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DOI: 10.3791/58540-v
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This article presents a morphometric protocol for monitoring blastocyst shrinkage and re-expansion during vitrification interventions and post-warming recovery. The protocol is designed for use in in vitro fertilization laboratories equipped with time-lapse microscopes.
Hier präsentieren wir ein Time-Lapse morphometrische-Protokoll, um die Intensität der Blastozyste Schrumpfung und Re-Expansion während Previtrification Interventionen und Post-wärmende Erholung folgen. Die Anwendung des Protokolls ist möglich in in-vitro- Befruchtung Labors mit Zeitraffer Mikroskopen ausgestattet und wird bei der Entwicklung einer optimalen Blastozyste-Verglasung-Methode empfohlen.
Dieses morphometrische Protokoll ermöglicht die Überwachung der Intensität der Blastozystenschrumpfung und -wiederexpansion während früherer Verglasungsinterventionen und der Erholung nach der Erwärmung und gibt Einblicke in die Wirksamkeit von Virusverglasungsmethoden. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie auf In-vitro-Fertilisationslaboratorien mit Zeitraffermikroskopen und Computern mit fortschrittlicher Bildbearbeitungssoftware angewendet werden kann. Am fünften oder sechsten Tag der Expansion, unterziehen Sie eine Blastozyste mit mindestens ein paar inneren Zellmassenzellen und einem kohäsiven Trophektoderm einem 0,4 bis 0,7 Millisekunden Laserpuls mit einem Lochdurchmesser von 4,3 bis 9,4 Mikrometern tangential auf die Zona pellucida und die Kreuzung von zwei benachbarten trophectodermalen Zellen gerichtet.
Dann lassen Sie den Blastocoel für fünf Minuten ganz oder teilweise zusammenbrechen. Als nächstes verwenden Sie eine winzige Pipette, um aseptisch Gleichgewichtsmedium in die Löcher des Mikrotropfenbereichs einer neun-Well-Petrischale hinzuzufügen, die speziell für die Zeitraffermikroskopie und -aufzeichnung entwickelt wurde. Wenn das gesamte Medium hinzugefügt wurde, überlagern Sie den Mikrodropletbereich mit ca. 30 Mikrolitern Gleichgewichtsmedium.
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