Summary
تم تصميم هذا البروتوكول لتوفير معلومات تعليمية لنشر كلونال القنب ساتيفا L. من خلال تنفيذ النظم aeroponic. الطريقة الموصوفة هنا تشمل جميع الإمدادات والبروتوكولات اللازمة لإعادة إنتاج بنجاح الخصائص المورفولوجية والكيميائية المرغوبة في جنس القنب.
Abstract
يصف هذا البروتوكول توحيد تقنية الانتشار اللاستنساخي الفعالة للقنب باستخدام الأنظمة الأيروبونيكية. تم استئصال قصاصات التصوير الأولية من نوعين من القنب ، واسمهما "نبيذ الكرز" و "Red Robin" (17-20٪ ث / ث CBD) ، التي كانت بمثابة "النبات الأم". تم تطبيق سلائف أوشين (حمض الاندول-3-بوتيريك) لتحفيز نمو الجذر في الجزء القاعدي من القطع المقتطعة قبل وضعها في النظام. تم ضباب القطع بخفة مع محلول الضباب الغذائي كل ثلاثة أيام لتوفير الدعم الغذائي حيث يحتوي الحل على المغذيات الكبيرة الأساسية ، بما في ذلك النيتروجين والفوسفور والبوتاسيوم. حافظ خزان مياه النظام الهوائي على نطاق درجة الحموضة بين 5.0-6.0 ودرجة حرارة المياه بين 20-22 درجة مئوية. واستخدمت مضخة مياه غاطسة لتوصيل المياه إلى القطع. تم تزويد قصاصات طرف التصوير ب 24 ساعة من الضوء يوميا لمدة 10 أيام حتى حدث تطور الجذر ، والتي تم زرع القطع المتجذرة لأغراض البحث. وقد أثبتت هذه النظم الأيروبونية أنها تولد نتائج مرغوبة لنشر القنب . الأسلوب الموصوف هنا يخفف من القيود الزمنية المحتملة التي تنشأ عن الأساليب التقليدية للسماح لوسائل أكثر كفاءة لنشر اللاجنسي القنب.
Introduction
القنب ساتيفا L. هو سنوي، ثنائي، نبات المزهرة تصنف في Cannabaceae الأسرة. القنب، التي تنتج في الغالب داخل trichomes الغدية تقع على طبقة البشرة الخارجية من الأنسجة bract على inflorescences الإناث1، أصبحت موضوعا بحثيا شعبية متزايدة، ويرجع ذلك في المقام الأول إلى خصائصها الطبية المعترف بها تدريجيا. القنب (CBD) هو ثاني أبرز القنب وجدت في القنب بعد Δ9-tetrahydrocannabinol (THC) ويعزى إلى مجموعة من الفوائد الطبية, بما في ذلك خصائص مسكن2, خصائص مضادة للنوبات3, خصائص مضادة للاكتئاب4, الحد من خطر مرض السكري5, وعلاج اضطرابات النوم المختلفة6. نظرا لتعدد الفوائد الصحية المرتبطة المستقلبات من نبات القنب، وهناك طلب متزايد لإنتاجه على نطاق تجاري7. ولمقابلة هذا الطلب، يجري باستمرار تحسين أساليب الزراعة وإعادة اختراعها لتوفير مواد نباتية متسقة وعالية الجودة باستمرار لصناعة القنب الناشئة.
