Transkonjunktivaler Zugang zur Injektion in den Sehnerv der Ratte

Diese Forschung zielt darauf ab, effektivere Methoden für die Therapie des Sehnervs bei Patienten mit Neurofibromatose Typ 1 zu entwickeln. Unser Protokoll konzentriert sich auf die Erforschung besserer Techniken für den Zugang zum Sehnerv der Ratte für experimentelle Studien. Dieses Protokoll bietet den Vorteil, dass es minimalinvasiv ist und keine Hautinzision erforderlich ist.

[Demonstrant] Fassen Sie zunächst die Bindehaut im inferotemporalen Quadranten mit einer Zahnzange. Verwenden Sie eine Westcott-Schere, um einen radialen Bindehautschnitt zu erstellen, und öffnen Sie dann die Sehnenfaszie im inferonasalen Quadranten. Verwenden Sie eine stumpfe Dissektion, um überliegendes Orbitalgewebe zu entfernen. Drehen Sie das Auge nasal mit einer Zahnzange. Lassen Sie den Assistenten einen Rückenmarkshaken in den inferotemporalen Quadranten einführen, um den Sehnerv zu isolieren. Entfernen Sie mit einer stumpfen Dissektion mit einer Pinzette oder einem Applikator mit Wattespitze das verbleibende Orbitagewebe und die Sehnenfaszie, um den Sehnerv und die Scheide freizulegen. Durchstechen Sie mit einer 33-Gauge-Nadel, die entweder mit einer 10-Mikroliter- oder einer 1-Milliliter-Spritze verbunden ist, in die Sehnervenscheide. Injizieren Sie unterschiedliche Konzentrationen des Adeno-assoziierten Virus EGFP oder Tuschefarbstoff unter direkter Visualisierung in den Sehnerv, um sicherzustellen, dass das Material direkt in den Nerv injiziert wird. Nähern Sie sich der Bindehaut wieder dem Limbus an, um die Inzisionsstelle abzudecken. Diese Abbildung veranschaulicht die Ergebnisse der erfolgreichen und erfolglosen Verabreichung von Adeno-assoziierten Virus-EGFP in den Sehnerv der Ratte unter Verwendung einer transkonjunktivalen Injektionstechnik. Die erfolgreiche Injektion des Sehnervs führte zu einem weit verbreiteten grün fluoreszierenden Signal im Nervengewebe, was auf eine effektive Penetration des Adeno-assoziierten Virus-EGFP-Vektors hinweist. Die erfolglose Injektion zeigte ein grünes Signal nur entlang des äußeren Randes des Sehnervs, was darauf hindeutet, dass das Material ausgelaufen ist und nicht in das Nervengewebe eingedrungen ist.