Name: Identifizierung von Fettsäuren in Bacillus cereus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: Lernen Sie die Identifizierung von Fettsäuren in Bakterien ohne vorherige Reinigung. Diese Methode ermöglicht die Bestimmung von Methylverzweigungen und Doppelbindungen in Bacillus cereus.

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Die Autoren sind dankbar, dass Thomas Mison für seine technische Unterstützung und Rachel Kopec für das Manuskript zu revidieren.

1. Bakterienkulturen <ol><li> Bereiten Sie einen Rasen der Bakterien (Bacillus cereus Stamm ATCC 14579) durch Spreizen 100 ul einer Übernachtkultur des bei 30 ° C inkubiert Stamm in LB (Luria-Bertani - Medium), über die Oberfläche einer Platte von LB - Agar - Medium. Die Platte über Nacht bei 30 ° C. </li></ol> 2. ECL: Entspricht Kettenlänge <ol><li> Berechnen ECL wie folgt: <img alt="Gleichung" src="/files/ftp_upload/54960/54960eq1.jpg" /> mit: i, der gelöste Stoff von Interesse; n die Kohlenstoffzahl der geradkettigen gesättigten Fettsäuremethylester vor solute Eluieren I; n + 1, die Kohlenstoffzahl der geradkettigen gesättigten Fettsäuremethylester nach solute Eluieren I; RTI, Rtn, Rt (n + 1) die Retentionszeiten der FAME-Spitzen oben beschrieben. HINWEIS: Erhalten der Retentionszeiten von geradkettigen gesättigten Fettsäuren Methylester durch Injektion einer Mischung von Standards (BEIN ICH). </li></ol> 3. FAME Herstellung und Analyse <ol><li> Um Lipid Fettsäuren, Ernte Bakterienzellen zu erhalten , indem Kolonien von der Agar - Platte und übertragen 40 mg (Frischgewicht, das entspricht 10 9 lebenden Zellen) von Bakterien in einem 10 ml Glasröhrchen mit Schraubverschluss und PTFE - Dichtungen Schaben. </li><li> Führen Sie die Umesterung über die Esterbindung Methode 14,15 unten detailliert beschrieben. <ol><li> 5 ml 0,2 M KOH in Methanol zu den frischen Bakterienzellen und Inkubieren bei 37 ° C für 1 Stunde. Diese Reaktion besteht aus alkalischer Methanolyse, die Esterbindung in der Lipid Brechen und Fettsäuremethylester zu erzeugen. </li><li> 1 ml 1 M Essigsäure den pH-Wert auf 7,0 zu senken. Überprüfen Sie den pH-Wert mit pH-Teststreifen. </li><li> 3 ml Hexan FAMEs zu extrahieren. </li><li> Übertragen Überstand (organische Phase) in saubere Röhrchen und konzentriert durch Abdampfen bei Raumtemperatur unter einem kontinuierlichen Stickstoffstrom etwa 200 &amp; mgr; l zu erhalten,Extrakt. Übertragen Sie die Probe in ein GC-Fläschchen mit Einsatz. </li><li> Injizieren Extrakte in eine Gaschromatographie-Massenspektrometrie (GC-MS) System. </li></ol></li></ol> 4. GC / MS-Bedingungen <ol><li> Injizieren FAME Proben in ein GC-MS-Gerät ausgestattet mit einer Kapillarsäule ZB-WAX (Länge, 30 m, Durchmesser 0,25 mm; Filmdicke, 0,25 &amp; mgr; m). </li><li> Stellen Sie die Einspritzöffnung (in splitless Modus) Temperatur auf 250 ° C. Verwenden Helium als Trägergas mit einer linearen Geschwindigkeit von 37 cm / sec. Halten der Ofentemperatur bei 50 ° C für 1 min, erhöht auf 190 ° C mit einer Geschwindigkeit von 20 ° C / min, und weitere Steigerung auf eine Endtemperatur von 230 ° C mit einer Rate