Name: Aufnahme von nasalen und bronchialen Flüssigkeiten: Precision Sampling der menschlichen Atemwege Schleimhaut und Labor Verarbeitung von Proben (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 54 s
Description: Lernen Sie die Techniken der Nasosorption und Bronchosorption zur präzisen Probenahme von Schleimhautflüssigkeit aus den oberen und unteren Atemwegen. Diese Methoden ermöglichen standardisierte, gut verträgliche diagnostische Verfahren.

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Finanzierung: Diese Arbeit wurde unterstützt durch die Finanzierung von kaiserlichen nationalen Instituts für Gesundheit Forschung (NIHR) Biomedical Research Centre (BRC), die NIHR Gesundheit Schutz Research Unit (HPRU) in Infektionen der Atemwege am Imperial College London in Partnerschaft mit Public Health England (PHE) und dem NIHR Imperial Patientensicherheit Translational Research Centre. Die geäußerten Meinungen sind diejenigen der Autoren und nicht unbedingt die der NHS, die NIHR, Department of Health oder Public Health England.

Im folgenden Protokoll verwendeten Techniken wurden von der West London Forschungsethikkommission (Referenz-Nummer 15/lO/0444) genehmigt.
1. nasale Absorption (NA)
<ol><li>
Vorbereitung vor der Probennahme NA
	<ol>
<li>Bei der Durchführung NA zuerst waschen Sie Hände und ziehen Sie der Handschuhe, vorzugsweise vor dem Patienten an.</li>
		<li>Inspizieren Sie die Nasenhöhle mit einer Stirnlampe zu, und haben Sie den Arzt ihrer nichtdominanten Daumen verwenden, um die Nase des Patienten um die Nasenhöhle zu visualisieren zurückziehen. Hinweis: Eine nasale Spekulum ist nicht in der Regel erforderlich.</li>
		<li>Visualisieren Sie die Nasenhöhle und minderwertig Nasenmuschel vor der Probenahme. Hinweis: Die Nasenlöcher (Nasenlöcher) sind nicht rund im Querschnitt und gehen sie geradeaus nach hinten. In der Regel der unteren Nasenmuschel kann eine Wölbung oder Einbuchtung an der Seitenwand des Nasenlochs, als mit der Nasenscheidewand bilden die glatte, flache mediale Wand. Wir wollen Probe aus diesem minderwertigen Nasenmuschel, da das zugrunde liegende Epithel eine einfache Flimmerepithel der Atemwege44 ist.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
NA-Probenahme
	<ol>
<li>Bei der Probenahme, passieren Sie die NA SAM sanft auf das Lumen des Nasenlochs, es flach an der unteren Nasenmuschel zu orientieren.</li>
		<li>Fragen des Spenders einen Zeigefinger verwenden, um die SAM auf der Nasenschleimhaut zu drücken. NA kann dazu führen, dass eine leichte kitzeln, mit Bewässerung möglich Auge, da die MLF aufgenommen wird. Hinweis: Bei Erwachsenen führen wir in der Regel NA für 60 s.</li>
		<li>Entfernen Sie nach Absorption der MLF das NA-Gerät aus dem Nasenloch und setzen Sie wieder in die ursprüngliche Röhre.</li>
		<li>Verarbeiten Sie die Proben im Labor sofort oder frieren Sie ein, wie später in diesem Protokoll aufgeführt. Hinweis: NA ist in einer Vielzahl von nasalen Schleimhaut Herausforderung Modelle, und auch bei verschiedenen Atemwege Erkrankungen untersucht. Jedoch sollte die Validierung gegen andere respiratorische Probenahmeverfahren für jede Studie und Patient Bevölkerung durchgeführt werden.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. bronchiale Absorption (BA)
<ol><li>
Vorbereitung vor der BA Probenahme Hinweis: BA erfolgt durch Fachpersonal in einer Bronchoskopie-Suite.<ol>
<li>Überprüfen Sie vor der Platzierung der BA-Gerät nach unten den Katheter, dass SAM Extrudieren und zurück in den Katheter zurückziehen.</li>
		<li>Führen Sie vor Durchführung von BA an einem Patienten einen mock BA auf eine Bronchoskopie-Simulator.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
BA-Probenahme
	<ol>
<li>Das Niveau der Bronchus Intermedius, nur die Einteilung in der rechten unteren und rechten mittleren Lappen proximalen übergeben Sie Bronchoskop die Luftröhre und die rechten Bronchus. Hinweis: Wir probieren in der Regel aus der Bronchus Intermedius, obwohl andere Websites innerhalb der Atemwege entnommen werden können. Wenn der Katheter und SAM beobachtet, kann man den Bronchoskop Tipp nicht sehen. Wir beobachten die folgenden einfachen Schritte für BA, sobald das Bronchoskop die gewünschte Sampling-Seite erreicht hat.</li>
		<li>Katheter nach unten: Einfügen des BA-Katheters durch den Betriebskanal das Bronchoskop bis die weiße Spitze nur sichtbar in den Atemwegen, bis maximal 1 cm distal zum Jahresende das Bronchoskop ist. Halten Sie die Bronchoskop und Katheter Spitze in der Mitte des lumens der Atemwege. Achten Sie darauf, um Kontakt zwischen der Katheterspitze und die Bronchialschleimhaut zur Verringerung des Risikos von Abrieb auf der Schleimhaut zu minimieren.</li>
		<li>SAM OUT: Drücken Sie den Griff des Geräts BA, dass SAM in das Lumen der Atemwege direkt mittleren oder unteren rechten Lappen extrudiert wird. Biegen Sie unter direkter Sicht die Spitze des Bronchoskop um sicherzustellen, dass die SAM unternimmt die MLF an der Atemwegswand Kontakt. Lassen Sie die SAM in den Atemwegen, flach an der Schleimhaut Wand für 30 s.</li>
		<li>SAM IN: Schauen Sie durch das Bronchoskop um sicherzustellen, dass die feuchte SAM-Sonde wieder über das Ende des Katheters gerade und nicht gebogen ist. Bei Bedarf kann die Katheter und Bronchoskop Spitze zurück zu SAM begradigen gebracht werden. Zurückziehen Sie unter direkter Sicht gerade SAM sanft zurück in den Katheter. Hinweis: Wenn es Schwierigkeiten zurückziehen der SAM zurück in den Katheter, ziehen das ganze Gerät mit SAM wieder aus den Atemwegen extrudiert.</li>
		<li>Katheter UP: Entziehen Sie den gesamte Katheter den Betriebskanal das Bronchoskop.</li>
		<li>Schneiden Sie SAM: SAM wird mit einer sterilen Schere abgeschnitten und ist dann in einem Cryotube auf Eis gelegt. Diese Proben können mit unterschiedlichen Methoden, wie Sie später in diesem Protokoll verarbeitet werden.</li>
	</ol>
</li>
</ol>(3) die Verarbeitung von NA und BA Proben
Hinweis: Es gibt zahlreiche Möglichkeiten für Labor-Verarbeitung von Proben aus NA und BA. Diese Protokolle Bemühen um Proben für die spätere Verwendung zu speichern, und die MLF-Probe aus der SAM eluieren.
