Name: Hochdurchsatzmethode zur Beobachtung von Motilitätsphänotypen bei Pseudomonas aeruginosa (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Erfahren Sie eine Hochdurchsatzmethode zur Analyse von Motilitätsphänotypen bei Pseudomonas aeruginosa. Dieses Protokoll ermöglicht die genomweite Untersuchung von Schwarm- und Zuckbewegungen für antimikrobielle Forschung.

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<ol><li>Burrows, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+aeruginosa+twitching+motility%3A+type+IV+pili+in+action%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas aeruginosa twitching motility: type IV pili in action.</a> Annu Rev Microbiol. 66, 493-520 (2012).</li>
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<li>Rasmussen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+screening+assay+for+inhibitors+of+bacterial+motility+identifies+a+novel+inhibitor+of+the+Na%2B-driven+flagellar+motor+and+virulence+gene+expression+in+Vibrio+cholerae%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">A high-throughput screening assay for inhibitors of bacterial motility identifies a novel inhibitor of the Na+-driven flagellar motor and virulence gene expression in Vibrio cholerae.</a> Antimicrob Agents Chemother. 55 (9), 4134-4143 (2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>96 Brunnenplatten&nbsp; &nbsp;</td><td>Corning&nbsp; &nbsp;</td><td>3701&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Agar&nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp; &nbsp;</td><td>BP1423-2&nbsp;</td><td>Endkonzentration beträgt 0,5 % für Schwarmbeweglichkeit bzw. 1 % für zuckende Motilität.</td></tr><tr><td>Casaminosäuren&nbsp; &nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp; &nbsp;</td><td>223050&nbsp;</td><td>Bereite einen 20%-Fond in Wasser vor. Filter sterilisiert mit 0,22 &mu; m filtern und speichern bei 4 °C. Endkonzentration 0,5 % im M9-Minimalmedium.</td></tr><tr><td>Crystal Violet&nbsp;</td><td>Bio Basic&nbsp; &nbsp;</td><td>CB0331</td><td>Bereiten Sie eine 1%-Lösung in Wasser vor.&nbsp;</td></tr><tr><td>D-Glukose&nbsp; &nbsp;</td><td>Bio Basic&nbsp; &nbsp;</td><td>GB0219&nbsp;</td><td>Bereiten Sie eine 20%ige Brühe (1,1 m) in Wasser vor und sterilisieren Sie sie durch Autoklavierung. Endkonzentration 0,2 % im M9-Minimalmedium.</td></tr><tr><td>Filtropur S 0.2&nbsp;</td><td>Sarstedt&nbsp;</td><td>83.1826.001</td><td></td></tr><tr><td>Gentamycinsulfat&nbsp; &nbsp;</td><td>Bio Basic&nbsp; &nbsp;</td><td>GB0217&nbsp;</td><td>Bereiten Sie eine Brühe mit 30 mg/ml in Wasser vor. Filter sterilisiert mit 0,22 &mu; m Filtern und Speichern bei 4 & Grad; C & Strich; Endkonzentration in Platten 15 & Mikro; g/mL.. &nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Inokulationsschleife und Nadel&nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>22363597</td><td></td></tr><tr><td>M9 Minimale Salze, 5X&nblffel;</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>248510</td><td>Bereiten Sie eine 1-Meter-Brühe in Wasser vor und sterilisieren Sie sie per Autoklav. Endkonzentration 1 mM im M9-Minimalmedium. &nbsp;</td></tr><tr><td>Magnesiumsulfat (MgSO4)&nbsp; &nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>M63-500</td><td>&nbsp; Bereite eine 1 M MgSO4-Brühe in Wasser vor. Filter sterilisiert mit 0,22 &mu; m Filter und Lagerung bei Raumtemperatur. Abschließende Schwerpunkt &nbsp;</td></tr><tr><td>PA14 Transposon Insertion Mutant Library&nbsp; &nbsp;</td><td></td><td>Liberati et al., 2006 (siehe Referenz 29)</td><td>59 Platten mit 96 Brunnen für die gesamte Sammlung. Jede Bohrung enthält einen einzelnen Mutanten in LB mit 25 % Glycerol.</td></tr><tr><td>Petrischale 92x16mm&nbsp;</td><td>Sarstedt&nbsp;</td><td>82.1473.001</td><td></td></tr><tr><td>PhenoBooth+&nbsp;</td><td>Singer Instruments&nbsp;</td><td>https://www.singerinstruments.com/solution/phenobooth/specification/&nbsp;</td><td>Lösen Sie 11,3 g des Pulvers in 200 ml gereinigtes Wasser. Autoklaven bei 121 °C; C für 15 Min.&nbsp;</td></tr><tr><td>Kunststoffspritze 10 mL&nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>14955459</td><td></td></tr><tr><td>Rotor+&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Singer Instruments&nbsp;</td><td>https://www.singerinstruments.com/resource/rotor-had/&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Short Pin RePads 384 Dichten&nbsp;</td><td>Singer Instruments&nbsp; &nbsp;</td><td>REP-004&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Short Pin RePads 96 Dichten&nbsp; &nbsp;</td><td>Singer Instruments&nbsp; &nbsp;</td><td>REP-002&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchlorid (NaCl)&nbsp; &nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>BP358-212&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Federbelasteter 96-poliger Replikator</td><td>EnzyScreen&nbsp; &nbsp;</td><td>CR1000&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische Klinge Edelstahl Nr. 25&nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>08-918-5F</td><td></td></tr><tr><td>Tryptone&nbsp;</td><td>Oxoid&nbsp; &nbsp;</td><td>LP0042B&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Uniwell-Platten</td><td>Singer Instruments&nbsp; &nbsp;</td><td>PlusPlates: PLU-003&nbsp; &nbsp;</td><td>Plattenmaß: 54 & mal; 34 & Times; 38 cm – ohne Innenwände, die größere Innenmaße bieten.&nbsp;</td></tr><tr><td>Uniwell-Platten</td><td>VWR</td><td>Einzelwell-Gewebekulturplatten: 75780-348</td><td>Gleiche Maße wie die PlusPlates.</td></tr><tr><td>Hefeextrakt&nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>248510&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

