Name: Transkonjunktivaler Zugang zur Injektion in den Sehnerv der Ratte (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 2 min 33 s
Description: Lernen Sie einen minimalinvasiven transkonjunktivalen Zugang zur Injektion in den Sehnerv der Ratte. Diese Methode ermöglicht die gezielte Applikation therapeutischer Substanzen bei Neurofibromatose-Typ-1-Forschung.

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<ol><li>Korn, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+neuroprotective+effects+of+methylprednisolone+and+surgical+decompression+in+a+rodent+model+of+traumatic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the neuroprotective effects of methylprednisolone and surgical decompression in a rodent model of traumatic optic neuropathy.</a> Curr Eye Res. 47 (3), 461-467 (2022).</li>
<li>Lim, J. Y., Utzschneider, D. A., Sakatani, K., Kocsis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+attenuation+of+GABA+sensitivity+in+the+maturing+myelin-deficient+rat+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Dev+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The attenuation of GABA sensitivity in the maturing myelin-deficient rat optic nerve.</a> Brain Res Dev Brain Res. 72 (1), 15-20 (1993).</li>
<li>Singh, D., Dromel, P. C., Perepelkina, T., Baranov, P., Young, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C6+cell+injection+into+the+optic+nerve+of+long-evans+rats%3A+A+short-term+model+of+optic+pathway+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">C6 cell injection into the optic nerve of long-evans rats: A short-term model of optic pathway gliomas.</a> Cell Transplant. 29, 963689720964383(2020).</li>
<li>Schwaner, S. A., Feola, A. J., Ethier, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+optic+nerve+head+biomechanics+in+a+rat+model+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+R+Soc+Interface%22%5BJournal%5D)">Factors affecting optic nerve head biomechanics in a rat model of glaucoma.</a> J R Soc Interface. 17 (165), 20190695(2020).</li>
<li>Ellouze, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+allotopic+expression+of+the+human+mitochondrial+ND4+prevents+blindness+in+a+rat+model+of+mitochondrial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Optimized allotopic expression of the human mitochondrial ND4 prevents blindness in a rat model of mitochondrial dysfunction.</a> Am J Hum Genet. 83 (3), 373-387 (2008).</li>
<li>Kwon, H., Park, M., Nepali, S., Lew, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-preconditioned+placenta-derived+mesenchymal+stem+cells+rescue+optic+nerve+axons+via+differential+roles+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+an+optic+nerve+compression+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-preconditioned placenta-derived mesenchymal stem cells rescue optic nerve axons via differential roles of vascular endothelial growth factor in an optic nerve compression animal model.</a> Mol Neurobiol. 57 (8), 3362-3375 (2020).</li>
<li>Pang, I. H., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+glaucoma+retinopathy+and+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">Rodent models for glaucoma retinopathy and optic neuropathy.</a> J Glaucoma. 16 (5), 483-505 (2007).</li>
<li>Raykova, K., Jones, M. V., Huang, H., Hoffman, P. F., Levy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally-invasive+Technique+for+Injection+into+Rat+Optic+Nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Minimally-invasive Technique for Injection into Rat Optic Nerve.</a> J Vis Exp. (99), e52249(2015).</li>
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<li>Yan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+optic+nerve+transection+in+rats%3A+A+model+established+with+a+new+operative+approach+to+assess+secondary+degeneration+of+retinal+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Partial optic nerve transection in rats: A model established with a new operative approach to assess secondary degeneration of retinal ganglion cells.</a> J Vis Exp. (128), e56272(2017).</li>