<ol><li>
Optionen für die sofortige Behandlung von NA und BA Proben
	<ol>
<li>Option 1: Speichern der feuchten SAM auf Eis für ein paar Stunden vor der weiteren Verarbeitung.</li>
		<li>Option 2: Rohr sofort Tieffrieren NA SAMs in der Auflistung. In ähnlicher Weise BA SAMs in kryogenen Fläschchen nach Entfernung, mit einer Schere aus das Probenahmegerät einfrieren.</li>
		<li>Option 3: Legen Sie die freistehende SAM in Elution Buffer (300 µL) vor der Verarbeitung direkt oder tief gefrieren.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Optionen von Elution Buffer für NA und BA Proben Hinweis: Die Wahl der Elution Puffer richtet sich auf das geschehen in der MLF-Probe analysiert werden und wir vier wichtigsten Alternativen vorschlagen:<ol>
<li>Verwenden Sie eine vorgefertigte Testpuffer für Immunoassay-Verfahren geeignet. Dieser Puffer sollte eine kleine Menge des Reinigungsmittels (0,05 %) sowie Eiweiß, z. B. Rinderserumalbumin (BSA) bei 1 % enthalten.</li>
		<li>Alternativ verwenden Sie einen Puffer, enthält eine größere Menge von Waschmittel, damit die Zelle Lysis tritt. Hinweis: Wir verwenden Puffer, Triton-X oder NP40 bei 1 % Konzentration enthalten. Zelle Lysis Puffer aktivieren intrazelluläre und extrazelluläre Zytokine werden von der SAM eluiert und führen in der Regel höhere Zytokine und Chemokine. Dieser Puffer sollte auch Eiweiß enthalten und sind mit BSA auf 1 % aus.</li>
		<li>Für RNA-Messungen, wie quantitative PCR der viralen RNA oder Mess Host RNA RNA-Extraktionspuffer direkt hinzufügen der feuchten SAM. Hinweis: Chaotropen RNA-Extraktion-Puffer enthalten Guanidinium, die Proteine denaturiert. Eine Alternative ist der eluierten MLF Flüssigkeit im Immunoassay oder Zelle Lysis Puffer enthaltenen RNA-Extraktionspuffer hinzu.</li>
		<li>Organische Lösungsmitteln, wie Trifluoroacetic Säure, für die Extraktion von Lipiden und Metaboliten, Bewertung durch Massenspektrometrie verwenden. Hinweis: Details dieser Reagenzien sind unter "Materialien" enthalten.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Elution Technik
	<ol>
<li>Einsetzen Sie für jede der oben genannten Elution Techniken die SAM in ein 2 mL Mikro-Zentrifugenröhrchen, zusammen mit dem gewünschten Extraktionspuffer.</li>
		<li>Vortex mischen die Probe für 30 s, SAM lose beigefügte Flüssigkeit und Biomolekülen zu waschen.</li>
		<li>Um vollständige Probenrückgewinnung sicherzustellen, führen Sie zentrifugale Elution indem feuchte SAM zu einem Spin Filter Mini-Spalte, die Einsätze in die gleichen 2 mL Mikro-Zentrifugenröhrchen zum Waschen verwendet. Hinweis: Zwei Arten von Spin Filter Mini-Spalte können verwendet werden. Die erste enthält nur ein Kunststoff-Netz, das die SAM in der Position hält, so dass vollständige Elution von Flüssigkeiten. Alternativ, wenn mit infektiösem Material arbeiten, verwenden Sie Spin Filter mit einer Porengröße von 0,22 µm. Diese Filter werden Proben zu sterilisieren und eignen sich für Proben mit vermuteten mykobakteriellen Infektion. Diese Filter sollten jedoch vorab inkubierten mit Puffer, Bindung von Mediatoren des Filters durch unspezifische Wechselwirkungen zu minimieren.</li>
		<li>Verwenden Sie sterilisierte Pinzette übertragen die feuchte SAM auf den Spin-Filter. Ändern Sie Zange zwischen Proben, um Kontaminationen zu vermeiden.</li>
		<li>Zentrifuge Proben für 20 min bei 16.000 x g in einer Mini-Zentrifuge auf 4 ° c abgekühlt</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Zusammenfassung Beispiel Protokoll
	<ol>
<li>Im Labor, label 2 mL Mikro-Zentrifuge Rohre für Probenentnahme und fügen Sie die gewünschte Lautstärke der Elution Puffer (in der Regel 300 µL für NA; 100 µL für BA). Verschließen Sie Deckel und auf Eis.</li>
		<li>Nach Probenahme (sofort oder im Labor), die SAM aus dem Griff mit Pinzette entfernt und gelegt in den Puffer mit Sammelrohr (produziert im vorherigen Schritt). Stellen Sie sicher, die Kappe des Microcentrifuge Schlauch sicher geschlossen ist und die Proben auf Eis, an das Labor zur weiteren Verarbeitung zu übertragen.</li>
		<li>Entfernen Sie die Röhrchen mit SAM und Elution Puffer aus ihrem Transfer Container und Vortex-Mix für 30 s.</li>
		<li>Mit sterilen Pinzette, entfernen Sie SAM zu und in eine Spin-Spalte (mit oder ohne 0,22 µm-Cellulose-Acetat-Filter).</li>
		<li>Den Elution Puffer aus dem Sammelrohr zu sammeln und zu behalten.</li>
		<li>Setzen Sie die Spin-Säule mit SAM, in dem ursprünglichen Sammelrohr (oder eine neue Wenn sterile Filtern Proben) und Sammlung Puffer um spin-Spalte hinzufügen. Auf diese Weise wird der Spin-Spalte zurück in das Sammelröhrchen, dazu das Beispiel aus der SAM eluieren waschen Flüssigkeit durchlaufen.</li>
		<li>Zentrifugieren Sie die Proben mit Deckeln verschlossen (16.000 x g, 20 min, 4 ° C).</li>
		<li>Die Proben aus der Zentrifuge und einbauen möchten.</li>
		<li>Öffnen Sie den geschlossenen Deckel der Rohre und entfernen Sie die Spin-Spalte mit der SAM. SAM und Spin Spalte in einen geeigneten Abfallbehälter entsorgen.</li>