von 2 ° C / min. </li><li> Für die MS, notieren Sie die Massenspektren von Elektronen-Ionisation (EI) bei 70 eV, und stellen Sie den Erwerb des gesamten Ionenstrom zwischen 50 und 400 atomaren Masseneinheiten (amu) (2 Scans / s). </li><li> Wenn es erforderlich ist, injizieren excep DMOX und Picolinyl Derivate unter den gleichen Bedingungent die Temperaturprogramm Ofen wie folgt: DMOX: 50 ° C (1 min), 20 ° C / min bis 210 ° C und 2 ° C / min bis 240 ° C (5 min); Picolinyl: 6 ° C (1 min), 20 ° C / min bis 220 ° C und 2 ° C / min bis 250 ° C (20 min). </li></ol> 5. Picolinyl Ester Herstellung von FAME 16 <ol><li> Man dampft das FAME Auszug aus Kapitel 3 mit einem Stickstoffstrom (mindestens 10 mg trockenes Material) und in 1 ml trockenem Dichlormethan aufzulösen. </li><li> Bereiten einer 1,0 M Lösung von Kalium - ter t-butylat in Tetrahydrofuran. </li><li> Fügen Sie den FAME-Extrakt und 0,2 ml 3-pyridinemethanol bis 0,1 ml Lösung hergestellt in Schritt 5.2. </li><li> Die Lösung wird bei 40 ° C für 30 min in einem geschlossenen Glasfläschchen. </li><li> Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur abgekühlt, gereinigt VE - Wasser (2 ml, siehe Materialien Tabelle) und Hexan (4 ml). Mischen Sie mit einem Wirbel, erlauben Phase zu trennen und sammeln die organische Phase ab. </li><li> DRy durch wasserfreiem Natriumsulfat, bis die organische Phase Zugabe ist vollkommen klar. Bringen Sie es in ein sauberes Röhrchen. Dann verdampfen zu 200 ul. Übertragen Sie die Probe in ein GC-Fläschchen mit Einsatz. </li></ol> 6. DMOX Herstellung von FAME 17 <ol><li> Man dampft das FAME Auszug aus Kapitel 3 mit einem Stickstoffstrom (mindestens 10 mg trockenes Material). </li><li> Zum Trockenextrakt FAME, fügen 250 mg 2-Amino-2-Methyl-1-Propanol. Spülen Sie das Gefäß mit Stickstoff, fügen Sie einen Stopper, und legen Sie sie in einem Heizblock über Nacht bei 190 ° C. </li><li> Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurden 3 ml Dichlormethan zu dem Rohr und 5 ml gereinigtes deionisiertes Wasser (siehe Materialien Table). </li><li> Schütteln Sie für die Phasentrennung und entfernen Sie dann die wässrige Phase. </li><li> Die organische Phase wird mit 5 ml Wasser. Schütteln Sie für die Phasentrennung und entfernen Sie dann die wässrige Phase. </li><li> Trocknen mit wasserfreiem Natriumsulfat, bis die organische Phase Zugabe ist vollkommen klar undübertragen sie in ein sauberes Röhrchen. Man dampft unter einem Stickstoffstrom, bis ein Volumen von 200 &amp; mgr; l zu erreichen. Übertragen Sie die Probe in ein GC-Fläschchen mit Einsatz. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.

Die FAs Chromatogrammprofile in Tabelle 1 dargestellten entsprechen B. cereus ATCC 14579 auf einer Agarplatte Oberfläche gewachsen. Ähnliche Profile wurden erhalten , wenn das Bakterium in belüfteten flüssigen Medien bei der gleichen Temperatur 8 gezüchtet wurde. Im Falle von in flüssigen Medien gezüchtet Bakterien, die bakterielle Biomasse durch Zentrifugation von dem Wachstumsmedium gesammelt und kann nach zuvor beschriebenen Protokollen gewaschen werden je nach Wachstumsbedingunge...