ويمكن تيسير انتشار القنب بطريقتين: الإنجاب الجنسي أو اللاجنسي. مثال على التكاثر الجنسي هو تلقيح البويضة الأنثوية بحبوب اللقاح من ستامين الذكر مما يؤدي إلى بذرة يمكن أن تنبت. إنبات البذور هو أسلوب زراعة موثوق به تم استخدامه لأغراض التربية والزراعة حيث يتم اختيار الصفات الظاهرية المرغوبة في الخطوط الأبوية لتحسين جودة نباتات القنب الذرية ، بما في ذلك سمات مثل تحمل الجفاف ومقاومة الحشرات وزيادة الغلة وزيادة الفعالية8 . ومع ذلك ، فإن التلقيح المتبادل غير المقصود هو خطر كامن عند إجراء الإنجاب الجنسي ، مما يسبب ذرية غير مرغوب فيها ، مما يؤدي إلى فقدان محتمل للسمات المرغوبة أو إدخال الصفات غير المرغوب فيها. ويبرز مثال على هذا التلقيح غير المقصود من قبل مزارعي القنب الذين يتلقون بذور القنب الملقحة بحبوب اللقاح المنتجة ل THC مما يؤدي إلى خسارة اقتصادية كبيرة بسبب النباتات غير المتوافقة (>0.3٪ إجمالي THC w/w)9. بالإضافة إلى ذلك ، لتوليد محصول يتكون من الإناث فقط ، يجب زرع بذرة أنثوية بدلا من بذور غير أنثوية ، مما قد يؤدي إلى التهاب الهرمافروديتيز وغيرها من الصفات غير المرغوب فيها مما يؤدي إلى خسارة اقتصادية. للتغلب على الحد من التكاثر الجنسي للقنب، وقد مارست على نطاق واسع التكاثر اللاجنسي في نماذج الإنتاج التجاري لصناعة القنب10.
لا يتطلب التكاثر الجنسي للقنب سوى نبات واحد ، مما يسمح بتكاثر نمط وراثي واحد يسمح بالإنتاج التجاري للنباتات التي تحمل سمات زراعية ودوائية مرغوبة. شكل شائع من أشكال تكاثر القنب اللاجنسي هو قطع وإدراج أجزاء صغيرة من نبات أنثى في الركيزة الخالية من التربة11 التي تغطيها قبة الرطوبة للحث على تكوين الجذر. على الرغم من أن هذه الطريقة قد أثبتت نجاحها ، إلا أن العيب الشائع هو تراكم مستوى عال من الرطوبة (عادة 80٪ أو أعلى) داخل القبة ، مما يوفر بيئة نمو مثالية لمسببات الأمراض الفطرية ، والتي يمكن أن تكون ضارة بالقطع الجديدة الحساسة. وثمة شكل آخر من أشكال الانتشار اللاجنسية هو التكاثر الدقيق باستخدام زراعة الأنسجة، حيث تسمح التقنيات العقيمة بنشر مواد نبات القنب الخالية من الحشرات والميكروبات والفيروسات في مساحة محدودة12. غير أن هذه العملية مكلفة وتستغرق وقتا طويلا وتتطلب فنيين مختبريين مدربين يتعذر الوصول إليهم عموما بالنسبة لمرافق القنب الواسعة النطاق.
ولا يوجد سوى عدد قليل جدا من التقارير البحثية المنشورة عن الانتشار اللاستنساخي للقنب. ومن أجل توفير أساس لفهم التكاثر اللاجنسية للقنب لأغراض البحث والإنتاج الصناعي، تهدف هذه الدراسة إلى إثبات سهولة وإمكانية الحصول على استخدام النظم الأيروبونية لنشر القنب بشكل شبهي. تعد الأنظمة Aeroponic مثالية لنشر القنب اللاجنسية ، حيث تزود باستمرار المياه الغنية بالمغذيات للقطع ، مما يؤدي إلى تكوين الجذر المبكر في الوقت المناسب ، والسماح بالحفاظ على النبات إلى أجل غير مسمى إذا لزم الأمر.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. توليد نبات الأم لنشر كلون
- اختر نبات الأم الأنثوية الصحي الذي يعرض خصائص مورفولوجية وكيميائية مرغوبة خاصة بالاستخدام المقصود.
- السماح للمصنع الأم للوصول إلى الحجم المناسب (ما يقرب من 25 يطلق النار ناضجة) لنشر كلونال (أي القطع).