		<li>Sorgfältig Röhren Aliquoten, die das Eluat enthalten innerhalb des Schlauches in kryogenen gekennzeichnet. Das Gesamtvolumen der Eluat und das Volumen in jeder Aliquote aufzeichnen.</li>
		<li>Übertragen Sie die versiegelten Kryogen Röhrchen auf-80 ° C Gefrierschrank und speichern Sie aufrecht bis zu seiner Verwendung zu.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Ergebnisse von bestehenden Atemweg-Sampling-Techniken gelten als sehr variabel; Alternative Sampling-Techniken sind erforderlich, um die Forschung in diesem Feld5zu standardisieren. NA BA Probenahme der MLF in eine nicht-invasive Weise zu ermöglichen und haben spannende Potenzial um Immunantworten in gesunden und Kranken Atemwegen zu messen. Diese Techniken bieten zahlreiche Vorteile gegenüber bestehenden Techniken, einschließlich größere Verträglichkeit, Geschwindigkeit der Probenahme, die Fähigkeit, Probenahme, häufig wiederholen Inter Benutzer Variabilität zu senken, und verringerte Verdünnung immun Mediatoren5 . Die Dauer der Aufnahme und der Verarbeitungstechnik verwendet sollte optimiert für jede Studie und streng zwischen Probenahme Veranstaltungen erhalten. Darüber hinaus sollten bei BA, der Ort der Probenahme innerhalb der Atemwegs sorgfältig zwischen Individuen repliziert werden.
NA, und vor allem BA sind noch relativ neuartige Techniken für die klinische Forschung. Die Vorteile dieser Techniken haben jedoch ihre Verwendung in zahlreichen Studien, einschließlich sorgfältiger Validierung gegen alternative Techniken5geführt. Diese Geräte sind jetzt verfügbar, wie Geräte mit CE-Kennzeichnung für einen breiten Einsatz in der respiratorischen Forschung bereit. NA und BA in viel kleinere Probenvolumina als alternative Sampling-Techniken führen, führen höhere erhaltenen Konzentrationen mehr Sensibilität für niedrige Fülle immun Mediatoren.
Je nach gewünschten downstream-Anwendungen können NA und BA Proben direkt zur späteren Verarbeitung, Verbesserung der Studie Machbarkeit in einem klinischen Umfeld eingefroren werden. Das Protokoll zur Probe Handhabung kann auch an bestimmte downstream-Anwendungen angepasst werden. Die vorgeschlagenen Verarbeitungstechniken für die Sammlung von Protein, Lipid immun Mediatoren oder Nukleinsäuren verwendet werden, aber sollte für jede Studie optimiert werden. Insbesondere kann MLF mit verschiedenen Puffer eluiert werden. Erstens kann Immunoassay Puffer verwendet werden, um Schleimhaut Zytokine, Chemokine und Antikörper6,45zu messen. Puffer mit einem höheren Waschmittel können auch verwendet werden, um sicherzustellen, dass die Zelle Lysis Auftritt ermöglicht die Aufnahme von intrazelluläres Zytokine. Chaotropen RNA-Extraktion Puffer sollte verwendet werden, für die Bestimmung der Virusinfektion, virale laden, mRNA und das Mikrobiom zu hosten. Alternativ können organische Lösungsmittel für Lipidomics und Massenspektrometrie verwendet werden.
Zusammenfassend ist die direkte Absorption der MLF von Schleimhaut-Oberflächen eine spannende Technik mit möglichen Einsatz in Erkrankungen der Atemwege, Magen-Darm, urogenitalen und andere Schleimhaut. Diese vielversprechende Aufnahme-Techniken erfordern jedoch präzise Validierung der Probenahme und Verarbeitung Technik für individuelle Assays (Biomarker) in jeder Krankheit-Einstellung. Darüber hinaus werden diese neuartige Präzision Schleimhaut Probenahmetechniken Validierung gegen konventionelle Proben, wie z. B. aus Sputum, Blut und Atem erfordern. Mit diesen Techniken kann MLF verwendet werden, um Mikroben, Zytokine, Chemokine, Prostanoide und Antikörper zu messen.

Die meisten Erkrankungen der Atemwege verursachen eine entzündliche Reaktion, und es gibt ein dringender Bedarf an Stichproben aus der Atemwege Schleimhautoberfläche in allergischer Rhinitis, virale und Pilzinfektionen, Tuberkulose, Asthma, chronisch obstruktive Lungenerkrankung, pulmonale Fibrose und Lungenkrebs Krebs 1. Nasen-Rachen Absaugen (NPA), nasale Lavage und alvéolaire Lavage (BAL) sind gängige Techniken für die Probenahme der oberen und unteren Atemwege. Jedoch stellen diese Techniken erhebliche Probleme wie schlechte Verträglichkeit, Verdünnung von Entzündungsmediatoren und die Unfähigkeit, Probenahme2häufig wiederholen. Eine Alternative zur NPA Probenahme ist die Verwendung von Tupfer, entweder strömten Nylon, Baumwolle oder Viskose3,4, aber diese haben auch Einschränkungen, da sie Beschwerden und Schäden an der Nasenschleimhaut Epithel und in einigen Fällen irreversible Bindung von verursachen Entzündungsmediatoren5. Diese Techniken nicht in der Regel serienmäßig über eine Stunde wiederholt werden, und alternative Techniken möglicherweise wirksamer für die Erkennung von niedrigen Fülle Zytokine und Chemokine5,6. Darüber hinaus kann die Benutzer Variabilität verbunden mit diesen Techniken Inkonsistenzen in Daten, die in der Anforderung der größeren Patienten Kohorten erzeugen.