Fettsäuremethylester (FAME), Gaschromatographie (GC) ist ein wesentliches Verfahren zur Lipid Charakterisierung. Sie trennt sich rasch und quantifiziert die verschiedenen Fettsäuren (FAs) einer Probe nach einer kurzen Extraktionsschritt. Derivate von Methylester sind sehr volatil, stabil und inert gegenüber der chromatographischen Säule, wodurch vermieden wird Tailing Spitzen. Ihre Identifizierung ist ziemlich einfach, wenn die Probe von bekannten FAs besteht, weil die chromatographischen Profile entweder veröffentlicht oder im Vergleich zu Standards. Darüber hinaus ist die wiederholte Injektion von Kalibrierungsstandards zur Quantifizierung verschiedener FAs nicht erforderlich, da die fast konstante Reaktion auf Flammenionisationsdetektion (FID) 1. Neben FID stellt Massenspektrometrie (MS) Detektion einer komplementären Reihe von Informationen zu FAME bestätigen. Wenn jedoch FAMEs berechnet werden unter Verwendung Elektronenionisation (EI), die resultierenden Spektren erlauben nicht immer für the Identifizierung von FA Feinstruktur. Beispielsweise Verzweigungsposition (dh eine verzweigte Methylgruppe) ist schwer vorherzusagen , da die diagnostische Ionen schwer 1 und die charakteristische Änderung Ionenabundanz in Ziel zu erfassen ist maschinenabhängig, was die Verwendung von Massenspektren Bibliotheken 2 verhindert wird . Eine weitere Herausforderung liegt in der Doppelbindung Position zu identifizieren, weil EI-Doppelbindung Migration verursacht. So FA Isomere mit Doppelbindung Positionen unterschiedlicher nicht durch ihre Massenspektren unterschieden werden. Glücklicherweise andere Werkzeuge wurden für FA Identifikation entwickelt. Zum Beispiel kann die Anwesenheit und die Position oder der Doppelbindungen in FAs Verzweigungs kann durch Berechnen der äquivalenten Kettenlänge (ECL) 3 gemutmaßt werden. Andere Derivatisierung Verfahren führen zu unterschiedlichen Massenspektren, abhängig von der Position einer Doppelbindung oder einer verzweigten Methylgruppe ist. 4,4-Dimethyl oxazolinderivaten (DMOX) 4 ermöglichen easy Identifizierung der Position der einfach ungesättigten Fettsäure-Doppelbindungen. 3-pyridylcarbinyl ester (Picolinyl ester) Derivate zur eindeutigen Identifizierung der Lage von Methyl ermöglichen verzweigten FAs 5. Kombination von chromatographischen Retention (ECL) und Massenspektren (DMOX und Picolinyl) Information erlaubt die Identifizierung der meisten FAs ohne die Notwendigkeit , komplexe Reinigungsverfahren zu verwenden, wie 1 für die Kernspinresonanz (NMR) -Spektrum, das unhinterfragbares Methode zur strukturellen Charakterisierung erforderlich . Bakterien der Gattung Bacillus, die einige menschliche und tierische Pathogene umfassen, können sehr unterschiedliche Nischen zu kolonisieren und werden daher in der Umwelt weit 6 verteilt. Unter der Gattung Bacillus, der Zusammensetzung FA durch die ökologische Nische der Spezies mit Modulationen in FA Muster beeinflusst zu einem breiten Spektrum von Umgebungsänderungen (zB Wachstumsmedium, Temperatur, anzupassenpH, etc.) 