg, um die Menge der Strömung, die aus von jedem Detektor zu messen, ist die Menge der mobilen Phase, die durch jeden Anschluss über einen gegebenen Zeitraum eluiert wiegen. So kann der Prozentsatz Fluss bestimmt werden, und die Strömungsverhältnisse kann entweder durch Verkürzung oder Verlängerung der Schlauch an der Ausgangsleitung auf die Detektoren angebracht entsprechend den Anforderungen der Detektoren der Wahl zu entsprechen angepasst werden. Verschiedene Detektoren verschiedene Anforderungen der Strömung beispielsweise die Durchflusszelle voneinen Fluoreszenzdetektor (FLD) nicht Strömungsgeschwindigkeit begrenzt, aber es muss darauf geachtet werden, einen Überdruck von der Strömungszelle zu vermeiden. Damit die Regelung von Strömung durch das FLD wird normalerweise durch Einstellen des Druckabfalls über der anderen Detektoren und der Rest der Strömung gelangt dann durch die FLD erreicht. Ein Detektor, der empfindlich für die Menge der Strömung, die abgegeben wird, ist die MS. Im Allgemeinen können aktuelle High-End-Massenspektrometer leicht verarbeiten rund 1 bis 1,5 ml / min mäßig wässrige mobile Phase. Oberhalb dieser Durchflussrate kann Hochwasser der Quelle machen die MS nicht mehr funktioniert. Allerdings ist die Nachweisempfindlichkeit in den meisten Massenspektrometer unter Verwendung von niedrigeren Durchflussraten profitiert; damit die PSF Stromteilung Funktionen sind sehr nützlich für Anwendungen mit MS-Detektion. Hohe Säulenvolumenströmen verwendet werden, aber mit Raumbelastungen niedrig, um den MS-Detektor transportiert. Abstimmen der Strömung zu dem MS-Detektor muss jedoch durch Einstellen des Druckabfalls vor dem gemacht werdenMS-Detektor, sondern als Beitrag MS. Hier ist die Verwendung von engen Bohrung Schlauch (0,1 mm id) sehr nützlich, da der Druck leicht ohne Zugabe unangemessen Totvolumen eingestellt werden. Abhängig von der Art des Detektors die Einstellung der Segmentierungsverhältnis kann entweder vor oder nach dem Detektor durchgeführt werden. Wenn ein zerstörungsDetektor, wie zum Beispiel UV-Vis verwendet wird, würde die Strömung in Prozent gemessen und abgestimmt Postdetektor sein. Wenn ein einzelner destruktiven Detektor ist in dem Multiplex-Einrichtung verwendet, die Durchflussprozent durch Rück Berechnung in Bezug auf andere Port Flussprozentsätze festgelegt. Ein Reagenz, basierend Detektor wie DPPH • verwendet wird, wird die Strömungs Prozent gemessen Post-Detektor ohne die Zugabe von Reagens; und wenn zwei oder mehr destruktiv Detektoren verwendet werden, dann das Strömungsverhältnis wird pre-Detektor gemessen. Detection-Systeme, die zusätzliche Instrumentierung, wie DPPH • erfordern, werden zusätzliche Systemdruck, die die Strömung verändern kannProzent einmal, um das Erfassungssystem angebracht ist. Daher sollten sich sorgfältig überlegen, Systemdruck von einer destruktiven Detektor, bei der Einstellung Durchflussprozent Pre-Detektor bezahlt werden. Unabhängig von der Stromverhältnis, das durch einen der Ports festgelegt ist, sollten quantitative Informationen über entsprechende Standardisierung erreicht werden. Sobald die Strömungsverhältnisse eingestellt werden, jedoch sind sie robust, und sie haben nicht einmal unter Gradientenelution Bedingungen 7 zu ändern, Das dieses Manuskript beiliegenden ausführlichen Video-Protokoll soll zeigen, wie man eine PSF Spalte Funktionieren in einem Multiplex-Modus der Erkennung verwenden und Melodie.

<table><tbody><tr><td>HPLC-Gerät</td><td></td><td></td><td>Mehrere Detektoren nach Wahl für die Multiplexdetektion. Detektoren der Wahl können zusätzliche Instrumente erfordern, z. B. z. B. , Pumpe.</td></tr><tr><td>HPLC-Säule mit parallelem segmentiertem Durchfluss</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Nicht definiert</td><td>Demnächst kommerzialisiertes</td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Jede Marke</td><td></td><td>HPLC-Grade</td></tr><tr><td>PEEK-Schläuche</td><td>Jede Marke</td><td></td><td>Verschiedene Längen und i.d.</td></tr><tr><td>Säulenstopper</td><td>Jede Marke</td><td></td><td>Zum Blockieren ungenutzter Peripherieanschlüsse.</td></tr><tr><td>PEEK-Röhrchenschneider</td><td>Jede Marke</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Analysenwaage Waage</td><td>Jede Marke</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stoppuhr</td><td>Jede Marke</td> Eluentensammelgefäße Jede Marke <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>1-2 ml Probenfläschchen jeder Marke können als Eluentensammelgefäße verwendet werden</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

abstimmen eines parallel segmented flow säule und aktivieren von mehrfachanalysen

