Estandarización de la transferencia a través de laboratorios entre citómetros de flujo para la detección de linfocitos en niños vacunados con encefalitis japonesa

Resumen

En este estudio, se desarrolló un método para facilitar la transferencia de entornos experimentales y plantillas de análisis entre dos citómetros de flujo en dos laboratorios para la detección de linfocitos en niños vacunados con encefalitis japonesa. El método de estandarización para los experimentos del citómetro de flujo permitirá que los proyectos de investigación se lleven a cabo de manera efectiva en múltiples centros.

Resumen

Un número cada vez mayor de laboratorios necesita recopilar datos de múltiples citómetros de flujo, especialmente para proyectos de investigación realizados en múltiples centros. Los desafíos de usar dos citómetros de flujo en diferentes laboratorios incluyen la falta de materiales estandarizados, problemas de compatibilidad de software, inconsistencias en la configuración del instrumento y el uso de diferentes configuraciones para diferentes citómetros de flujo. Para establecer un experimento estandarizado de citometría de flujo para lograr la consistencia y comparabilidad de los resultados experimentales en múltiples centros, se estableció un método de estandarización rápido y factible para transferir parámetros a través de diferentes citómetros de flujo.

Los métodos desarrollados en este estudio permitieron la transferencia de configuraciones experimentales y plantillas de análisis entre dos citómetros de flujo en diferentes laboratorios para la detección de linfocitos en niños vacunados con encefalitis japonesa (JE). Se obtuvo una intensidad de fluorescencia consistente entre los dos citómetros utilizando perlas estándar de fluorescencia para establecer la configuración del citómetro. Se obtuvieron resultados comparables en dos laboratorios con diferentes tipos de instrumentos. Usando este método, podemos estandarizar el análisis para evaluar la función inmune de niños vacunados con JE en diferentes laboratorios con diferentes instrumentos, disminuir las diferencias en datos y resultados entre citómetros de flujo en múltiples centros y proporcionar un enfoque factible para la acreditación mutua de resultados de laboratorio. El método de estandarización de los experimentos con citómetros de flujo garantizará el desempeño efectivo de los proyectos de investigación en múltiples centros.

Introducción

La estandarización de la citometría de flujo es útil para la comparabilidad de los resultados obtenidos de diferentes citómetros en diferentes laboratorios y centros de estudio, y conduce al reconocimiento mutuo de los resultados para mejorar la eficiencia del trabajo. Un número cada vez mayor de escenarios requiere estandarización. Durante el proceso de desarrollo del fármaco, la estandarización de la citometría de flujo es importante, ya que un ensayo desarrollado y validado apoyará todo el proceso de desarrollo del fármaco desde el análisis preclínico hasta el clínico. Los métodos de citometría de flujo se transfieren con frecuencia entre la industria farmacéutica ....

Protocolo

El estudio fue aprobado por el Comité de Ética del Hospital de Niños de Beijing, Capital Medical University (Número de aprobación: 2020-k-85). Se renunció al consentimiento informado de sujetos humanos, ya que solo se utilizaron muestras residuales después de las pruebas clínicas en este estudio. Dos laboratorios están involucrados en este estudio. El laboratorio de transferencia es donde se desarrolló el método estandarizado utilizando un citómetro de flujo. El citómetro en este laboratorio se denominará en lo sucesivo citómetro A. El laboratorio de métodos de prueba es el laboratorio que recibe métodos que utilizan ....

Resultados

La figura 1 muestra una hoja de cálculo global de la plantilla de valor objetivo para las cuentas brillantes de CST. Usando una gráfica FSC/SSC, se dibuja una puerta poligonal para seleccionar las cuentas brillantes CST. Se obtuvieron gráficos de histograma de 10 canales de fluorescencia para las perlas brillantes CST: FITC, PE, BB700, PE-Cy7, APC, R718, APC-H7, BV421, V500 y BV605. El valor objetivo para cada parámetro se muestra mostrando la mediana dentro de las puertas del histograma en .......

Discusión

El inmunofenotipado de los subgrupos de linfocitos de sangre periférica puede ayudar a comprender los cambios en la inmunidad adaptativa mediada por células después de la vacunación en niños. En aplicaciones clínicas, ocurren situaciones inesperadas, como la falta de detección de muestras de manera oportuna o el reemplazo de un citómetro de flujo; Por lo tanto, se necesitan métodos estandarizados rápidos que faciliten las transferencias entre citómetros de flujo en diferentes laboratorios 9,10,11........

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
BD CompBeads Anti-Mouse Ig, κ/Compensación de Control Negativo Conjunto de partículas	BD	Compensación	de 552843
BD FACSCanto	BD	FACSCanto	citometría de flujo Anto A en el laboratorio de transferencia
BD FACSDiva CS& T Research Beads	BD 655051		definir la línea de base del citómetro de flujo y realizar un seguimiento del rendimiento del citómetro
BD Horizon BV421 Mouse Anti-Human CD127	BD	562436	Anticuerpo fluorescente
BD Horizon BV605 Anticuerpo fluorescente anti-humano CD27	BD	562656	anticuerpo
BD Horizon V500 Ratón Anti-humano CD45	BD	560777	Anticuerpo fluorescente
BD LSRFortessa	BD	LSRFortessa	Citometría de flujo B en el laboratorio de métodos de prueba
BD OptiBuild BB700 Mouse Anti-Human CD19	BD	745907	Anticuerpo fluorescente
BD OptiBuild R718 Anticuerpo fluorescente anti-humano CD8	BD	751953	ratón anti-humano
BD Pharmingen APC Ratón Anti-Humano CD45RA	BD	550855	Anticuerpo fluorescente
BD Pharmingen APC-H7 Anticuerpo fluorescente anti-humano CD3	BD	560176	ratón
BD Pharmingen FITC Anti-humano para ratones CD4	BD	566320	Anticuerpo fluorescente
BD Pharmingen PE Ratón Anti-humano CD25	BD	555432	Anticuerpo fluorescente
BD Pharmingen PE-Cy7 Anticuerpo fluorescente anti-IgD IgD BD		561314
Brilliant Staining Buffer Plus	BD	566385	Centrífuga de tampón de tinción
	Eppendorf	5810	Tubo de centrífuga de centrifugación celular
	BD Falcon	BD-35209715 Tubo de	centrífuga de 15 mL
CS& T IVD Beads	BD 662414		perlas estándar para configurar los ajustes del citómetro en diferentes citómetros
de flujo Solución de lisis 10x Concentrado	BD	349202	glóbulos rojos lisados
solución salina tamponada con fosfato (PBS)	Gibco	10010-023	PBS
Tubo de ensayo de fondo redondo	BD Falcon	352235	Tubo de ensayo de 5 mL

de de de ratón