7-9. Aufgrund der relativen Homogenität des FA Muster über Spezies der Gattung Bacillus während des Wachstums in standardisierten Bedingungen, Bestimmung der FA Zusammensetzung ist eines der wesentlichen Kriterien verwendet , um die Bacillus - Arten definieren. Ein einzigartiges Merkmal der Gattung Bacillus ist die Fülle an verzweigtkettigen FAs enthält 12-17 Kohlenstoffe 10-12 mit dem Verhältnis zwischen iso und anteiso Isomere ein wichtiger Faktor für die Anpassung an Umweltbedingungen zu sein. Bacillus species anzupassen auch gegenüber Umweltschwankungen , indem der Anteil an ungesättigten Fettsäuren zu verändern. In einigen Arten, wie Bacillus cereus, zwei Fettsäure-Desaturasen schaffen Doppelbindungen in unterschiedlichen Positionen der Alkylkette 13 mit unterschiedlichen Rollen in Anpassung 9. Das Beispiel des Bacillus genus veranschaulicht die Bedeutung der eben die Doppelbindung Position zu identifizieren und FA Verzweigung. Sammelnhungsweise, hat Identifizierung von Bacillus FA Muster mehrere nützliche Anwendungen. Hier schlagen wir eine neue GC-MS - Ansatz für Bacillus FA Mustererkennung, die die inhärenten Grenzen eines klassischen GC-MS - Analyse überwindet. Dieser innovative Ansatz kann direkt auf rohen biologischen Material verwendet werden, und besteht aus einer Kombination von bestehenden Techniken: Informationen über die Retentionszeiten (ECL) und Massenspektren verschiedener FAs Derivate (FAME, DMOX und Picolinyl-Ester). Wir verwenden die folgende FA-Nomenklatur. i, a und n iso anzuzeigen, verzweigten anteiso Methyl und geradkettige Fettsäure, respectively. Ungesättigte FAs wurden durch C genannt: d, wobei C die Zahl der Kohlenstoffatome in der Fettsäure ist und d die Anzahl der Doppelbindungen ist. Δ x gibt die Position der Doppelbindung, wobei die Doppelbindung auf der x - ten Kohlenstoff-Kohlenstoff - Bindung befindet, von der Carbonsäure Ende zählen.

<table><tbody><tr><td>GC/MS</td><td>Shimadzu</td><td>QP2010</td><td></td></tr><tr><td>Kapillarsäule ZB WAX</td><td>Phenomenex</td><td>7HG-G007-11</td><td>30 m x 0.25 mm x 0.25&nbsp; &Mikro; m</td></tr><tr><td>Methanol Lichrosolv</td><td>VWR</td><td>1.06018.2500</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumhydroxid</td><td>Aldrich</td><td>P1767</td><td></td></tr><tr><td>THF</td><td>Hipersolv Chromanorm</td><td>28559.320</td><td></td></tr><tr><td>Dichlormethan</td><td>Hipersolv Chromanorm</td><td>23373.320</td><td></td></tr><tr><td>Hexan</td><td>Hipersolv Chromanorm</td><td>24575.320</td><td></td></tr><tr><td>3-Pyridinemethanol</td><td>Aldrich</td><td>P6-680-7</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumtertiobutoxid</td><td>Aldrich</td><td>156671</td><td></td></tr><tr><td>2-Amino-2-methyl-1-propanol</td><td></td><td>A-9879</td><td></td></tr><tr><td>MilliQ Academic</td><td>Millipore</td><td>ZMQS50001</td><td></td></tr><tr><td>Bakteriensäuremethylester (BAME) Mix</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47080-U Supelco</td><td></td></tr></tbody></table>