<li>Han, I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocompatibility+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+retinal+progenitor+cell+grafts+in+immunocompromised+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Biocompatibility of human induced pluripotent stem cell-derived retinal progenitor cell grafts in immunocompromised rats.</a> Cell Transplantation. 31, 1-25 (2022).</li>
<li>Tang, Y., Gutmann, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromatosis+Type+1-associated+optic+pathway+gliomas%3A+Current+challenges+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Manag+Res%22%5BJournal%5D)">Neurofibromatosis Type 1-associated optic pathway gliomas: Current challenges and future prospects.</a> Cancer Manag Res. 15, 667-681 (2023).</li>
<li>Pan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+of+biomimetic+polydopamine+nanocomposite+scaffold+promotes+optic+nerve+regeneration+through+modulating+inhibitory+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnol%22%5BJournal%5D)">Implantation of biomimetic polydopamine nanocomposite scaffold promotes optic nerve regeneration through modulating inhibitory microenvironment.</a> J Nanobiotechnol. 22 (1), 683(2024).</li>
<li>Gokoffski, K. K., Peng, M., Alas, B., Lam, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuro-protection+and+neuro-regeneration+of+the+optic+nerve%3A+recent+advances+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neuro-protection and neuro-regeneration of the optic nerve: recent advances and future directions.</a> Curr Opin Neurol. 33 (1), 93-105 (2020).</li>
<li>Negishi, H., Dezawa, M., Oshitari, T., Adachi-Usami, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+nerve+regeneration+within+artificial+Schwann+cell+graft+in+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Optic nerve regeneration within artificial Schwann cell graft in the adult rat.</a> Brain Res Bull. 55 (3), 409-419 (2001).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4',6-Diamidino-2-phenylindol-dihydrochlorid (DAPI)</td><td>MilliporeSigma</td><td>D9542</td><td>1:10.000 Verdünnung, zur Färbung von Kryoschnitten</td></tr><tr><td>AAV-Viruspartikel</td><td>Vectorbuilder</td><td>N/A</td><td>Vektor zur Injektion von Sehnerven</td></tr><tr><td>Aqua-Mount Eindeckmedium</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-390-5</td><td>Zur Einbettung von gefärbten Kryoschnitten</td></tr><tr><td>Rinderserum Albumin&nbsp;</td><td>Research Products International Corp</td><td>9048-46-8</td><td>Wird im Prozess zum Färben von Kryosektionen verwendet</td></tr><tr><td>Ziege Anti-Ratte Alexa Fluor 488&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11006</td><td>1:1000 Verdünnung, zur Färbung von Kryoschnitten</td></tr><tr><td>Isoflorangas</td><td>Primal Healthcare</td><td>66794-017-10</td><td>Gas für die Anästhesie</td></tr><tr><td>Leica TCS SPE aufrechtes konfokales Mikroskopsystem</td><td>Leica Microsystems</td><td>N/A</td><td>Konfokalmikroskop</td></tr><tr><td>Luer-Lock-Spritze</td><td>BD</td><td>309628</td><td>Injektionsspritze</td></tr><tr><td>Microm HM505E Kryostat</td><td>Microm</td><td>M-HM360 von Marshall Scientific</td><td>Wird für die Probentrennung</td></tr><tr><td>von Ratten-Anti-GFP&nbsp;</td><td>BioLegend</td><td>338002</td><td>Verdünnung im Verhältnis 1:500, zur Färbung von Kryosektionen</td></tr><tr><td>Rückenmarkhaken</td><td>F.S.T</td><td>10162-12</td><td>Haken zur Isolierung des Sehnervs</td></tr><tr><td>Zehn-Mikroliter-Spritze</td><td>Hamilton</td><td>CAL 803901</td><td>Injektionsspritze</td></tr><tr><td>Dreiunddreißig-Gramm-Nadel</td><td>JBP</td><td>JBP3308B</td><td>Injektionsnadel</td></tr><tr><td>Tissue-Tek OCT-Verbindung</td><td>VWR International</td><td>25608-930</td><td>Wird für die Kryoform-Verarbeitung</td></tr><tr><td>verwendet Zahnzange</td><td>Bausch und Lomb</td><td>E1809</td><td>Pinzette zum Greifen der Bindehaut</td></tr><tr><td>Westcott gebogene Tenotomieschere</td><td>Bausch und Lomb</td><td>E3323-R</td><td>Schere zur Herstellung der Peritomie</td></tr></tbody></table>