Alternativ wurden Absorption Techniken sowohl natürliche als auch synthetische Schwämme zur MLF von Schleimhaut-Oberflächen zu sammeln. Ophthalmologische Schwämme bestehend aus natürlicher Zellulose (z. B.Weck-Cel) wurden verwendet, um Probe Speichel, Hals-, und Vaginalsekret7. Darüber hinaus synthetische Schwämme aus Polyvinylalkohol (PVA) und hydroxylierten Polyvinylacetat (HPVA) wurden landwirtschaftlich8. Sieben verschiedene absorptive Materialien wurden für die Probenahme orale Flüssigkeit vor der Messung Antikörper9, während Polyurethan Mini-Schwämme verwendet wurden, um menschlichen Tränen10sammeln verglichen.
Filterpapier bestehend aus natürlicher Zellulose von der Baumwollpflanze ist allgemein verwendet worden, Nasensekret seit den bahnbrechenden Papier Alam und Kollegen in 199211,12,13,14aufnehmen, 15,16,17. Filterpapier Scheiben von Filter-Karten (z.B. Shandon) produziert worden und sind verwendet worden, um Histamin und Zytokine nach nasalen Allergen Herausforderungen gesteuert und mit natürlichen Allergen Exposition18,19 Messen ,20,21. Allerdings variieren verschiedene Chargen des Filterpapiers in sachlicher Proteinbindung und einige nicht, Cytokines freizugeben. Methoden mit einer synthetischen absorptive Matrix (SAM) wurden daher entwickelt2,22,23. SAMs sind jetzt in der Regel verwendet, um nasale MLF erhalten von Na Diese saugfähigen Materialien sind angenehm zu benutzen und erhalten MLF auch bei entzündeten Nasen in kurzen Abständen über einen längeren Zeitraum hinweg.
Nasale Absorption ist eine Form der Präzision Schleimhaut Probenahme mit einem SAM für die Probenahme der MLF in den oberen Atemwegen. NA-Geräte werden als CE-gekennzeichneten Medizinprodukten aus medizinischem Materialien mit Reinräumen hergestellt und sind frei von Staub und Allergenen. Der NA-Sampler besteht aus einem Griff und SAM in einem sterilen Cryotube. Die SAM besteht aus Polymeren, in der Regel Fasern, aber es gibt es auch als Schaum und diese sind zu weich und absorbierend, mit schnellen Feuchtigkeitstransport für die Probenahme werden ausgewählt. SAMs haben minimalen Proteinbindung erlauben die effiziente Elution von absorbiert Sekret. NA ist eine sehr sanfte, nicht-invasive Technik, die auf Spender aller Altersgruppen durchgeführt werden kann. Darüber hinaus ist serielle Probenahme, sogar alle paar Minuten möglich. NA gegen vorhandenen oberen Atemwegen Probenahme Techniken5 validiert wurde und sich wiederholende Probenahme ermöglichte Generation der kinetischen Daten nach Foulspiel der Atemwege mit Allergen23,24,25, bakteriellen Endotoxinen26 und viraler Art TLR-Agonisten (JI, A. Et Al., Manuskript in Vorbereitung). NA ist auch bei Säuglingen zu untersuchen, die Naturgeschichte der Atopie27,28,29 und viraler Bronchiolitis30verwendet wurde.
Bronchoskopische Microsampling (BMS) ist ein Verfahren zur Erhebung der MLF in der unteren Atemwege, die von Olympus31,32,33entwickelt wurde. Das BMS-System ist leider nur in Japan zugelassen. Olympus liefern zwei BMS-Systeme: eine mit einem faserigen hydroxylierte Polyester (FHPE) Sonde34,35,36,37, und eins mit einem Baumwoll Sonde33,38, 39 , 40 , 41 , 42 , 43. ein großes Hindernis war, dass die BMS-Sonde bei Patienten mit Asthma eingesetzt Schleimhaut Kontakt Blutungen, wobei die Hälfte aller Proben, die mit Blut kontaminiert verursacht. Die Autoren folgerten, dass es nicht möglich, die Probe mit diesem BMS-System von peripheren Atemwege Asthma Patienten43MLF war.
Als Alternative haben wir entwickelt, BA mit einem weichen SAM, die während der bronchoskopischen Untersuchung der unteren Atemwege, einschließlich nach experimenteller Infektion von asthmatischen Probanden mit Rhinovirus6ausgeführt werden können. Das BA-Gerät besteht aus: einer externen hohlen Katheter, Handstück, die zur Aktivierung die SAM extrudiert und eine zentrale Kunststoff Führungsdraht, der SAM an seinem Ende hat. Für NA BA-Kits sind aus medizinischem Material mit Reinräumen hergestellt und sind frei von Staub und Allergenen. Geräte sind CE gekennzeichnet und werden zur Verfügung gestellt Gamma bestrahlt. Der SAM-Streifen ist weich, absorbierend und hat schnellen Feuchtigkeitstransport für Musterkollektion. Es hat auch minimalen Proteinbindung erlauben die effiziente Elution von absorbiert Sekret. Das Gerät kann durch den Arbeitskanal ein Bronchoskop passen und verwendet werden kann, um schnell und präzise probieren MLF an bestimmten Standorten von Interesse innerhalb der Atemwege. Im Gegensatz zu BAL oder BMS ergibt BA nicht Kontakt zu Blutungen oder zusätzliche Patienten Beschwerden postoperativ.
Achten Sie darauf, dass die Verarbeitung von NA und BA Proben berücksichtigt werden sollten. Proben können direkt eingefroren und in Chargen verarbeitet oder kann sofort bearbeitet werden. Die Art der Verarbeitung kann in Richtung bestimmter downstream-Anwendungen, einschließlich Immunoassays für Zytokine, Chemokine und Immunglobuline oder Elutions virale, bakterielle, zugeschnitten und Wirtszelle verbundenen RNA. Wir präsentieren die klinische Erfassung und Labor Verarbeitungstechniken NA und BA als Leitfaden für die klinische Forscher zugeordnet.