hochdurchsatzmethode zur beobachtung von motilitätsphänotypen bei pseudomonas aeruginosa

High-throughput Method for Observing Motility Phenotypes in Pseudomonas aeruginosa

Hochdurchsatzmethode zur Beobachtung von Motilitätsphänotypen bei Pseudomonas aeruginosa

Motility behaviors often play a significant role in the ability of a bacterium to exploit the resources available in its environment. This is particularly ...

high-throughput-method-for-observing-motility-phenotypes-pseudomonas

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Dieses Protokoll beschreibt die Entwicklung einer mikrofluidischen Vorrichtung zur Untersuchung der bakteriellen Chemotaxis in stabilen Konzentrationsgradienten chemoeffectors.

Einer mikrofluidischen Vorrichtung zur Quantifizierung von bakteriellen Chemotaxis in Stable Konzentrationsgradienten

Quelle: Morales-Soto, N. et. al., Preparation, Imaging, and Quantification of Bacterial Surface Motility Assays. J. Vis. Exp. (2015)Dieses Video zeigt einen Schwarm-Assay mit Bakterien, die grün fluoreszierendes Protein exprimieren, um die Oberflächenmotilität auf weichem Agar zu beobachten. Die Zeitraffer-Bildgebung erfasst die koordinierte Expansion und Rankenbildung und hebt die bakterielle Oberflächenmotilität hervor.