- السماح للنباتات الأم بالبقاء في مرحلة النمو النباتي (الضوء: الظلام = 18 ساعة: 6 ساعة) لتعزيز نمو التصوير للانتشار في المستقبل.
2. بناء وإعداد نظام aeroponic
- ابدأ بوضع الغطاء فوق الحاوية (38.1 سم × 25.4 سم × 30.48 سم). حفر العدد المطلوب من الثقوب في الغطاء مع توفير مساحة كافية (ويفضل 3 سم) بين كل منهما.
- ضع مضخة المياه (جدول المواد) في وسط الحاوية.
- صب 7-8 لتر من الماء المقطر في الحاوية بحيث فوهة المضخة لا يزال ما يقرب من 2.5 سم فوق خط المياه.
ملاحظة: هذا يضمن مضخة المياه الغاطسة (جدول المواد) قادرة على دفع المياه مع ما يكفي من القوة للانتشار عبر غطاء الحاوية. ينصح الماء المقطر; ومع ذلك، يمكن أيضا استخدام مياه الصنبور العادية. - وضع الكمية المناسبة من مكعبات روكوول (3.81 سم) (جدول المواد) أو مكعبات الوسائط المفضلة في كل فتحة. تشغيل المضخة والسماح لها لتشغيل لمدة 24 ساعة.
ملاحظة: يفضل مكعبات روكوول بسبب قدرتها على "الرسو" على القطع المتجذرة حديثا التي تساعد على الحفاظ على النباتات تستقيم بعد زرع.
3. اختيار واختناق يطلق النار المناسبة
- جمع يطلق النار بالقرب من meristem apical باستخدام مشرط معقم أو مقص. القطع هي ~ 10 سم في الطول، من الناحية المثالية مع عدة عقد.
ملاحظة: قطع الجذعية بزاوية 45 درجة. قطع بزاوية 45 درجة يزيد من مساحة السطح للجزء القاعدي من القطع، مما يتيح مساحة أكبر لتطوير الجذر. من الاختياري إجراء فتحة صغيرة (1-2 سم) في منتصف القطع 45 درجة لزيادة مساحة السطح. - إزالة جميع أوراق الشجر باستثناء أوراق الشجر الموجودة على العقد الثلاثة الأولى.
- تراجع قطع المقتطعة حديثا في حل التأصيل التي تحتوي على حمض الندول-3-بوتيريك (IBA) (جدول المواد) ~ 2-5 سم من قاعدة الجذعية ل ~ 5 ق.
- أدخل القطع في وسط مكعب روكوول المتمركز في النظام aeroponic.
ملاحظة: عمق الإدراج القطع هو أن تبقى ~ 1-2 سم من الجزء السفلي من مكعب روكوول. - رش قصاصات unrooted مع محلول الضباب المغذيات (جدول المواد) كل 3 أيام.
- زراعة القطع مع 18-24 ساعة من الضوء يوميا مع كثافة تدفق الفوتون الضوئي (PPFD) من 100 ميكرومول / م2 / ثانية في 24-29 درجة مئوية و 40-60٪ الرطوبة النسبية.
4. صيانة النظام Aeroponic والصحة بروباجول
- تجديد النظام بالماء عند درجة الحموضة بين 5.0- 6.0 كل 2-5 أيام.
- ضباب طفيفة قصاصات (ضباب واحد لكل قطع) مع محلول الضباب المغذيات (جدول المواد) كل 3 أيام.
- أضف 5 مل من كل محلول غذائي (جدول المواد) إلى الخزان كل 3-5 أيام.
ملاحظة: إضافة المغذيات يسبب الماء ليكون البني وغامضة. - إضافة 15 مل من محلول تنظيف الطحالب والبكتيريا الذي يحتوي على حمض هيبوكلوروس (0.028٪) لكل 10 لتر من الماء كل 5 أيام (جدول المواد).
5. زرع البروباجول
- حدد القطع ذات الجذور الليفية الطويلة والبيضاء.
