Isolierung von Zwischenfilamentproteinen aus mehreren Mausgeweben zur Untersuchung von altern-assoziierten posttranslationalen Modifikationen

Das übergeordnete Ziel dieses biochemischen Verfahrens ist es, mit intermediären Filamenten angereicherte Fraktionen aus mehreren Mausgeweben zu isolieren, um posttranslationale Modifikationen der verschiedenen gewebespezifischen intermediären Filamentproteine zu untersuchen. Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen im Bereich der Zwischenfilamente zu beantworten, z. B. wie die Funktion und Regulation dieser wichtigen stressschützenden Zytoskelettproteine während der Säugetieralterung beeinflusst wird. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass der Benutzer durch die Integration eines automatisierten Gewebelyseschritts mehrere Gewebeproben schnell und effizient verarbeiten kann.

Geben Sie zunächst einen Milliliter eiskalten Triton X-100 Puffer, der mit Proteaseinhibitoren ergänzt ist, in einen Glasröhrchen-Homogenisator und legen Sie ihn auf Eis. Nehmen Sie ein kleines Stück Gewebe aus dem Flüssigstickstofflager und legen Sie es direkt in den Glashomogenisator. Halten Sie dann den Homogenisator und die Probe immer auf Eis und verwenden Sie etwa 50 Hübe einer Polytetrafluorethylen-Pastille, um die Probe zu homogenisieren und gleichzeitig die Blasenbildung zu minimieren.