Hochdurchsatz-Messung der Plasmamembran Wiederverschließen Effizienz in Säugerzellen

Dieser Test wurde entwickelt, um Schlüsselfragen auf dem Gebiet der Plasmamembranbiologie zu behandeln und festzustellen, wie effizient geschädigte Zellen ihre Plasmamembran wieder versiegeln können. Diese Technik kann verwendet werden, um die Effizienz der Plasmamembran-Resealing in einer hohen Durchsatzkapazität zu messen und spezifische Proteine und entsprechende Wege zu identifizieren, die die Neuversiegelung der Plasmamembran vermitteln. Beginnen Sie mit 20 Millilitern einer 2,5 mal 10 zu den fünften HeLa-Zellen pro Milliliter Wachstumsmedium Suspension in ein steriles Pipettenbecken und verwenden Sie eine 10 Milliliter serologische Pipette, um die Zellen gründlich zu mischen.

Als nächstes verwenden Sie eine Mehrkanal-Mikropipette, um 100 Mikroliter Zellen pro Brunnen in Dreifache in einer 96-gut flachen, klaren, schwarzen Polystyrol-Gewebekultur behandeltPlatte auszusäen. Denken Sie daran, dass eine homogene Zellverteilung der Schlüssel zu einem erfolgreichen Experiment ist, da Vergleiche zwischen allen experimentellen Bedingungen gleichwertige Zellzahlen erfordern. Nach 24 Stunden im befeuchteten Zellkultur-Inkubator bei 37 Grad Celsius und 5% CO2 den Plattenleser auf 37 Grad Celsius vorwärmen und die optische Konfiguration auf Monochromator, den Lesemodus auf Fluoreszenz und den Lesetyp auf kinetisch einstellen.