ملاحظة: تجنب القطع مع البني، لزج، وأنظمة الجذر القصير لأن هذا هو مؤشر لوجود تعفن الجذر وعادة ما يستغرق وقتا أطول للتأقلم مع المتوسطة المتنامية الجديدة ويمكن أن تجلب الأمراض غير المرغوب فيها. - طرد بعناية مكعب روكوول من النظام وفك الجذور.
- زرع بروباجوليس القنب إلى وعاء الحضانة 4 لتر مليئة مزيج التربة المغذية (جدول المواد).
ملاحظة: يوصى بالسقي على الفور لمنع الجذور من الجفاف.
6. تنظيف وتخزين نظام aeroponic
- عندما يكون النظام لم يعد قيد الاستخدام، اغسل بالماء وانظفه بالإيثانول بنسبة 70٪ أو مطهر آخر.
- إزالة مرشح من مضخة المياه وشطف بالماء لإزالة الحطام.
- جفف النظام عن طريق مسحه بالمناشف الورقية أو منشفة.
- ضع المضخة داخل الحوض مع الغطاء وتخزينها حتى تكون هناك حاجة إليها.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
للتحقق من كفاءة النظام aeroponic وصفها، تم استئصال ما مجموعه 10 و 12 يطلق النار صحية 14 سم طويلة من النباتات الأم، 'النبيذ الكرز' و 'روبن الأحمر'، على التوالي (الشكل 1A، B). وبعد الغطس في وسائط الحث الجذرية، وضعت المستنسخات في النظام (الشكل 2 ألف). يتم عرض بناء وتشغيل نظام aeroponic كرسم تخطيطي في الشكل 2A.
بعد يومين من التأقلم، بدأت جميع المستنسخات في تطوير جذور في 3-7 أيام وجذور متطورة بالكامل 37 سم في الطول بعد 10-14 يوما على النظام، والتي كانت كافية لزرعها في وعاء مملوءة بالتربة (الشكل 2B، D). الشكل 3 يبين متوسط طول يطلق النار وجذور كل مجموعة متنوعة. تم قياس طول التصوير وطول الجذر قبل نقله إلى التربة. وكان متوسط طول البراعم والجذور 24.8 سم ± 2.4 سم و 37.8 سم ± 2.5 سم ل "نبيذ الكرز" و 21.4 سم ± 2.1 سم و 39.7 سم ± 5.9 سم ل "روبن الأحمر"، على التوالي (الشكل 3A، B). تم تحليل الاختلافات بين النوعين من قبل ANOVA في اتجاهين ، تليها اختبار الرحمة المتعددة ل Tukey ، والتي لا تظهر اختلافات كبيرة في أطوال التصوير والجذر بين النوعين (n = 10-12 ، p < 0.05).
الشكل 1: نبات الأم السليمة التي تولد يطلق النار متعددة لنشر كلونال. (أ) النباتات الأم ناضجة، "النبيذ الكرز" (الجبهة) و "روبن الأحمر" (مرة أخرى) في ~ 4 أشهر من النمو الخضري، وعرض العديد من يطلق النار مثالية للنشر. (ب) طول تقريبي (14 سم) لاطلاق النار الختان السليم لاستنساخ القنب. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: إنشاء النظام الهوائي لنشر القنب اللاستنساخي. (أ) مخطط تخطيطي يوضح مكونات النظام الهوائي (38.1 سم × 25.4 سم × 30.48 سم). (ب) Aeroponic النظام مشغولة بالكامل من قبل "الكرز النبيذ" استنساخ. (ج) داخل النظام aeroponic مع استنساخ تظهر نمو الجذر. (د) نمو الجذر الصحي في مكعب روكوول بعد 10 أيام في النظام aeroponic. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: تبادل لاطلاق النار وقياسات طول الجذر ل "النبيذ الكرز" و "روبن الأحمر" بعد 10 أيام في نظام الاستنساخ aeroponic. (أ) شريط الرسم البياني و (ب) الجدول الذي يمثل طول تبادل لاطلاق النار والجذر في نوعين القنب. تم تحليل الاختلافات في أطوال تبادل لاطلاق النار / الجذر بين نوعين من قبل ANOVA في اتجاهين ، تليها اختبار المقارنات المتعددة توكي. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