transkonjunktivaler zugang zur injektion in den sehnerv der ratte

Transconjunctival Approach for Injection into the Rat Optic Nerve

Repräsentative experimentelle Ergebnisse mit dieser Technik zur Injektion des Sehnervs der Ratte sind in Abbildung 2 dargestellt. In diesem Beispiel wurde das Adeno-assoziierte Virus-eGFP (AAV-eGFP) mit der oben beschriebenen transkonjunktivalen Technik mit einer 33-G-Nadel, die mit einer 10-μl-Spritze verbunden war, in den Sehnerv der Ratte injiziert. Diese Ergebnisse waren Teil eines Experiments, bei dem diese Technik zur Untersuchung der Injektion von Sehnerven als Teil des ultimativen Ziels verwendet wurde, AAV zur CRISPR-Korrektur der Sehnerven in einem Rattenmodell der Neurofibromatose 1 (NF1) zu verwenden. Eine Kombination aus Farbstoff und AAV-Vektor wurde verwendet, um die Injektionstechnik zu entwickeln. Die Tiere wurden sieben Tage nach der Injektion in den Sehnerv getötet. Anschließend wurden Nerven präpariert und mit Anti-GFP-Antikörpern markiert, um eine Abbildung des Sehnervs mit konfokaler Mikroskopie zu ermöglichen, um zu bestätigen, dass das Material erfolgreich in die Sehnervenscheide eingedrungen und in den Sehnerv eingedrungen war. Die erfolgreiche Einführung von Material in den Sehnerv wurde durch Antikörperfärbung bestätigt und erschien in der konfokalen Mikroskopie grün, wie in Abbildung 2A zu sehen ist. In Fällen, in denen die Penetration durch die Sehnervenscheide nicht vollständig war oder Material aus der Nadelbahn austrat, war die Färbung entlang des Randes der Sehnervenscheide und nicht innerhalb des Nervengewebes zu sehen, wie in Abbildung 2C zu sehen ist.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68048/68048fig01.jpg"> 
Abbildung 1: Abfolge der Operationsschritte. (A) Die Bindehaut wird mit einer Zahnzange gegriffen und mit einer Westcott-Schere wird eine limbale Peritomie angelegt. (B) Nachdem die Faszie des Zapfens geöffnet und stumpf präpariert wurde, wird die Augenhöhle mit Hilfe einer Westcott-Schere freigelegt. (C) Ein Rückenmarkshaken wird eingeführt und zur Isolierung des Sehnervs verwendet. (D) Nach stumpfer Dissektion des darüber liegenden Orbitagewebes wird der Sehnerv mit dem Rückenmarkshaken freigelegt. (E) Eine 33-G-Nadel wird verwendet, um die Sehnervenscheide zu durchstechen und Adenoviren oder Farbstoffe in den Sehnerv zu injizieren. (F) Der Globus wird in die Orbita zurückversetzt und die Bindehaut wird über der Peritomiestelle neu positioniert. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68048/68048fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68048/68048fig02.jpg"> 
Abbildung 2: Repräsentatives fluoreszierendes konfokales Panoramabild des Sehnervs der Ratte 7 Tage nach erfolgreicher Injektion mit AAV-eGFP (grün), in dem der Vektor Neuronen in der Nähe des Chiasma opticum transduzierte. (A) Die Kerne des Sehnervs sind mit DAPI markiert (blau). ONH mit Pfeil bezeichnet den Sehnervenkopf oder das orbitale Ende des Nervs, während das Chiasma opticum als "Chiasma" bezeichnet wird. (B) Foto eines Sehnervs der Ratte von der Orbita bis zum Chiasma, eingebettet in einen gefrorenen Kryosektionsblock. Der Nerv wird unmittelbar hinter der Augenhöhle (Injektionsstelle durch schwarzen Pfeil gekennzeichnet) mit Tusche injiziert, um den Sehnerv auszurichten. (C) Panorama-Fluoreszenzbild des Sehnervs der Ratte 7 Tage nach erfolgloser Injektion mit AAV-eGFP (grün), bei dem wahrscheinlich der größte Teil der Vektorsuspension aus dem Nerventrakt ausströmte und die Sehscheide transduzierte. Die Kerne des Sehnervs sind mit DAPI (blau) markiert. ONH bezeichnet den Sehnervenkopf unmittelbar hinter der neuralen Netzhaut und der Injektionsstelle, der durch einen weißen Pfeil gekennzeichnet ist. Chiasma und weißer Pfeil grenzen zum Chiasma opticum ab. Maßstabsleisten = 400 μm in (A) und 200 μm in (C). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68048/68048fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Variable</td>
			<td colspan="3">Annähern</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Transkonjunktival</td>
			<td>Überlegen</td>
			<td>Seitlich</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hautschnitt</td>
			<td>Nein</td>
			<td>Ja</td>
			<td>Ja</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bindehautschnitt</td>
			<td>Ja</td>
			<td>Nein</td>
			<td>Nein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mikroskop</td>
			<td>Ja</td>
			<td>Ja</td>
			<td>Ja</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Durchtrennung des Musculus orbitalis superior</td>
			<td>Nein</td>
			<td>Ja</td>
			<td>Nein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Traktionsnaht</td>
			<td>Nein</td>
			<td>Ja</td>
			<td>Ja</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Haken für das Rückenmark</td>
			<td>Ja</td>
			<td>Nein</td>
			<td>Nein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hautnaht</td>
			<td>Nein</td>
			<td>Ja</td>
			<td>Ja</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabelle 1: Vergleich mit zuvor veröffentlichten Techniken zur Isolierung des Sehnervs der Ratte für experimentelle Studien. Variablen, einschließlich der Notwendigkeit eines Hautschnitts, eines Bindehautschnitts, eines Operationsmikroskops, einer Durchtrennung des Musculus orbitalis superior, einer Traktionsnaht, eines Rückenmarkshakens und einer Hautnaht, werden mit dem transkonjunktivalen, superioren und lateralen Zugang verglichen.