identifizierung von fettsäuren in<em&gt; bacillus cereus</em

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Die Bacillus - Arten enthalten Kette und ungesättigte Fettsäuren (FAs) mit unterschiedlichen Positionen der Methylverzweigung verzweigten (iso oder anteiso) und der Doppelbindung. Änderungen in FA Zusammensetzung, die eine entscheidende Rolle bei der Anpassung der Bakterien an ihre Umgebung zu spielen. Diese Modifikationen beinhalten eine Änderung in dem Verhältnis von iso gegen anteiso FAs verzweigt, und der Anteil an ungesättigten FAs relativ zu gesättigten FAs mit Doppelbindungen an spezifischen Positionen erstellt. Genaue Identifizierung des FA Profil ist notwendig , um die Anpassungsmechanismen von Bacillus - Spezies zu verstehen. Viele der FAs von Bacillus sind nicht im Handel erhältlich. Die vorgeschlagene Strategie identifiziert hierin FAs von Informationen über die Retentionszeit (Berechnung der äquivalenten Kettenlänge (ECL)) mit den Massenspektren von drei Arten von FA-Derivaten kombiniert: Fettsäuremethylester (FAME), 4,4-Dimethyl-oxazolin Derivate (DMOX) und3-pyridylcarbinyl Ester (Picolinyl). Diese Methode kann die FAs ohne die Notwendigkeit erkennen, das Unbekannte FAs zu reinigen. Vergleichen chromatographischen Profile von FAME hergestellt aus Bacillus cereus mit einem handelsüblichen Gemisch von Standards ermöglicht die Identifizierung von geradkettigen gesättigten FAs, die Berechnung der ECL, und Hypothesen über die Identität des anderen FAs. im Vergleich zu linearen gesättigten FAs mit der gleichen Anzahl von Kohlenstoffatomen FAMEs verzweigter gesättigter FAs, iso oder anteiso, in der ECL, eine konstante negative Verschiebung anzuzeigen. FAMEs ungesättigter FAs kann durch die Masse ihrer Molekülionen, und führen zu einer positiven Verschiebung der ECL im Vergleich zu den entsprechenden gesättigten FAs detektiert werden. Die Verzweigungsposition von Fas und die Doppelbindung Position von ungesättigten FAs kann durch die elektronen Ionisations-Massenspektren von Picolinyl und DMOX Derivate bzw. identifiziert werden. Dieser Ansatz identifiziert die unbekannten gesättigten Zweiged FAs, ungesättigte geradkettige FAs und ungesättigte verzweigte FAs aus dem cereus Extrakt B..

Die Strategie der FA Identifizierung von Bakterienzellen ist in 1 dargestellt. Jeder Schritt liefert ergänzende spektrale Information oder Informationen über chromatographische Retention. Schritt 1 besteht aus vorläufigen FA Identifizierung einer Standardlösung verwenden. Schritt 2 ermöglicht die Auslegung von FAME EI-Spektren und ihre ECL, um die Produkte zu vorläufig zu identifizieren. Schritt 3 identifiziert die genaue Abzweigstelle in verzweigtkettigen-FAs. Schließli...

Wir schlagen ein Protokoll vor, um Fettsäuren zu identifizieren, ohne sie reinigen zu müssen. Es kombiniert Informationen über die Retentionszeiten mit den Massenspektren von drei Arten von Fettsäurederivaten: Fettsäuremethylester (FAMEs), 4,4-Dimethyloxazolinderivate (DMOX) und 3-Pyridylcarbinylester (Picolinyl).