Schwarm-Assay zur Visualisierung der bakteriellen Oberflächenmotilität

Quelle: Chu, W. und Zhuang, X. Visualisierung der bakteriellen Motilität basierend auf einer Farbreaktion. J. Vis. Exp. (2022)Dieses Video zeigt einen auf Redoxfarbstoffen basierenden halbfesten Agar-Assay zur Beurteilung der bakteriellen Motilität durch visuelle Unterscheidung von beweglichen und nicht-beweglichen Stämmen.

Visualisierung der bakteriellen Motilität mit Hilfe von Redoxfarbstoff-supplementiertem halbfestem Medium

Quelle: Scheidweiler, D., et al. Die Kombination von fluidischen Geräten mit Mikroskopie und Durchflusszytometrie zur Untersuchung des mikrobiellen Transports in porösen Medien über räumliche Skalen hinweg. J. Vis. Exp. (2020).Dieses Video demonstriert den Einsatz eines mikrofluidischen Geräts zur Quantifizierung der bakteriellen Beweglichkeit durch eine poröse Matrix, die aus zufällig angeordneten Säulen besteht. Fluoreszierend markierte Bakterien werden in das Gerät eingeführt, mikroskopisch...

Beurteilung der bakteriellen Beweglichkeit mit einem mikrofluidischen Gerät

Die Schwarmmotilität wird durch physikalische und Umweltfaktoren beeinflusst. Wir beschreiben ein zweistufiges Protokoll und Richtlinien, um die Herausforderungen zu umgehen, die üblicherweise mit der Vorbereitung und Datenerfassung von Schwarmassays verbunden sind. Ein makroskopisches bildgebendes Verfahren wird eingesetzt, um detaillierte Informationen über das Schwarmverhalten zu erhalten, die von den derzeitigen Analysetechniken nicht bereitgestellt werden.

Vorbereitung, Imaging und Quantifizierung der Bakterienoberfläche Motilität Tests

In dieser Studie wurde ein Nano mikrofluidischen Strömungskammer wurde verwendet , um die Zuckungen Motilität von Xylella fastidiosa zu visualisieren und funktionell zu charakterisieren, ein Bakterium , das Pierce-Krankheit in Weinrebe verursacht.

Visualisierung von Twitching Motilität und Charakterisierung der Rolle des<em&gt; Pilg</em&gt; in<em&gt; Xylella fastidiosa</em

Dieser Artikel beschreibt das Hochdurchsatz - Assay, der für antibakterielle Wirkstoffforschung und Verbindung Tests erfolgreich etabliert Screening großer Bibliotheken kleiner Moleküle auf ihre potentielle Fähigkeit zur Manipulation zellulärer Ebene von zyklischen di-GMP in Pseudomonas aeruginosa, ein neues leistungsfähiges Werkzeug zur Verfügung gestellt hat.

Einrichtung eines Setup-Hochdurchsatz-Screening für kleine Moleküle, die Modulate c-di-GMP-Signalisierung in<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em

Viele Bakterien verwenden Flagellen-getriebene Motilität, um ihre Umgebung zu navigieren und eine günstige Umgebung sowohl einzeln als auch als Kollektiv zu besiedeln. Demonstriert wird hier die Verwendung von drei etablierten Methoden, die Die Motilität als Selektionswerkzeug nutzen, um Komponenten / Pfade zu identifizieren, die zur Schwimm- und Schwarmmotilität beitragen.

Untersuchung der Flagellen-getriebenen Motilität in Escherichia coli durch Anwendung von drei etablierten Techniken in einer Serie

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Erzeugung von Nullmutanten zur Aufklärung der Rolle bakterieller Glykosyltransferasen in der bakteriellen Motilität

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Visualisierung der bakteriellen Motilität anhand einer Farbreaktion

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Zeitraffer-Epifluoreszenzmikroskopie: Bildgebung von Pseudomonas aeruginosa und Staphylococcus aureus : Heterogene Phänotypen

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Hochdurchsatzmethode zur Beobachtung von Motilitätsphänotypen bei Pseudomonas aeruginosa

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