Name: Zellsubtyp-spezifische Analyse von neuronalen Membranproteasomen in somatosensorischen Neuronen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-10T13:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 27 s
Description: Erfahren Sie die zelltypspezifische Analyse neuronaler Membranproteasomen in somatosensorischen Neuronen mittels Zellsortierung und Immunfluoreszenz. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von NMP-Expression und -Funktion bei Gesundheit und Krankheit.

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<ol><li>Cartelli, D., Cavaletti, G., Lauria, G., Meregalli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ubiquitin+proteasome+system+and+microtubules+are+master+regulators+of+central+and+peripheral+nervous+system+axon+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Ubiquitin proteasome system and microtubules are master regulators of central and peripheral nervous system axon degeneration.</a> Cells. 11 (8), 1358(2022).</li>
<li>Fortun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+proteasome+activity+and+accumulation+of+ubiquitinated+substrates+in+a+hereditary+neuropathy+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Impaired proteasome activity and accumulation of ubiquitinated substrates in a hereditary neuropathy model.</a> J Neurochem. 92 (6), 1531-1541 (2005).</li>
<li>Thibaudeau, T. A., Smith, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+review+of+proteasome+pharmacology%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Rev%22%5BJournal%5D)">A practical review of proteasome pharmacology.</a> Pharmacol Rev. 71 (2), 170-197 (2019).</li>
<li>Türker, F., Cook, E. K., Margolis, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+proteasome+and+its+role+in+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">The proteasome and its role in the nervous system.</a> Cell Chem Biol. 28 (7), 903-917 (2021).</li>
<li>VerPlank, J. J. S., Lokireddy, S., Feltri, M. L., Goldberg, A. L., Wrabetz, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impairment+of+protein+degradation+and+proteasome+function+in+hereditary+neuropathies%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Impairment of protein degradation and proteasome function in hereditary neuropathies.</a> Glia. 66 (2), 379-395 (2018).</li>
<li>Moss, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+of+the+ubiquitin-proteasome+system+in+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A role of the ubiquitin-proteasome system in neuropathic pain.</a> J Neurosci. 22 (4), 1363-1372 (2002).</li>
<li>Meregalli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bortezomib-induced+painful+neuropathy+in+rats%3A+a+behavioral%2C+neurophysiological+and+pathological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pain%22%5BJournal%5D)">Bortezomib-induced painful neuropathy in rats: a behavioral, neurophysiological and pathological study.</a> Eur J Pain. 14 (4), 343-350 (2010).</li>
<li>Meregalli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+bortezomib-induced+neurotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxics%22%5BJournal%5D)">An overview of bortezomib-induced neurotoxicity.</a> Toxics. 3 (3), 294-303 (2015).</li>
<li>Velasco, R., Alberti, P., Bruna, J., Psimaras, D., Argyriou, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bortezomib+and+other+proteosome+inhibitors-induced+peripheral+neurotoxicity%3A+from+pathogenesis+to+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Peripher+Nerv+Syst%22%5BJournal%5D)">Bortezomib and other proteosome inhibitors-induced peripheral neurotoxicity: from pathogenesis to treatment.</a> J Peripher Nerv Syst. 24 (Suppl 2), S52-S62 (2019).</li>
<li>Cavaletti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bortezomib-induced+peripheral+neurotoxicity%3A+a+neurophysiological+and+pathological+study+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Bortezomib-induced peripheral neurotoxicity: a neurophysiological and pathological study in the rat.</a> Exp Neurol. 204 (1), 317-325 (2007).</li>
<li>Cata, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+sensory+findings+in+patients+with+bortezomib-induced+pain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pain%22%5BJournal%5D)">Quantitative sensory findings in patients with bortezomib-induced pain.</a> J Pain. 8 (4), 296-306 (2007).</li>
<li>Meng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+neuropathy+during+concomitant+administration+of+proteasome+inhibitors+and+factor+Xa+inhibitors%3A+identifying+the+likelihood+of+drug-drug+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Peripheral neuropathy during concomitant administration of proteasome inhibitors and factor Xa inhibitors: identifying the likelihood of drug-drug interactions.</a> Front Pharmacol. 13, 757415(2022).</li>