ومع تزايد الطلب على نباتات القنب ذات المحتوى المتسق من القنب، استغلت أساليب مختلفة للنشر اللاستنساخي في صناعة القنب . يظهر الانتشار اللاجنسية العديد من المزايا على الطرق الجنسية للإنتاج على نطاق واسع ومتسق. نظام الانتشار aeroponic هو نسخة معدلة من نظام الزراعة المائية التي تستخدم ضباب المياه الغنية بالمغذيات الملطفة لتوفير التنمية الجذرية السريعة. يتكون النظام الأيروبوني الموصوف من ثلاث خطوات حاسمة ، 1) توليد نبات "الأم" الأنثوي الصحي للقنب كمصدر وراثي لسمة فيزيائية / كيميائية مرغوبة ، 2) قطع البراعم (meristems apical) وعلاج وسائل الإعلام التعريفية الجذرية التي تحتوي على سلائف الأوشين ، IBA ، و 3) تأقلم البروبجول في وعاء الحضانة المطلوب.
ويسمح نظام الانتشار الجوي بإنتاج استنساخ القنب بكفاءة مع مزايا واضحة على أساليب الانتشار المختلفة. ويشمل 1) الوقت وتوفير التكاليف من خلال أقل تحفيز العمالة صحية, تشكيل الجذر ناضجة في أقرب وقت 5 أيام; 2) التجانس الجيني - السماح لإنتاج استنساخ متطابقة وراثيا، باستثناء أي اختلافات وراثية، لاستيعاب البحوث القنب استنساخها وتطبيقات الصناعة؛ 3) التوحيد في العمليات واسعة النطاق؛ و 4) أقل عرضة لمسببات الأمراض الميكروبية - الحفاظ على مستوى منخفض نسبيا من الرطوبة في المظلة العليا من النباتات من مستوى الرطوبة بنيت داخل الحاوية حيث يحدث تطور الجذر.
على الرغم من أن النظام aeroponic يوفر عددا من المزايا، وهناك عدد قليل من القيود المقدمة التي ينبغي معالجتها بعناية أثناء الممارسات. أولا، بما أن جميع المواد الغذائية يتم توفيرها هيدروبونيا، يمكن أن تكون ملوثة بسهولة مع الطحالب والفطريات والفيروسات (مثل، هوب فيرويد الكامنة) مسببات الأمراض مما يؤدي إلى تشوه نظام الجذر الذي يتم تخفيفه من خلال العلاج المنتظم للعوامل المضادة للميكروبات / الفطريات / الفيروسية (ق). ثانيا، يمكن أن يكون الاستخدام الواسع النطاق لمصنع أم وحيدة مشكلة بالنسبة لمرافق الإنتاج. ويؤدي وجود خط استنساخ وحيد للنمط الجيني باعتباره النبات الوحيد في نموذج الإنتاج إلى خطر فقدان المحاصيل بأكمله إذا كان ذلك النمط الجيني عرضة لآفات أو مسببات أمراض معينة موجودة في مرفق الزراعة ذاك؛ ولذلك، يوصى بصيانة نباتات أم متعددة من أنساب متنوعة تستخدم لنشر استنساخ الإنتاج باستخدام نظام الاستنساخ الأيروبوني هذا للحد من الخسارة الاقتصادية الناجمة عن أي آفة أو مسبب للأمراض(13). وينصح فقط زراعة نباتي نبات الأم لمدة لا تزيد عن 6 أشهر قبل استنساخ مصنع الأم الجديدة لاستخدامها كمصدر في المستقبل لإنتاج المستنسخين. وهذا يمنع الجذور المتضخمة التي يمكن أن تؤدي إلى نباتات أم غير صحية وانخفاض معدلات نجاح الاستنساخ، فضلا عن الستائر المتضخمة التي يمكن أن تؤوي الآفات ومسببات الأمراض، والتي قد تنتقل إلى المستنسخين الذين تم نشرهم.