<table><tbody><tr><td>Nasosorption (Erwachsene, 7mm Breite)</td><td>Hunt Developments</td><td>NSFL-FXI-11</td><td>Verschiedene Größen sind für verschiedene Patientengruppen/Altersgruppen erhältlich.</td></tr><tr><td>Bronchosorption</td><td>Hunt Developments</td><td>BSFL-FXI-11</td><td>Minimale Bronchoskop-Kanalgröße 2 mm; Maximale Arbeitslänge 815mm</td></tr><tr><td>Corning&nbsp; Costar&nbsp; Spin-X&nbsp; Zentrifugenrohrfilter (ohne Membran)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CLS9301-1000EA</td><td></td></tr><tr><td>Corning&nbsp; Costar&nbsp; Spin-X&nbsp; Zentrifugenröhrchenfilter (0,22 μm Membran)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CLS8160-24EA</td><td>Zur Sterilisation von Proben mit Infektionsrisiko.</td></tr><tr><td>Assay-Puffer (Elutionspuffer</td>) <td>Millipore</td><td>AB-33k</td><td>Nicht auf der Millipore-Website aufgeführt, aber über Anfragen oder allgemeine Laborbedarfsunternehmen wie Cedarlane erhältlich. Enthält 0,05 % Tween-20 und 1 % BSA.</td></tr><tr><td>NP-40 Zelllysepuffer</td><td>Life Technologies</td><td>FNN0021</td><td>Zugabe von Rinderserumalbumin zu 1% (w/v). Kann höhere absolute Mediator-Niveaus wiederherstellen.</td></tr><tr><td>Puffer RLT (RNA-Extraktion)</td><td>Qiagen</td><td>79216</td><td>Ermöglicht die Rückgewinnung von RNA aus Nasosorptions- und Bronchosorptionsproben.</td></tr><tr><td>Trifluoressigsäure</td><td>Sigma Aldrich</td><td>302031-100ML-M</td><td>Für die Elution von Proben, die in HPLC-Anwendungen verwendet werden sollen</td></tr><tr>, werden<td>2,0-ml-Mikrozentrifugenröhrchen</td><td>Costar</td><td>3213</td><td>2-ml-Röhrchen für die Spin-X-Röhrenfilter benötigt, herkömmliche 1,5-ml-Röhrchen passen nicht in diese.</td></tr></tbody></table>

aufnahme von nasalen und bronchialen flüssigkeiten: precision sampling der menschlichen atemwege schleimhaut und labor verarbeitung von proben

Absorption of Nasal and Bronchial Fluids: Precision Sampling of the Human Respiratory Mucosa and Laboratory Processing of Samples

Die Methoden der nasalen Absorption (NA) und bronchiale Absorption (BA) verwenden synthetische absorptive Matrizen (SAM), um die Schleimhaut Flüssigkeit (MLF) der menschlichen Atemwege zu absorbieren. NA ist eine nicht-invasive Technik, die Flüssigkeit aus der unteren Nasenmuschel absorbiert und bewirkt, dass minimale Beschwerden. NA hat mit der Fähigkeit zur Probenahme der oberen Atemwege häufig wiederholen reproduzierbare Ergebnisse erbracht.
Im Vergleich dazu, alternative Methoden zur Probenahme der respiratorischen Schleimhaut, wie Nasen-Rachen-Aspiration (NPA) und herkömmlichen schrubben, sind weitere invasive und können größere Variabilität der Daten führen. Andere Methoden haben Einschränkungen, beispielsweise Biopsien und bronchiale Verfahren sind invasive, Auswurf enthält viele Tote Zellen sterben und erfordert Verflüssigung, Ausatmungsluft Kondensat (EBC) enthält Wasser und Speichel und Lavage Proben sind verdünnte und Variable.
BA kann durch den Arbeitskanal des Bronchoskop in Klinik durchgeführt werden. Die Probenahme ist gut verträglich und kann an mehreren Standorten in den Atemwegen durchgeführt werden. BA führt MLF Proben wird weniger verdünnt als alvéolaire Lavage (BAL) Proben.
Dieser Artikel beschreibt die Techniken der NA und BA sowie die Labor-Verarbeitung der daraus resultierenden Proben, die auf die gewünschte nachgelagerten Biomarker zu messenden zugeschnitten werden können. Diese Aufnahme-Techniken sind nützlich, Alternativen zu den herkömmlichen Sampling-Techniken verwendet in der klinischen Forschung der Atemwege.

NA einfach in eine Reihe von Studien verwendet worden und nicht-invasiv messen Schleimhaut Entzündung. Nach Verabreichung des Allergens auf die Nase können Prostaglandin-D2 (PGD2) Stufen zu steigen und fallen innerhalb von Minuten (Abbildung 1), im Einklang mit Mastzelle Degranulation (Thwaites Et Al., Manuskript in Vorbereitung) beobachtet werden. Darüber hinaus können Vermittler von Typ-II-Entzündung, z. B. IL-5 (Abbildung 2, Nachdruck mit freundlicher Genehmigung von 24), in den Stunden nach nasalen Allergen Herausforderung23,24gemessen werden. Experimentelle Infektion von allergischen Asthmatikern und gesunden Kontrollpersonen NA diente ein Panel der Mediatoren einschließlich Interferon-Gamma (IFN-γ), Messen im Laufe von 7 Tagen (Abbildung 3, Nachdruck mit freundlicher Genehmigung von 6). Darüber hinaus demonstriert in natürliche respiratory syncytial Virus (RSV) Infektion von Säuglingen, NA RSV erhöhte Konzentrationen von inflammatorischen Zytokinen wie IFN-γ, im Vergleich zu nicht-RSV Säuglinge mit Bronchiolitis und gesunden Kontrollpersonen ( zugeordnet werden soll Abbildung 4, abgedruckt mit freundlicher Genehmigung von 30). Interessanterweise war diese Diskriminierung zwischen RSV und nicht-RSV-Bronchiolitis nicht signifikant in Zeit abgestimmt NPA Proben (Abbildung 4).
BA wurde auch während der experimentelle Infektion von allergischen Asthmatikern mit Rhinovirus verwendet. Am Tag 4 Rhinovirus Infektion, Ebenen von IFN-γ, CXCL11, wurden IL-10 und IL-5 erhöht vom Ausgangswert (Abb. 5; A, B, C und D, beziehungsweise). Darüber hinaus demonstriert diese Technik erhöhte IL-5 Niveaus in den unteren Atemwegen von allergischen Asthmatikern während Rhinovirus Infektion, im Vergleich zu gesunden Kontrollpersonen (Abbildung 5) (Abbildung 5 Nachdruck mit freundlicher Genehmigung von 6).