Identifizierung von Fettsäuren in<em&gt; Bacillus cereus</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls besteht darin, Fettsäuren von Bakterien zu identifizieren und die Position von Methylverzweigungen sowie Doppelbindungen zu bestimmen. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Bakteriologie zu beantworten, beispielsweise welche Rolle Fettsäuren bei der Anpassung von Bakterien an ihre Umwelt spielen. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass eine Vermehrung der Fettsäuren nicht erforderlich ist.Die Auswirkungen dieser Technik reichen bis zur bakteriellen Identifizierung, da die Fettsäurezusammensetzung in der bakteriellen Taxonomie von großer Bedeutung ist. Obwohl diese Methode an dem Bakterium Bacillus cereus entwickelt wurde, ist sie ebenfalls sehr relevant für die Untersuchung anderer Arten, die verzweigte Fettsäuren enthalten. Im Allgemeinen hatten wir während der Entwicklung dieser Methode Schwierigkeiten.Da die derzeitigen Identifizierungsmethoden für Fettsäuren keine Methylverzweigungen in der Doppelbindung position identifizieren. Beginnen Sie dieses Verfahren, indem Sie einen Bakterienrasen herstellen, indem Sie 100 Mikroliter einer Übernachtkultur des Stammes, die bei 30 Grad Celsius in LB inkubiert wurde, auf der Oberfläche einer LB-Agar-Platte verteilen. Inkubieren Sie die Platte über Nacht bei 30 Grad Celsius.Um lipidgebundene Fettsäuren zu gewinnen, sammeln Sie bakterielle Zellen durch Abkratzen von Kolonien von der Agarplatte und übertragen Sie etwa 40 Milligramm in ein 10-Milliliter-Glasröhrchen mit Schraubverschluss und PTFE-Dichtung. Geben Sie zur Durchführung der Transesterifizierung 5 Milliliter einer 0,2-molaren Kaliumhydroxidlösung in Methanol zu den frischen bakteriellen Zellen hinzu.Vortexen Sie die Probe und inkubieren Sie sie eine Stunde lang bei 37 Grad Celsius. Danach fügen Sie ein Milliliter einer einmolarigen Essigsäure hinzu, um den pH-Wert auf sieben zu senken. Geben Sie nun drei Milliliter Hexan hinzu und vortexen Sie eine Minute lang, um die Fettsäuremethylester oder FAMEs zu extrahieren.Überführen Sie die obere Phase in saubere Röhrchen und konzentrieren Sie diese durch Verdampfung bei Raumtemperatur unter kontinuierlichem Stickstoffstrom, um etwa 200 Mikroliter FAME-Extrakt zu erhalten. Danach überführen Sie die Extrakte in GC-Vials mit Einsätzen. Injizieren Sie die Extrakte in ein mit einer Kapillarsäule ausgestattetes Gaschromatographie-Massenspektrometrie-System (GC-MS).Stellen Sie die Injektionstemperatur auf 250 Grad Celsius ein. Halten Sie die Ofentemperatur eine Minute lang bei 50 Grad Celsius. Erhöhen Sie die Temperatur auf 190 Grad Celsius mit einer Rate von 20 Grad Celsius pro Minute und anschließend auf eine Endtemperatur von 230 Grad Celsius mit einer Rate von zwei Grad Celsius pro Minute.Notieren Sie für die MS die Massenspektren mittels Elektroneneinschlagionisation (EI) bei 70 Elektronenvolt und stellen Sie die Erfassung des gesamten Ionenstroms zwischen 50 und 400 atomaren Masseneinheiten (AMU) ein. Lösen Sie eine Probe des getrockneten FAME-Extrakts in einem Milliliter trockenem Dichlormethan. Geben Sie dann die Extraktlösung und 0,2 Milliliter 3-Pyridinmethanol zu 0,1 Milliliter einer einmolarigen Kalium-tert-butoxid-Lösung in Tetrahydrofuran.Erhitzen Sie die Lösung 30 Minuten lang bei 40 Grad Celsius in einem geschlossenen Vial. Nach dem Abkühlen der Lösung auf Raumtemperatur fügen Sie zwei Milliliter gereinigtes, deionisiertes Wasser und vier Milliliter Hexan hinzu. Mischen Sie die Lösung eine Minute lang mit einem Vortex-Mischer.Nachdem die Phasen sich getrennt haben, sammeln Sie die obere organische Phase. Geben Sie anschließend solange wasserfreies Natriumsulfat hinzu, bis die