Transkonjunktivaler Zugang zur Injektion in den Sehnerv der Ratte

The rat serves as an important model for studying disorders of the optic nerve, including heritable, traumatic, neoplastic, and autoimmune conditions. ...

transconjunctival-approach-for-injection-into-the-rat-optic-nerve

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Intravitreale Injektion ist eine weit verbreitete Technik in Visual Sciences Forschung für Augenerkrankungen oder als direkte Anwendung der lokalen Behandlung. Dieses Video demonstriert ein Protokoll für die intravitreale Injektion mit einer 1 ml Spritze mit Glaspipette. Nützliche Tipps zum Vermeiden von massiven Blutungen und Linse beschädigen gegeben sind.

Intravitrealen Injektion zur Einrichtung Ocular Krankheiten Modell

Optic Nerve Durchtrennung ist eine weit verbreitete Modell der erwachsenen ZNS-Verletzung. Dieses Modell ist ideal für die Durchführung einer Reihe von experimentellen Manipulationen, die die Netzhaut Ziel global oder direkt auf den verletzten neuronalen Population von retinalen Ganglienzellen.

Methoden für die experimentelle Manipulationen nach Optic Nerve Durchtrennung im Säuger-ZNS

Dieses Video zeigt die Induktion eines Glaukoms bei einer anästhesierten Ratte durch Injektion von hypertoner Kochsalzlösung in die Episkleralle. Die Kochsalzlösung gelangt über den Schlemm-Kanal in das Trabekelwerk und verursacht Gewebenarben, die den Abfluss des Kammerwassers blockieren und den Augeninnendruck erhöhen. Der erhöhte Druck schädigt die Ganglienzellen der Netzhaut, was zum Glaukom führt.