Diese repräsentative Ergebnisse von Proben mit Testpuffer mit 0,05 % Tween-20 und 1 % BSA eluiert generiert wurden (siehe Tabelle der Materialien).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig1.jpg"> Abbildung 1 : Schnelle Erzeugung und Clearance von Prostaglandin-D2 nach nasalen Allergen Foulspiel. Prostaglandin-D2 (PGD2) gemessen von nasalen Absorption Eluate in serieller Proben nach nasalen Allergen Herausforderung mit Timothy Gräserpollen (n = 5). Jede Zeile repräsentiert Daten von einem Individuum. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig2.jpg"> Abbildung 2 : Kinetische Messung von IL-5 nach nasalen Allergen Foulspiel. Produktion von IL-5 in seriellen nasale Absorption Proben nach nasalen Allergen Herausforderung. 3 wiederholen Sie Allergen Herausforderung Studien wurden durchgeführt, mit den Teilnehmern (n = 19), die Placebo erhielten (blau), niedrige Dosis (10 mg) oral Prednison (Orange) oder hohe Dosis (25 mg) oral Prednison (rot) eine Stunde vor dem Allergen-Verwaltung. Linien bezeichnen geometrischer Mittelwert und Fehlerbalken sind 95 %-Konfidenzintervall aller Teilnehmer. (Abbildung Nachdruck mit freundlicher Genehmigung von Leaker Et Al., Schleimhaut-Immunitätsforschung, 2017). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig3.jpg"> Abbildung 3 : Induktion von Interferon-γ während Rhinovirus Infektion. Während der Infektion Herausforderung von gesunden Erwachsenen (n = 11, blau) und allergischen Asthmatikern (n = 28, rot) mit Rhinovirus-16, nasale Absorption Probenahme wurde verwendet, um Niveaus der Interferon-γ (IFN-γ) zu messen. Daten werden als A) rohe Spaghetti Grundstücke von Privatpersonen und (B) mittlere Ebenen mit Fehlerbalken für interquartile Bereiche dargestellt. (Abbildung Nachdruck mit freundlicher Genehmigung von Hänsel Et al. 6). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig3large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig4.jpg"> Abbildung 4 : Nasosorption diskriminiert erhöhten Interferon-γ mit RSV-Infektion von Säuglingen verbunden. Nasale Absorption und Nasen-Rachen-Aspiration (NPA) dienten, Interferon-γ Ebenen bei Säuglingen mit Bronchiolitis respiratory syncytial Virus (RSV) Infektion zu messen (rot, n = 12), ein nicht-RSV respiratorische Erreger (grün, n = 12), und gesund Kontrollen (blau, n = 9). Daten wurden analysiert mit einem Kruskall-Wallis-Test mit Dunns Korrektur für Mehrfachvergleiche (***p&lt; 0,001). Linien bezeichnet Medians und Fehlerbalken sind interquartile reicht. (Abbildung mit freundlicher Genehmigung von Thwaites Et Al. geändert 30). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig4large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig5.jpg"> Abbildung 5 : Entzündungsmediatoren in Bronchien Absorption Proben während der Rhinovirus Infektion. Nach Rhinovirus-16 Infektion von gesunden Kontrollpersonen (n = 10, blau) und allergische Asthma Freiwilligen (n = 23, rot), Bronchien Absorption wurde verwendet, um (A) IFN-γ, CXCL11 (B) und (C) IL-10 (D) IL-5 an der Basislinie und am 4. Tag der Infektion messen. Daten von Wilcoxon analysiert signiert Rang (übereinstimmenden Proben) und Mann-Whitney Test (unübertroffene Proben). Abbildung Nachdruck mit freundlicher Genehmigung von Hänsel Et al. 6 <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig5large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>

Dieses Manuskript beschreibt die Verwendung von nasalen und bronchialen Absorption Techniken, speziell mit synthetischen absorptive Matrizen (SAM), um die Schleimhaut Flüssigkeit (MLF) der oberen und unteren Atemwege zu probieren. Diese Methoden bieten bessere Standardisierung und Verträglichkeit als bestehende Atemwege Sampling-Techniken.

Aufnahme von nasalen und bronchialen Flüssigkeiten: Precision Sampling der menschlichen Atemwege Schleimhaut und Labor Verarbeitung von Proben

The methods of nasal absorption (NA) and bronchial absorption (BA) use synthetic absorptive matrices (SAM) to absorb the mucosal lining fluid (MLF) of the ...