Tuning a Parallel Segmented Flow Column and Enabling Multiplexed Detection

Die aktive Durchflusstechnologie (AFT) ist eine neue Form der Säulentechnologie, die entwickelt wurde, um die Strömungsheterogenität zu überwinden, die Trennleistung in Bezug auf Effizienz und Empfindlichkeit zu erhöhen und eine Multiplexdetektion zu ermöglichen. Bei dieser Form der AFT wird eine PSF-Säule (Parallel Segmented Flow) verwendet. Eine PSF-Säulenausgangsverschraubung besteht aus 2 oder 4 Anschlüssen, die gemultiplext werden können, um bis zu 4 Melder anzuschließen. Die PSF-Säule ermöglicht nicht nur eine Plattform für die Multiplex-Detektion, sondern auch die Kombination von destruktiven und zerstörungsfreien Detektoren, ohne zusätzliche Totvolumenschläuche, gleichzeitig. Die Durchflussmenge durch jeden Anschluss kann auch durch Druckmanagement an die Anforderungen eines bestimmten Detektors angepasst werden. Um eine Multiplexdetektion mit einer PSF-Säule zu erreichen, gibt es eine Reihe von Parametern, die gesteuert werden können, um eine optimale Trennleistung und Ergebnisqualität zu gewährleisten. Das heißt, die Rohrabmessungen für jeden Anschluss, die Wahl des Anschlusses für jeden Detektortyp und die Durchflusseinstellung. Dieses Protokoll soll zeigen, wie eine PSF-Spalte, die in einem Multiplex-Erkennungsmodus arbeitet, verwendet und optimiert wird.

Ein Multiplex-HPLC-Analyse wurde unter Verwendung eines AFT-Spalte in PSF-Modus (Abbildung 1) durchgeführt und wie in Abbildung 2 dargestellt eingestellt. Erlaubt Diese Art von Setup eine Kaffeeprobe gleichzeitig mit UV-Vis, DPPH • und MS in Gesamt analysiert werden Ion Count (TIC) Modus. Die Verbindungen der Kaffeeprobe, die DPPH • reagierte könnte dann leicht bis in den UV-Vis und MS angepaßt werden - TIC Antworten basierend auf der Ausrichtung der Haltezeit, wie...

Hier präsentieren wir ein Protokoll für den Betrieb und die Abstimmung von parallelen segmentierten Durchflusschromatographiesäulen, um eine Multiplexdetektion zu ermöglichen.

Abstimmen eines Parallel Segmented Flow Säule und Aktivieren von Mehrfachanalysen

Active flow technology (AFT) is new form of column technology that was designed to overcome flow heterogeneity to increase separation performance in terms ...

Das übergeordnete Ziel dieses HPLC-Verfahrens besteht darin, eine parallel segmentierte Flusskolonne einzustellen, um eine multiplexe Detektion zu ermöglichen. Diese Methode beantwortet zentrale Fragen in den Bereichen Gesundheit und Wohlbefinden, Umweltwissenschaften, Forensik sowie weiteren Gebieten, die die Analyse komplexer Proben wie die biochemische Entdeckung erfordern. Diese Technik ermöglicht eine umfassende Probenanalyse und liefert gleichzeitig Informationen über die chemischen und bioaktiven Eigenschaften von Substanzen in komplexen Gemischen.Die Multidetektionsprotokolle ermöglichen ebenfalls eine schnelle Analyse. Diese Methode erlaubt die Entwicklung von Strategien zur Bestimmung des chemischen Fingerabdrucks komplexer Gemische, wie beispielsweise Kaffee und Wein, wodurch Hersteller ihre Produkte von billigen Fälschungen unterscheiden können. Anfangs mag es unkonventionell erscheinen, die gesamte Probe nicht zur genauen Analyse an nur einen Detektor zu senden.Jedoch ist die Analytkonzentration in jedem Flussstrom höher als im Gesamtflussstrom einer herkömmlichen Säule. Richten Sie zunächst das HPLC-Gerät mit 100 % UE-Wasser und reinem Methanol als mobile Phasen A bzw

tuning-parallel-segmented-flow-column-enabling-multiplexed

Research

Forschung

JoVE Journal

Chemistry

Chemie

Ein automatisiertes Verfahren zur Identifizierung von geeigneten hydrophoben Interaktionschromatographie (HIC) Medien, die in dem Verfahren der Proteinreinigung verwendet werden vorgestellt. Das Verfahren nutzt eine Mitteldruck-Flüssigkeits-Chromatographie-System einschließlich automatisierter Puffer Blending, dynamisches Probenschleife Injektion, sequentielle Spalte Auswahl, Multi-Wellenlängen-Analyse-und Split-Fraktion Eluat Sammlung.