<li>Mina, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-marketing+analysis+of+peripheral+neuropathy+burden+with+new-generation+proteasome+inhibitors+using+the+FDA+adverse+event+reporting+system%5BTitle%5D)+AND+%22Turk+J+Hematol%22%5BJournal%5D)">Post-marketing analysis of peripheral neuropathy burden with new-generation proteasome inhibitors using the FDA adverse event reporting system.</a> Turk J Hematol. 38 (3), 218-221 (2021).</li>
<li>Holzer, A. -K., Suciu, I., Karreman, C., Goj, T., Leist, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+attenuation+of+purinergic+signaling+during+bortezomib-induced+peripheral+neuropathy+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Specific attenuation of purinergic signaling during bortezomib-induced peripheral neuropathy in vitro.</a> Int J Mol Sci. 23 (7), 3734(2022).</li>
<li>Meng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((a+potent+and+selective+proteasome+inhibitor%2C+exhibits+in+vivo+antiinflammatory+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">a potent and selective proteasome inhibitor, exhibits in vivo antiinflammatory activity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96 (18), 10403-10408 (1999).</li>
<li>Maupin-Furlow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteasomes+and+protein+conjugation+across+domains+of+life%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Proteasomes and protein conjugation across domains of life.</a> Nat Rev Microbiol. 10 (2), 73-82 (2012).</li>
<li>Coux, O., Tanaka, K., Goldberg, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+functions+of+the+20S+and+26S+proteasomes%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Biochem%22%5BJournal%5D)">Structure and functions of the 20S and 26S proteasomes.</a> Annu Rev Biochem. 65 (1), 801-847 (1996).</li>
<li>Groll, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+20S+proteasome+from+yeast+at+2.4+%C3%85+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structure of 20S proteasome from yeast at 2.4 Å resolution.</a> Nature. 386 (6624), 463-471 (1997).</li>
<li>Pines, J., Lindon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteolysis%3A+anytime%2C+any+place%2C+anywhere%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Proteolysis: anytime, any place, anywhere.</a> Nat Cell Biol. 7 (8), 731-735 (2005).</li>
<li>Landeros, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nociceptive+activity+of+peripheral+sensory+neurons+is+modulated+by+the+neuronal+membrane+proteasome%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">The nociceptive activity of peripheral sensory neurons is modulated by the neuronal membrane proteasome.</a> Cell Rep. 43 (4), 114058(2024).</li>
<li>Qi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+DRG+genetic+toolkit+reveals+morphological+and+physiological+diversity+of+somatosensory+neuron+subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A mouse DRG genetic toolkit reveals morphological and physiological diversity of somatosensory neuron subtypes.</a> Cell. 187 (6), 1508-1526.e16 (2024).</li>
<li>Sharif, B., Ase, A. R., Ribeiro-da-Silva, A., Séguéla, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+coding+of+itch+and+pain+by+a+subpopulation+of+primary+afferent+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Differential coding of itch and pain by a subpopulation of primary afferent neurons.</a> Neuron. 106 (6), 940-951.e4 (2020).</li>
<li>Krueger, E. R., Church, T. R., Brennan, A., Türker, F., Landeros, E. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+to+study+neuronal+membrane+proteasome+function+in+mouse+peripheral+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol to study neuronal membrane proteasome function in mouse peripheral sensory neurons.</a> STAR Protoc. 6 (1), 103552(2025).</li>
<li>Chiu, M. L., Goulet, D. R., Teplyakov, A., Gilliland, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+structure+and+function%3A+the+basis+for+engineering+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Antibodies%22%5BJournal%5D)">Antibody structure and function: the basis for engineering therapeutics.</a> Antibodies. 8 (4), 55(2019).</li>
<li>Ramachandran, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity-dependent+degradation+of+the+nascentome+by+the+neuronal+membrane+proteasome%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Activity-dependent degradation of the nascentome by the neuronal membrane proteasome.</a> Mol Cell. 71 (1), 169-177.e6 (2018).</li>
<li>He, H. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+membrane+proteasomes+regulate+neuronal+circuit+activity+in+vivo+and+are+required+for+learning-induced+behavioral+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Neuronal membrane proteasomes regulate neuronal circuit activity in vivo and are required for learning-induced behavioral plasticity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 120 (3), e2216537120(2023).</li>