Eine hypertone Kochsalzlösungs-Injektionstechnik zur Induktion eines Glaukoms bei Ratten

Direkte Injektion in den Sehnerv der Ratte ist nützlich für die regenerative Forschung. Wir demonstrieren eine minimal-invasive Technik zur direkten Injektion in einen Sehnerv der Ratte, bei der der Schädel nicht geöffnet werden muss. Mit dieser Methode werden chirurgische Komplikationen minimiert und die Genesung ist schneller.

Minimal-invasive Technik für die Injektion in Ratten-Optic Nerve

Der folgende Bericht beschreibt, wie das Nagetiermodell der nicht-arteriitischen anterioren ischämischen Optikusneuropathie (rNAION) unter Verwendung der entsprechenden Farbstoff-, Kontaktlinsen- und Laserparameter repliziert werden kann. Wir zeigen auch die geeigneten Schritte zur Beurteilung der rNAION-Läsion in vivo auf.

Das Nagetier-Modell der nonarteritic anteriore ischämische Optikusneuropathie (rNAION)

Subretinale Injektionen sind die gebräuchlichste Technik zur Verabreichung großer therapeutischer Wirkstoffe wie Proteine und viraler Vektoren an Photorezeptoren und das retinale Pigmentepithel. Eine alternative Methode bei Mäusen, die erfolgreich auf den subretinalen Raum mit minimalen Kollateralschäden und schnellen Erholungszeiten abzielt, wird hier beschrieben.

Eine Alternative und Validated Injektionsmethode für den Zugriff auf den subretinalen Raum<i&gt; über</i&gt; A Transcleral dorsalen Zugang

Dieses Protokoll zielt darauf ab, einen reproduzierbaren venösen Verabreichungsweg zu demonstrieren, der bei Ratten und Mäusen während der gesamten Neugeborenenperiode angewendet werden kann. Dieses Verfahren ist wichtig für präklinische Studien an Nagetieren, die die Verabreichung von Medikamenten auf Neugeborenenstationen in erster Linie durch intravenöse Verabreichung widerspiegeln möchten.

Ein neonatales Nagetiermodell der retroorbitalen Veneninjektion

Dieses Protokoll beschreibt eine Technik zur intrakameralen Injektion bei Ratten unter Verwendung eines zentralen Hornhautschnitts und eines langen Tunnels in die Vorderkammer. Diese Injektionsmethode minimiert das Risiko einer versehentlichen Gewebeschädigung und verbessert dadurch die Präzision und Reproduzierbarkeit.

Intrakamerale Injektion bei Ratten mit geringem Risiko für Nebenwirkungen

In diesem Artikel werden Methoden zur subretinalen Injektion bei Ratten beschrieben, bei denen intraoperative Visualisierung verwendet wird, um sowohl die Injektionsstelle als auch den Bereich der Netzhautablösung zu kontrollieren.

Intraoperative Visualisierung der subretinalen Injektion und Netzhautablösung bei Ratten

Diese Studie stellt eine Methodik für die Verabreichung von Therapeutika in die Netzhaut und die Sehnerven der erwachsenen Ratte vor. Darüber hinaus wird eine einzigartige Gewebeentnahmemethode für eine Top-Down-Entnahme des Sehnervs und der Netzhaut bei einer erwachsenen Ratte eingeführt.

Okuläre therapeutische Verabreichung und fortgeschrittene Gewebeentnahme bei erwachsenen Ratten

Lernen Sie einen minimalinvasiven transkonjunktivalen Zugang zur Injektion in den Sehnerv der Ratte. Diese Methode ermöglicht die gezielte Applikation therapeutischer Substanzen bei Neurofibromatose-Typ-1-Forschung.

Transkonjunktivaler Zugang zur Injektion in den Sehnerv der Ratte

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