Automatisierte Hydrophobe Interaktions-Chromatographie Spaltenauswahl für den Einsatz in Protein Purification

Es wird ein Protokoll für die Verwendung von Reaktionsfluss-Hochleistungsflüssigkeitschromatographiesäulen für Methoden vorgestellt, die Post-Säulen-Derivatisierung (PCD) verwenden.

Nachsäulenderivatisierung Mit Reaktionsfluß High Performance Liquid Chromatography Columns

Hier präsentieren wir ein Protokoll für den Betrieb und die Optimierung der Active Flow Technology (AFT)-Säule im Curtain Flow (CF)-Modus für eine verbesserte Trennleistung.

Vorhang-Flow-Säule: Optimierung der Effizienz und Empfindlichkeit

Ein schnelles Protokoll für den proteolytischen Aufschluss mit einem hausgemachten Durchfluss-Tryptik-Mikroreaktor, der mit einem Elektrospray-Ionisations-Massenspektrometer (ESI) gekoppelt ist, wird vorgestellt. Die Herstellung des Mikroreaktors, der Versuchsaufbau und der Datenerfassungsprozess werden beschrieben.

Schnelle enzymatische Prozessierung von Proteinen für MS-Detektion mit einem Durchfluss-Mikroreaktor

Mehrfarbige Fluoreszenzdetektion in der Tröpfchenmikrofluidik beinhaltet typischerweise sperrige und komplexe Epifluoreszenzmikroskop-basierte Detektionssysteme. Hier beschreiben wir ein kompaktes und modulares mehrfarbiges Detektionsschema, das ein Array von optischen Fasern verwendet, um mehrfarbige Daten, die von einem einzigen Photodetektor gesammelt wurden, zeitlich zu kodieren.

Mehrfarbenfluoreszenzdetektion für Droplet Mikrofluidik Verwendung von Optical Fibers

Wir zeigen, eine mikrofluidische Plattform mit einem Elektrodennetz integriert Oberfläche, die resistive Pulserfassungs kombiniert (RPS) mit Codemultiplex-Vielfachzugriff (CDMA), Auffinden und Ausmessen von Partikeln in mehrere mikrofluidische Kanäle zu multiplexen.

Mikrofluidik-Plattform mit Multiplexed elektronische Sensoren für Raumverfolgung von Partikeln

Dieses Protokoll beschreibt die Implementierung eines asymmetrischen Detektions-Zeitstreck-Optikmikroskopiesystems für die Einzelzell-Bildgebung in ultraschnellen mikrofluidischen Strömung und seine Anwendungen bei der Bildgebungsdurchflusszytometrie.

Mikrofluidische Imaging-Durchflusszytometrie durch asymmetrische Detektion Zeitstreck-Optische Mikroskopie (ATOM)

Dieses Protokoll zeigt einen einfache, robuste und hohen Durchsatz Einzelmolekül Fluss-stretching Assay für das Studium eindimensionale (1D) Diffusion von Molekülen entlang DNA.

Einfach, Robust und hohen Durchsatz Molekül fließen Stretching Assay-Implementierung für das Studium Transport von Molekülen entlang DNA

Hier detailliert sind die Bedienung und Montage Protokolle der eine modulare mikrofluidische Screening-Plattform für die systematische Charakterisierung von kolloidalen Halbleiter Nanocrystal Synthesen. Durch einstellbaren System Arrangements kann hocheffiziente Spektren Sammlung Skalen 4 Größenordnungen Reaktionszeit innerhalb eines Transfer-gesteuerte Probenahme durchgeführt werden.

Eine modulare mikrofluidische Technologie für systematische Studien von kolloidalen Halbleiter-Nanokristallen

Hier stellen wir Ihnen ein Protokoll für das optimierte FlashPack Kapillarsäulenpackungsverfahren vor. Die Anwendung eines optimierten Protokolls auf ein gängiges 100-bar-Druckbomben-Setup ermöglicht ein 10-mal schnelleres Verpacken und Herstellen von langen Ultra-Hochleistungs-Kapillarsäulen.

Einfache Inhouse-Herstellung von Ultra-Hochleistungs-Kapillarsäulen mit dem FlashPack-Ansatz

Die visuelle Einzelmolekülbiochemie, die durch mikrofluidische Kammern untersucht wird, wird durch Glaszylinder, gasdichte Spritzen, stabile Verbindungen von Schläuchen zu Durchflusszellen und Beseitigung von Blasen durch Platzierung von Schaltventilen zwischen Spritzen und Schläuchen erheblich erleichtert. Das Protokoll beschreibt duale optische Fallen, die die Visualisierung von DNA-Transaktionen und intermolekularen Interaktionen ermöglichen.

Verwendung von zwei optischen Pinzetten und Mikrofluidik für Einzelmolekülstudien

Lernen Sie die Abstimmung einer Parallel Segmented Flow Säule für die Multiplex-Detektion in der HPLC. Diese Methode ermöglicht die schnelle Analyse komplexer Proben wie Kaffee und Wein zur chemischen Fingerabdruckbildung.

Abstimmen eines Parallel Segmented Flow Säule und Aktivieren von Mehrfachanalysen

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