<li>Paradise, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ApoE+isoforms+differentially+regulate+neuronal+membrane+proteasomes+to+shift+the+threshold+for+pathological+aggregation+of+endogenous+tau%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">ApoE isoforms differentially regulate neuronal membrane proteasomes to shift the threshold for pathological aggregation of endogenous tau.</a> bioRxiv. , (2022).</li>
<li>Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBanker%2C+G+%22Culturing+nerve+cells%22">Culturing nerve cells</a>. , 2nd edn, MIT Press. (1998).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 M HEPES-Pufferlösung, pH 7,3</td><td>Qualität Biologisch</td><td>118-089-721</td><td>FACS-Puffer</td></tr><tr><td>10x PBS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>70011-044</td><td>FACS-Puffer</td></tr><tr><td>16 % Paraformaldehyd (PFA)-Stammlösung; EM-Klasse</td><td>EMS</td><td>15710</td><td>Fixative Lösung</td></tr><tr><td>1x Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-010-023</td><td>FACS-Waschungen</td></tr><tr><td>5 mL Polystyrol-Röhrchen mit rundem Boden</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-6</td><td>FACS-Röhren</td></tr><tr><td>7-Aminoactinomycin D (7-AAD)</td><td>Invitrogen</td><td>Nr. A1310</td><td>Markiert tote Zellen</td></tr><tr><td>B27 Beilage</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17504044</td><td>Nährmedium</td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin</td><td>MilliporeSigma</td><td>Nr. A9647; CAS: 9048-46-8</td><td>BSA/TI/DMEM</td></tr><tr><td>Calciumchlorid-Dihydrat (CaCl?-2H? O)</td><td>MilliporeSigma</td><td>Nr. C7902</td><td>Komplette Kochsalzlösung</td></tr><tr><td>Hühner-Anti-Neurofilament-Schwerkette (NF-H)</td><td>MilliporeSigma</td><td>AB5539</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>DMEM/F12 1:1</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11320033</td><td>Nährmedium; BSA/TI/DMEM</td></tr><tr><td>Esel Anti-Ziegen IgG (H+L) Alexa Fluor Plus 555</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Nr. A32816</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>Esel Anti-Kaninchen IgG (H+L) Alexa Fluor Plus 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Nr. A32790</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>DyLight 405 Esel Anti-Huhn</td><td>Jackson Immunforschung</td><td>703-475-155</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>MilliporeSigma</td><td>Nr. E5134; CAS: 6381-92-6</td><td>Liberase TM/Liberase TL-papain Arbeitslösungen</td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum (FBS)</td><td>MilliporeSigma</td><td>Nr. A9647</td><td>Nährmedium/FACS-Puffer/Blockierungslösung</td></tr><tr><td>Glaspasteurpipette, 9 Zoll</td><td>Fisher Scientific</td><td>Artikel-Nr.: 1367820D</td><td>Titruration</td></tr><tr><td>Anti-PSMA2 für Ziegen</td><td>Hergestellt im Haus</td><td>NA</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>HEPES-Pulver</td><td>MilliporeSigma</td><td>Nr. H4034</td><td>Komplette Kochsalzlösung</td></tr><tr><td>Hoechst</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Nr. H21492</td><td>Nuklearer Fleck</td></tr><tr><td>Pferde-Serum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>26050070</td><td>Lösung zum Blockieren</td></tr><tr><td>IB4, Biotin-Konjugat</td><td>MilliporeSigma</td><td>Nr. L2140</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L2020-1MG</td><td>Kulturschale</td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25030081</td><td>Nährmedium</td></tr><tr><td>Lichase-Verreibung gering (TL)</td><td>MilliporeSigma</td><td>54010200001</td><td>Liberase TL Stammlösung</td></tr><tr><td>Lidase-Verreibung moderat (TM)</td><td>MilliporeSigma</td><td>5401119001</td><td>Liberase TM Stammlösung</td></tr><tr><td>Magnesiumchlorid-Hexahydrat (MgCl?-6H? O)</td><td>MilliporeSigma</td><td>Nr. M2393</td><td>Komplette Kochsalzlösung</td></tr><tr><td>Einhängemedien</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td>Fluormount-G</td></tr><tr><td>Papain</td><td>Worthington</td><td>Kat#: 9001-73-4</td><td>Liberase TL-Papain Arbeitslösung</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>MilliporeSigma</td><td>15140122</td><td>Nährmedium/FACS-Puffer</td></tr><tr><td>Poly-L-Lysin-Hydrobromid (PLL)</td><td>MilliporeSigma</td><td>Nr. P4707</td><td>Kulturschale</td></tr><tr><td>Kaliumchlorid (KCl)</td><td>MilliporeSigma</td><td>Nr. P5405</td><td>Komplette Kochsalzlösung</td></tr><tr><td>Kaninchen Anti-CGRP</td><td>Immunstern</td><td>24112</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>Natriumchlorid (NaCl)</td><td>MilliporeSigma</td><td>Nr. S9888; CAS: 7647-14-5</td><td>Komplette Kochsalzlösung</td></tr><tr><td>Sorbit</td><td>MilliporeSigma</td><td>56755-M</td><td>Komplette Kochsalzlösung</td></tr><tr><td>Streptavidin Alexa Fluor 647 Konjugat</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Nr. S21374</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Nr. S0389-500G</td><td>Fixative Lösung</td></tr><tr><td>Trypsin-Hemmer</td><td>MilliporeSigma</td><td>Nr. T9253; CAS: 9035-91-8</td><td>BSA/TI/DMEM</td></tr></tbody></table>