النظام aeroponic قابلة للتطوير صناعيا بطريقة فعالة من حيث التكلفة. ويبين الشكل 1 أنه يمكن وضع ما لا يقل عن 20 مادة نباتية في حاوية واحدة (38.1 سم × 25.4 سم × 30.48 سم). ويمكن توسيع نطاق هذا النظام بسهولة ليتألف من أكثر من 50 محطة لكل وحدة دون زيادة التكاليف على المياه والمواد المغذية والكهرباء. وتوفر المزايا الموصوفة هنا للطريقة الحالية سببا لتنفيذ نظام الاستنساخ الجوي في ممارسات الصناعة ومختبرات البحوث من أجل نشر القنب بكفاءة من حيث التوقيت والتوحيد.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
ولا يوجد بين أصحاب البلاغ تضارب في المصالح.
Acknowledgments
وقد دعم هذا البحث معهد أبحاث القنب في جامعة ولاية كولورادو- بويبلو ووزارة العلوم وتكنولوجيا المعلومات والاتصالات (2021-DD-UP-0379)، ومدينة تشونشيون (القنب R&D والتصنيع، 2020-2021)، كما يرغب المؤلفون في شكر جاستن هندرسون في قمة CBD على التبرع السخي لبذور "نبيذ الكرز".
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1-part Fox Farm | Fox Farm | Soil Mix | |
| 1-part Promix | Promix | Soil Mix | |
| 1-part Roots Organic Original | Auora Innovations | Soil Mix | |
| 1-part Wiggle Worm Earth Worm Castings | UNCO Industries | Soil Mix | |
| Algae and Bacterial Cleaning Solution (Clear Rez) | EZ Clone | SKU#: 225 | 8 fl. Oz. |
| Artificial Lighting | AgroBrite | SKU#: 1399 | T5 324W 4' 6-Tube Fixture with Lamps |
| Cannabis Mother plant 1 (Cherry Wine) | Summit CBD | N/A | Donated material |
| Cannabis Mother Plant 2 (Red Wine) | Trilogene | SKU: 0101RR | |
| Corresponding Plastic Lid | Office Depot | N/A | 38.1 cm x 25.4 cm |
| Drill Bit 1 | Dewalt | DW1586 | 38.1 mm spade drill bit |
| Drill Bit 2 | Dewalt | DW1308 | 3.175 mm drill bit |
| Flora/Bloom (Nutrient Solution)-5 mL | General Hydroponics | SKU#: 726 | 946 mL (1 Quart) 2.43 lbs. (1.1 kg) (Available Phosphate 5.0%, Soluble Potash 4.0%, Magnesium 1.5%, Sulfur 1.0%) |
| FloraGrow (Nutrient Solution)- 5 mL | General Hydroponics | SKU#: 724 | 946 mL (1 Quart) 2.43 lbs. (1.1 kg) ((Total Nitrogen 2.0% (0.25% Ammoniacal Nitrogen, 1.75% Nitrate Nitrogen), Available Phosphate 1.0%, Soluble Potash 6.0%, Magnesium 0.5%)) |
| FloraMicro (Nutrient Solution)- 5 mL | General Hydroponics | SKU#: 759 | 946 mL (1 Quart) 2.43 lbs. (1.1 kg) ((Total Nitrogen 5.0% (0.3% Ammoniacal Nitrogen, 4.7% Nitrate Nitrogen), Soluble Potash 1.0%, Calcium 5.0%, Boron 0.01%, Cobalt 0.0005%, Copper 0.01%, Iron 0.1%, Manganese 0.05%, Molybdenum 0.0008%, Zinc 0.015%)) |
| Horticultural Scissors | Shear Perfection | SKU#: 12620 | Platinum Stainless Steel Bonsai Scissors (2.4") |
| Isopropyl Alcohol | Equate | Walmart # 574133562 | 70% concentration |
| Nutrient Mist Solution (Clonex Mist) | Growth Technology | SKU#: 4889 | 10.14 fl. Oz (300 ml) (Total Nitrogen: 5.9 × 10-4 %, Available Phosphate: 4.0 × 10-4 %, Soluble Potash: 5.0 × 10-4 %) |