Heute werden wir die Technik der Nasosorption demonstrieren, eine Form der Präzisions-Schleimhautprobenahme, bei der eine synthetische absorbierende Matrix zur Aufnahme von Schleimhautflüssigkeit verwendet wird. Der Nasosorptionsprobennehmer besteht aus einem Griff und SAM in einem sterilen Kryoröhrchen. Die SAM bestehen aus Polymeren, entweder Fasern oder Schaumstoff, und wurden speziell ausgewählt, um weich und saugfähig zu sein, mit schnellem Feuchtigkeitstransport für die Probenentnahme.SAMs haben auch eine minimale Proteinbindung, um eine effiziente Elution der absorbierten Sekrete zu ermöglichen. Die Nasosorption ist eine sehr schonende, nicht-invasive Technik, die bei Patienten jeden Alters, einschließlich Babys, durchgeführt werden kann. Darüber hinaus ist eine serielle Bemusterung, auch alle paar Minuten, möglich.Bei der Durchführung der Nasosorption sollten Sie sich zuerst die Hände waschen und Handschuhe anziehen, vorzugsweise vor dem Patienten. Zuerst wird die Nasenhöhle inspiziert. Wir empfehlen die Verwendung einer Stirnlampe und den Arzt, die Nase des Patienten mit dem nicht dominanten Daumen zurückzuziehen, um die Nasenhöhle sichtbar zu machen.Ein Nasenspekulum ist in der Regel nicht erforderlich. Wenn man in die Nasenhöhle schaut, sind die Nasenlöcher oder Nasenlöcher im Querschnitt nicht rund und gehen gerade nach hinten. Im Allgemeinen sehen Sie die untere Nasenmuschel als eine Ausbuchtung, eine Vertiefung an der Seitenwand des Nasenlochs, wobei die Nasenscheidewand die glatte, flache mediale Wand bildet.Wir wollen Proben von dieser unteren Nasenmuschel nehmen, da das darunterliegende Epithel ein einfaches Flimmerepithel der Atemwege ist. Bei der Probenahme wird das Nasosorptions-SAM sanft über das Lumen nach oben geführt, wobei es flach gegen die untere Nasenmuschel ausgerichtet wird. Drücken Sie dann mit dem Zeigefinger das SAM auf die Nasenschleimhaut.Dies kann zu einem leichten Kitzeln mit möglichem Tränen in den Augen führen, da das MLF absorbiert wird. Wir verwenden in der Regel eine zeitgesteuerte Absorption von 60 Sekunden. Das Nasosorptionsgerät wird dann aus dem Nasenloch entfernt, wieder in das Kryoröhrchen eingesetzt und kann sofort auf Eis gelagert und anschließend tiefgefroren werden.Alternativ können Sie sofort mit der Eluierung des MLF fortfahren. Die Nasosorption wird in einer Vielzahl von Modellen zur Herausforderung der Nasenschleimhaut und auch bei verschiedenen Atemwegserkrankungen untersucht. Diese relativ neue Methode erfordert jedoch noch eine formale Validierung im Vergleich zu anderen Methoden der Probenahme von Atemwegen.Bei der Technik der Bronchosorption wird eine synthetische Absorptionsmatrix verwendet, um die Schleimhautschleimhautflüssigkeit des Bronchus zu beproben. Die Methode wird von Fachpersonal über ein faseroptisches Bronchoskop durchgeführt. Die Bronchosorptionsvorrichtung besteht aus einem externen Hohlkatheter mit einem zentralen Führungsdraht aus Kunststoff.Diese hat am Ende ein SAM, das bei Aktivierung des Handstücks extrudiert werden kann. Wie die Nasosorption ist der SAM-Streifen weich und saugfähig und lässt sich schnell für die Probenentnahme ableiten. Es hat auch eine minimale Proteinbindung, um eine effiziente Elution der absorbierten Sekrete zu ermöglichen.Bevor das Bronchosorptionsgerät in das Bronchoskop eingesetzt wird, ist es üblich zu überprüfen, ob das SAM leicht extrudiert und wieder in den Katheter zurückgezogen wird. Im Folgenden wird die Methode der Bronchosorption anhand eines Bronchoskopie-Simulators demonstriert. Zuerst wird eine Standard-Bronchoskopie durchgeführt, bei der das Bronchoskop durch die Luftröhre in den rechten Hauptbronchus und auf die Höhe des Bronchus intermedius genau in der Nähe der Teilung des rechten unteren und rechten Mittellappens eingeführt wird.Nach dem Einfügen in diese Ebene werden fünf Schritte befolgt. Erstens, Katheter runter. Führen Sie den Bronchosorptionskatheter durch den Operationskanal des Bronchoskops ein, bis die weiße Spitze in den Atemwegen bis zu einem Abstand von maximal einem Zentimeter zum Ende des Bronchoskops sichtbar ist.Halten Sie das Bronchoskop und die Katheterspitze in der Mitte des Lumens der Atemwege. Achten Sie darauf, den Kontakt zwischen der Katheterspitze und der Bronchialschleimhaut zu minimieren, um das Risiko einer Schleimhautschädigung zu verringern. Zwei, SAM raus.Drücken Sie den Griff der Bronchosorptionsvorrichtung, so dass der SAM-Streifen in das Lumen des rechten mittleren oder rechten Unterlappens extrudiert wird. Biegen Sie unter direkter Sicht die Spitze des Bronchoskops, um sicherzustellen, dass das SAM mit der Schleimhautflüssigkeit an der Atemwegswand in Kontakt kommt. Lassen Sie den SAM-Streifen in den Atemwegen, flach zur Schleimhautwand für zeitlich begrenzte 30 Sekunden.Drei, SAM rein. Ziehen Sie das SAM direkt wieder in den Katheter zurück. Vergewissern Sie sich beim Einfahren, dass die feuchte SAM-Sonde gerade ist.Bei Bedarf können der Katheter und die Bronchoskopspitze zurückgeholt werden, um den SAM zu begradigen. Wenn es Schwierigkeiten beim Einziehen des SAM gibt, ziehen Sie das gesamte Gerät mit dem extrudierten SAM wieder aus den Atemwegen heraus. Vier, Katheter hoch.Ziehen Sie den gesamten Katheter aus dem Operationskanal des Bronchoskops heraus. Fünftens, schneide SAM ab. Das SAM wird mit einer sterilen Schere abgeschnitten, in ein Kryoröhrchen gesteckt und sollte sofort auf Eis gelegt werden, bevor es tiefgefroren oder direkt eluiert wird.Der folgende Videoclip zeigt die Extrusion eines SAM in die Atemwege eines Patienten, der sich einer Forschungsbronchoskopie unterzieht. Bronchosorption wird derzeit bei einer Vielzahl unterschiedlicher Lungenerkrankungen untersucht. Wir hoffen, dass sich diese Methode der präzisen Schleimhautprobenahme bei der diagnostischen Abklärung sowie bei der Stratifizierung und Überwachung von Patienten als nützlich erweisen wird.Laborverarbeitung Nach Nasosorption und Bronchosorption. Die Elution von Schleimhautschleimhautflüssigkeit aus der synthetischen absorbierenden Matrix. Heute werden wir die allgemeinen Prinzipien der Verarbeitung von Laborproben nach den nicht-invasiven Schleimhautprobenahmetechniken der Nasosorption und Bronchosorption demonstrieren.Insbesondere