zellsubtyp-spezifische analyse von neuronalen membranproteasomen in somatosensorischen neuronen

Cell Subtype-specific Analysis of Neuronal Membrane Proteasome in Somatosensory Neurons

Die Fähigkeit, zwischen dem NMP und intrazellulären Proteasomen zu unterscheiden, beruht auf membranundurchlässigen Markierungsansätzen. Die Antikörperfütterung ermöglicht die Verwendung von Proteasom-Untereinheiten-spezifischen Antikörpern auf lebenden Neuronen, um Proteasomen zu markieren, die nur von außen zugänglich sind. Aufgrund ihrer Größe und Hydrophilie sind Antikörper nicht in der Lage, intakte Zellmembranen zu durchdringen24. Lebende Neuronen erhalten di...

Zellsubtyp-spezifische Analyse von neuronalen Membranproteasomen in somatosensorischen Neuronen

Sensory neuron signaling depends on functional proteasomes, and their subcellular localization influences function. A specialized proteasome complex, the ...

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Forschung

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Neurowissenschaften

Dieses Video zeigt, wie man die Proteasomaktivität in verschiedenen subzellulären Kompartimenten der lateralen Amygdala aus angstkonditionierten und kontrollierten Rattengehirnen mit einem fluorogenen Peptid-Assay messen kann. Das Proteasom spaltet das fluorogene Peptidsubstrat und setzt fluoreszierende Moleküle frei, die mit einem Plattenleser quantifiziert werden, um die Proteasomaktivität in den nukleären und synaptischen Proteinfraktionen zu bewerten. Eine erhöhte Kernaktivität deutet auf...

Messung der Proteasomaktivität in verschiedenen subzellulären Kompartimenten des Rattengehirns

Wir beschreiben ein Verfahren, um Protein auf der Oberfläche von lebenden Neuronen mit einem spezifischen polyklonalen Antikörper, der an die extrazelluläre Epitope zu beschriften. Protein, das von dem Antikörper auf der Zelloberfläche gebunden und anschließend über Endozytose aus Protein verbleibende unterschieden werden können, oder an der Oberfläche während der Inkubation gehandelt.

Differential Markierung von Zelloberflächen und internalisierten Proteine ​​Antikörper nach Fütterung der Live-kultivierten Neuronen

Dieser Artikel beschreibt die Anreicherung von Proteinen mit den synaptischen Plasmamembran durch Ultrazentrifugation auf einem diskontinuierlichen Saccharosegradienten verbunden. Die anschließende Herstellung der postsynaptischen Dichte Proteine ​​wird ebenfalls beschrieben. Proteinpräparate eignen sich für Western-Blot-oder 2D-DIGE-Analyse.