| pH Down | General Hydroponics | SKU#: 733 | 946 ml (1 Quart) 2.43 lbs. (1.1 kg) |
| pH Up | General Hydroponics | SKU#: 730 | 946 ml (1 Quart) 2.43 lbs. (1.1 kg) |
| Plastic Container | Office Depot | N/A | 38.1 cm x 25.4 cm x 30.48 cm |
| Power Drill | Dewalt | DCD709B | 20-Volt Max ½” Drill |
| Rockwool Cubes | Grodan | SKU#: 830 | 38.1 mm |
| Rooting Solution (Clonex Rooting Gel) | Growth Technology | SKU#: 939 | 3.4 fl. Oz. (100 ml) (Indolebutyric Acid - 0.31%) |
| Statistic Software (Prism) | GraphPad Inc. | ||
| Submersible Water Pump | ActiveAQUA | SKU: AAPW250 | Model: AAPW250, Voltage 120V, Power 16W |
References
- ElSohly, M. A., Radwan, M. M., Gul, W., Chandra, S., Galal, A.
- Cunetti, L., et al. Chronic pain treatment with cannabidiol in kidney transplant patients in Uruguay. Transplantation Proceedings. 50 (2), 461-464 (2018).
- Hausman-Kedem, M., Menascu, S., Kramer, U. Efficacy of CBD-enriched medical cannabis for treatment of refractory epilepsy in children and adolescents - An observational, longitudinal study. Brain & Development. 40 (7), 544-551 (2018).
- Linge, R., et al. Cannabidiol induces rapid-acting antidepressant-like effects and enhances cortical 5-HT/glutamate neurotransmission: role of 5-HT1A receptors. Neuropharmacology. 103, 16-26 (2016).
- Lehmann, C., et al. Experimental cannabidiol treatment reduces early pancreatic inflammation in type 1 diabetes. Clinical Hemorheology and Microcirculation. 64 (4), 655-662 (2016).
- Shannon, S., Lewis, N., Lee, H., Hughes, S. Cannabidiol in anxiety and sleep: A large case series. The Permanente Journal. 23, 18-41 (2019).
- Russo, E. B. History of cannabis and its preparations in saga, science, and sobriquet. Chemistry & Biodiversity. 4 (8), 1614-1648 (2007).
- Vera, C. L., Hanks, A.
- Deventer, M. V. Hot hemp: How high THC levels can ruin a legal hemp harvest. , Available from: https://www.westword.com/marijuana/hot-hemp-how-high-thc-levels-can-ruin-a-legal-hemp-harvest-9963683 (2018).
- Lata, H., Chandra, S., Techen, N., Khan, I. A., ElSohly, M. A. Assessment of the genetic stability of micropropagated plants of Cannabis sativa by ISSR markers. Planta Medica. 76 (1), 97-100 (2010).
- Caplan, D., Dixon, M., Zheng, Y. Optimal rate of organic fertilizer during the flowering stage for Cannabis grown in two coir-based substrates. HortScience. 52 (12), 1796 (2017).
- Monthony, A. S., Page, S. R., Hesami, M., Jones, A. M. P. The past, present and future of Cannabis sativa tissue culture. Plants (Basel). 10 (1), 185 (2021).
- Clarke, R. C., Merlin, M. D. Cannabis domestication, breeding history, present-day genetic diversity, and future prospects. Critical Reviews in Plant Sciences. 35 (5-6), 293-327 (2016).