werden wir zeigen, wie wir die Probe der Schleimhautschleimhautflüssigkeit aus der synthetischen Absorptionsmatrix eluieren. Am Ort der Entnahme sollten die Proben für den Transport zum Labor auf Eis gelegt werden. Die Proben können entweder sofort verarbeitet oder direkt in ihrem Original-Probenröhrchen eingefroren werden, um sie zu einem späteren Zeitpunkt zu elutionieren.Wenn eine sofortige Verarbeitung durchgeführt wird, kann die Probe auf Eis in ihrem Original-Probenröhrchen in das Labor überführt werden. Oder das SAM kann abgenommen und an der Entnahmestelle in einen Elutionspuffer gelegt und anschließend auf Eis ins Labor gebracht werden. Die Proben können vor der Verarbeitung mehrere Stunden lang entweder im Puffer oder in ihrem Probenröhrchen auf Eis verbleiben.Ein Waschschritt vor der Zentrifugation und Spin-Elution des SAM zielt darauf ab, die Probenausbeute zu optimieren. Um dies zu erreichen, wird der SAM zusammen mit dem gewünschten Extraktionsbugger in ein Eppendorf-Rohr eingeführt. Die Probe wird dann 30 Sekunden lang auf einem Vortex-Mischer gemischt, um das SAM von lose anhaftenden Flüssigkeiten und Biomolekülen zu reinigen.Um eine vollständige Probenrückgewinnung zu gewährleisten, wird dann eine Spin-Elution durchgeführt, indem das feuchte SAM zu einem Spin-Einsatz in demselben Eppendorf-Röhrchen hinzugefügt wird, das auch zum Waschen verwendet wird. Für dieses Verfahren sollte eine saubere Pinzette verwendet werden, die zwischen den Proben gewechselt werden sollte, um eine Kontamination zu vermeiden. Bei dieser Methode wird die Flüssigkeit durch Zentrifugation aus dem SAM extrahiert.Wir zentrifugieren Proben für 20 Minuten bei 16.000 g in einer auf vier Grad Celsius gekühlten Zentrifuge. Welcher Elutionsbugger verwendet wird, hängt von der gewünschten Anwendung ab. Wir verwenden üblicherweise proteinhaltige Aminoassay-Puffer oder RNA-Lysepuffer.Es können zwei Arten von Schleuderfiltern verwendet werden. Die erste besteht nur aus einem Kunststoffnetz, das das SAM an Ort und Stelle hält und eine vollständige Elution von Flüssigkeiten ermöglicht. Alternativ können bei der Arbeit mit infektiösen Materialien Spin-Filter mit einer Porengröße von 0,2 Mikrometern verwendet werden.Diese Filter dekontaminieren infizierte Proben und eignen sich für Proben mit Verdacht auf eine mikrobakterielle Infektion. Wenn solche Filter erforderlich sind, ist es wichtig, einen Vorinkubationsschritt einzubauen, in dem proteinhaltiger Puffer vor der Zugabe der Probe durch den Filter eingezogen wird. Dieser Schritt minimiert die Bindung von Mediatoren an den Filter durch unspezifische Proteinabsorption.Im Folgenden finden Sie ein Beispielverfahren, das von unserem Labor für die Nasosorptions- und Bronchosorptionsaufbereitung von Proben verwendet wird, die keinen Dekontaminationsschritt erfordern, einschließlich Krankheitserregern der Klasse zwei. Im ersten Schritt wird der SAM für 30 Sekunden in einen Eppendorf gelegt, der den entsprechenden Puffer und Vortex enthält. Für die Nasosorption verwenden wir typischerweise 300 Mikroliter Puffer und für die Bronchosorption 100 Mikroliter.Im zweiten Schritt wird der SAM mit einer Pinzette entfernt und zusammen mit dem Puffer, der zum Waschen des SAM verwendet wird, in einen Kunststoffnetzfilterbecher gelegt. Im dritten Schritt wird der Kunststoffsiebfilterbecher mit dem SAM wieder in den originalen Eppendorf eingesetzt. Im vierten Schritt wird der Eppendorf mit Filterbecher, Puffer und SAM 20 Minuten lang bei 16.000 g bei vier Grad Celsius zentrifugiert.Nach der Zentrifugation wird der Filterbecher mit dem SAM entfernt und entsorgt. Die Elue kann dann aliquotiert und tiefgefroren werden, um sie zu einem späteren Zeitpunkt analysieren zu können. Die Nasosorptionsprobenahme wurde in einer Reihe von klinischen Forschungseinrichtungen für Atemwege eingesetzt.Dazu gehören Messungen von Entzündungsmediatoren während der nasalen Allergenprovokation wie Prostaglandin D2 und Interleukin 5. In diesen Challenge-Modell-Settings ist es wichtig, dass die Probenahme durch Nasosorption eine häufige kinetische Profilierung der Mediatorspiegel ermöglicht, bei der die Probenahme alle paar Minuten wiederholt werden kann. Die Nasosorption wurde auch während einer Rhinovirus-Infektionsprovokation bei gesunden Probanden und allergischen Asthmatikern angewendet, bei denen die Nasosorption während des Studienzeitraums täglich wiederholt wurde.Die Verwendung von Nasosorption in der Studie ermöglichte eine empfindliche Charakterisierung der Interferonantworten auf eine Rhinovirusinfektion. Schließlich haben wir Nasosorptionsproben verwendet, um Säuglinge mit Bronchiolitis zu untersuchen. In dieser Studie war eine Infektion mit dem Respiratorischen Synzytial-Virus mit höheren Konzentrationen von Entzündungsmediatoren wie Interferon-Gamma verbunden.Wichtig ist, dass die Probenahme mit Nasosorption die Einbeziehung einer gesunden Kontrollgruppe in Studien an Säuglingen ermöglicht. Bronchosorption wurde auch in der Rhinovirus-Provokationsstudie bei gesunden Probanden und allergischen Asthmatikern eingesetzt. Diese Studie zeigte einen signifikanten Anstieg der Entzündungsmediatoren Interferon gamma, ITAC, IL-10 und IL-5 in den unteren Atemwegen während einer Rhinovirus-Infektion.Die Einbeziehung dieser Technik in Untersuchungen der unteren Atemwege schafft die Möglichkeit, Mediatorkonzentrationen zu messen, die mit herkömmlichen Methoden wie der bronchoalveolären Lavage möglicherweise nicht nachweisbar wären. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Schleimhautschleimhautflüssigkeit nichtinvasiv gewonnen werden kann und ein spannendes Potenzial zur Messung von Entzündungsreaktionen bei Infektionen und Entzündungen hat. Die Elutionsmethoden müssen entsprechend der Art der Proben und den zu messenden Parametern angepasst werden.Insbesondere kann MLF zur Messung von Schleimhautzytokinen und -chemokinen, Virusinfektionen, Viruslast, Bakterien- und Pilzinfektionen sowie des Mikrobioms und von Schleimhautantikörpern verwendet werden. Schließlich erfordern Schleimhautprobenahme- und Elutionsmethoden eine maßgeschneiderte Entwicklung und sorgfältige Validierung für einzelne Projekte.

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