Vorbereitung der synaptischen Plasmamembran und Postsynaptische Dichte Proteinen mit einer diskontinuierlichen Saccharosegradienten

Lichtmikroskopische Techniken in Verbindung mit biochemischen Assays klären die Beteiligung der SNARE-vermittelten Exozytose an der Netrin-abhängigen Axonverzweigung auf. Diese Kombination von Techniken ermöglicht die Identifizierung molekularer Mechanismen, die die Axonverzweigung und die Veränderung der Zellform steuern.

Kombinierte Methodiken Verwendung der Rolle der Plasmamembran Lieferung Während Axon Branching und Neuronale Morphogenese zu definieren

Hier stellen wir ein Hirnmembran-Fraktionierungsprotokoll vor, das ein robustes Verfahren zur Isolierung von Proteinen, die zu verschiedenen synaptischen Kompartimenten gehören, darstellt.

Gehirn Membran Fraktionierung: An<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Ansatz zur Bewertung der Subsynaptischen Protein-Lokalisierung

Dieses Protokoll beschreibt die kritische Schritte und Vorsichtsmaßnahmen erforderlich, einzelne Zelle multiplex reversen Transkription Polymerase-Kettenreaktion nach Patch-Clamp durchzuführen. Diese Technik ist eine einfache und effektive Methode um das Expressionsprofil eines vorgegebenen Satzes Gene aus einer einzigen Zelle zeichnet sich durch Patch-Clamp-Aufnahmen zu analysieren.

Einzelne Zelle Multiplex reversen Transkription Polymerase-Kettenreaktion nach Patch-clamp

Dieses Protokoll wurde entwickelt, um die Aktivität des Ubiquitin-Proteasom-Systems (UPS) in verschiedenen zellulären Kompartimenten des Nagetierhirns effizient zu quantifizieren. Anwender sind in der Lage, die USB-Funktion in nuklearen, zytoplasmatischen und synaptischen Fraktionen bei demselben Tier zu untersuchen, wodurch die Zeit und Anzahl der Tiere, die für die Durchführung dieser komplexen Analysen benötigt werden, reduziert wird.

Quantifizierung subzellulärer Ubiquitin-Proteasom-Aktivität im Nagetierhirn

Die Kryoschnitt-Dissektion ermöglicht die frische, gefrorene Vorbereitung der größten neurogenen Nische im murinen Gehirn für eine tiefe quantitative Proteomanalyse. Die Methode ist präzise, effizient und verursacht minimale Gewebestörungen. Daher eignet es sich ideal für die Untersuchung der molekularen Mikroumgebung dieser Nische sowie anderer Organe, Regionen und Arten.

Kryoschnitt-Dissektion der adulten subependymalen Zone für genaue und tiefe quantitative Proteomanalyse

Ein neuronales Lysosomen-Proximity-Markierungs-Proteomik-Protokoll wird hier beschrieben, um die dynamische lysosomale Mikroumgebung in humanen induzierten pluripotenten Stammzell-abgeleiteten Neuronen zu charakterisieren. Lysosomale Membranproteine und Proteine, die mit Lysosomen interagieren (stabil oder vorübergehend), können in dieser Methode mit hervorragender intrazellulärer räumlicher Auflösung in lebenden menschlichen Neuronen genau quantifiziert werden.

Charakterisierung des neuronalen Lysosomen-Interaktoms mit Proximity-Markierungsproteomik

Dieses Protokoll stellt eine robuste, detaillierte Methode dar, um hochreine Synaptosomen, synaptische Vesikel und andere synaptische Fraktionen aus dem Mausgehirn zu erhalten. Diese Methode ermöglicht die Bewertung synaptischer Prozesse, einschließlich der biochemischen Analyse der Proteinlokalisation und -funktion mit kompartimentärer Auflösung.

Subzelluläre Fraktionierung zur Isolierung synaptischer Komponenten aus dem murinen Gehirn

Erfahren Sie die zelltypspezifische Analyse neuronaler Membranproteasomen in somatosensorischen Neuronen mittels Zellsortierung und Immunfluoreszenz. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von NMP-Expression und -Funktion bei Gesundheit und Krankheit.

Zellsubtyp-spezifische Analyse von neuronalen Membranproteasomen in somatosensorischen Neuronen

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