organische Phase klar ist. Überführen Sie die organische Phase in ein sauberes Gefäß und verdampfen Sie sie unter einem Strom von Stickstoff, bis ein Volumen von etwa 200 Mikrolitern erreicht ist.Fügen Sie 250 Milligramm 2-Amino-2-methyl-1-propanol zu einer Probe des getrockneten FAME-Extrakts hinzu. Spülen Sie das Gefäß mit Stickstoff und verschließen Sie es mit einem Stopfen. Anschließend erhitzen Sie die Lösung über Nacht auf 190 Grad Celsius.Nach dem Abkühlen der Lösung auf Raumtemperatur drei Milliliter Dichlormethan und fünf Milliliter gereinigtes, deionisiertes Wasser hinzufügen. Die Mischung vortexen und die Phasen trennen lassen. Anschließend die wässrige Phase entfernen.Anschließend wird die organische Phase mit fünf Millilitern Wasser gewaschen. Anhydres Natriumsulfat wird hinzugefügt, bis die organische Phase klar ist. Nach dem Übertragen der organischen Phase in ein neues Reagenzglas wird diese unter einem Stickstoffstrom bis auf ein Volumen von etwa 200 Mikrolitern eingedampft.Das Massenspektrum des I16-Picolinalderivats bestätigt die Methylverzweigung. Die Differenz von 28 AMU zwischen den Ionen bei 304 und 332 entspricht Fragmenten, die vor und nach dem verzweigten Kohlenstoff gebildet wurden. Die diagnostischen Ionen 113 und 126, charakteristisch für DMOX-Derivate, sind hier dargestellt.Das Molekülion mit m/z 307 ist charakteristisch für das 16:1-Isomer, und eine Lücke von 12 AMU zwischen 196 und 208 weist auf eine Doppelbindung am Kohlenstoffatom hin. Die Lücke von 12 AMU wird nicht mehr beobachtet, wenn sich die Doppelbindung vor Kohlenstoff 7 befindet. Das intensive Ion bei m/z 153, charakteristisch für eine Doppelbindung an Kohlenstoff 5, sowie das Molekülion bei m/z 307 im Massenspektrum des DMOX-Derivats identifizierten diese Verbindung als n16:1 Δ5.Die 307er-Ionen der DMOX-Derivate und die 345er-Ionen der Picolinyl-Derivate weisen auf ein 16:1-Fettsäureisomer hin. Eine Differenz von 28 AMU zeigt die Verzweigungsposition an, während eine Differenz von 12 AMU für DMOX und 26 AMU für Picolinylester die Doppelbindung identifiziert. Hier sind die in Bacillus cereus identifizierten Fettsäuren und die entsprechenden diagnostischen Ionen aufgelistet.Die diagnostischen Ionen identifizieren die Methylverzweigungen und Doppelbindungspositionen an der Kohlenstoffkette für die DMOX- und Picolinylesterderivate. Wenn die Methode einmal beherrscht ist, kann sie in zwei Tagen durchgeführt werden, sofern sie ordnungsgemäß ausgeführt wird. Nach dieser Vorgehensweise können Fettsäuren mittels GC-MS quantifiziert und die Freisetzung der FAME-Derivate verfolgt werden.Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik Forschern auf dem Gebiet der Bakteriologie den Weg, um bakterielle Vielfalt und Anpassungsmechanismen von Bakterien zu erforschen. Nach dem Anschauen dieses Videos sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man Fettsäuren in Bakterien untersucht, einschließlich methyliert verzweigter und ungesättigter Fettsäuren. Vergessen Sie nicht, dass das Arbeiten mit Reagenzien äußerst gefährlich sein kann, und Vorsichtsmaßnahmen wie die Arbeit unter einem Laborabzug und das Tragen von Handschuhen sollten stets beachtet werden, wenn dieses Verfahren durchgeführt wird.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

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&lt;em&gt; Caenorhabditis ele &lt;/ em&gt; ist ein nützliches Modell, um die Funktionen der mehrfach ungesättigten Fettsäuren in der Entwicklung und Physiologie zu erforschen. Dieses Protokoll beschreibt ein effizientes Verfahren zur Ergänzung des &lt;em&gt; C. elegans &lt;/ em&gt; Ernährung mit mehrfach ungesättigten Fettsäuren.

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