Name: Identificación de los fenotipos de inhibición del crecimiento inducida por la expresión de tipo bacteriana efectores III en la levadura (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-03-30T16:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 34 s
Description: Aprende a identificar fenotipos de inhibición del crecimiento mediante la expresión de efectores de tipo III bacterianos en levadura. Este método permite estudiar las funciones y dianas de estos efectores en un modelo eucariota.

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Este trabajo fue apoyado por la Fundación Ciencias de Israel.

<ol><li>Siggers, K. A., Lesser, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+yeast+Saccharomyces+cerevisiae%3A+a+versatile+model+system+for+the+identification+and+characterization+of+bacterial+virulence+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">The yeast Saccharomyces cerevisiae: a versatile model system for the identification and characterization of bacterial virulence proteins.</a> Cell Host Microbe. 4, 8-15 (2008).</li>
<li>Parsons, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+chemical-genetic+and+genetic+interaction+data+links+bioactive+compounds+to+cellular+target+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Integration of chemical-genetic and genetic interaction data links bioactive compounds to cellular target pathways.</a> Nat. Biotechnol. 22, 62-69 (2004).</li>
<li>Munkvold, K. R., Martin, M. E., Bronstein, P. A., Collmer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+survey+of+the+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+DC3000+type+III+secretion+system+effector+repertoire+reveals+several+effectors+that+are+deleterious+when+expressed+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Plant-Microbe+Interact%22%5BJournal%5D)">A survey of the Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000 type III secretion system effector repertoire reveals several effectors that are deleterious when expressed in Saccharomyces cerevisiae.</a> Mol. Plant-Microbe Interact. 21, 490-502 (2008).</li>
<li>Curak, J., Rohde, J., Stagljar, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Yeast+as+a+tool+to+study+bacterial+effectors%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Yeast as a tool to study bacterial effectors.</a> Curr. Opin. Microbiol. 12, 18-23 (2009).</li>
<li>Slagowski, N. L., Kramer, R. W., Morrison, M. F., LaBaer, J., Lesser, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+genomic+yeast+screen+to+identify+pathogenic+bacterial+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">A functional genomic yeast screen to identify pathogenic bacterial proteins.</a> PLoS Pathog. 4, e9-e9 (2008).</li>
<li>Huang, J., Lesser, C. F., Lory, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+essential+role+of+the+CopN+protein+in+Chlamydia+pneumoniae+intracellular+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The essential role of the CopN protein in Chlamydia pneumoniae intracellular growth.</a> Nature. 456, 112-115 (2008).</li>
</ol>

En esta presentación, se muestra cómo utilizar la incipiente levadura Saccharomyces cerevisiae como un sistema heterólogo de expresión de tipo III proteínas efectoras bacterianas y cómo identificar efector fenotipos inducidos por la inhibición del crecimiento. Es importante destacar que estos fenotipos puede ser utilizado en las pantallas de genética para identificar supresores del impacto negativo de los efectores de crecimiento de la levadura. Supresores pueden representar blancos directos de los efectores es...

<table><tbody><tr><td>Extracto de levadura</td><td>Difco Laboratories</td><td>212750</td><td></td></tr><tr><td>Peptona</td><td>Difco Laboratories</td><td>211677</td><td></td></tr><tr><td>D-glucosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5767</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Difco Laboratories</td><td>214010</td><td></td></tr><tr><td>Hidróxido de sodio (NaOH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8045</td><td></td></tr><tr><td>Base de nitrógeno para levadura sin aminoácidos</td><td>Difco Laboratories</td><td>291940</td><td></td></tr><tr><td>Suplemento sintético para medio de descarte de levadura</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Y2001</td><td></td></tr><tr><td>D-galactosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G0750</td><td>&amp;gt;99%; &amp;lt;0,1% glucosa</td></tr><tr><td>D-rafinosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R0250</td><td>&amp;gt;98%</td></tr><tr><td>L-leucina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L8000</td><td></td></tr><tr><td>Uracilo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>U0750</td><td></td></tr><tr><td>L-triptófano</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T0254</td><td></td></tr><tr><td>L-histidina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6034</td><td></td></tr><tr><td>ADN, de cadena sencilla, de testículos de salmón</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D7656</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5879</td><td>Desecar</td></tr><tr><td>Ácido clorhídrico (HCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758</td><td></td></tr><tr><td>Polietilenglicol (PEG) 3350</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4338</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de litio (LiAc)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L4958</td><td></td></tr><tr><td>Tris (base)</td><td>JT Baker</td><td>4109-02</td><td></td></tr><tr><td>Ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>&amp;#946;-mercapto&amp;#8211;etanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6250</td><td></td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Azul de bromofenol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B6131</td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de dodecilo, sal sódica (SDS)</td><td>Merck &amp;amp; Co., Inc.</td><td>8.22050.1000</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga (15 ml)</td><td>Corning</td><td>430052</td><td>Sterile</td></tr><tr><td>Cubeta para espectrofotómetro (10x4x45 mm)</td><td>Sarstedt Ltd</td><td>67.742</td><td></td></tr><tr><td>Asa de inoculación</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z643009</td><td>Sterile</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7543</td><td></td></tr><tr><td>Tira indicadora de pH, pH 6,5-10,0</td><td>Merck &amp;amp; Co., Inc.</td><td>1.09543.0001</td><td></td></tr></tbody></table>

identificación de los fenotipos de inhibición del crecimiento inducida por la expresión de tipo bacteriana efectores iii en la levadura

Identification of Growth Inhibition Phenotypes Induced by Expression of Bacterial Type III Effectors in Yeast

Muchas bacterias Gram-negativas patógenas utilizar un tipo de sistema de secreción de III a trasladar una serie de proteínas efectoras en el citosol de las células huésped. Dentro de la célula, el tipo de efectores III subvertir los procesos celulares del huésped para suprimir la respuesta inmune y promover el crecimiento de patógenos. Numerosos efectores de tipo III de patógenos de plantas y animales de bacterias han sido identificadas hasta la fecha, sin embargo, sólo unos pocos de ellos están bien caracterizados. Comprensión de las funciones de estos efectores se ha visto socavada por una combinación de redundancia funcional en el repertorio de efectos de una determinada cepa de bacterias, los efectos sutiles que pueden ejercer para aumentar la virulencia, los roles que posiblemente son específicos para ciertas etapas de la infección, y las dificultades en genética la manipulación de ciertos patógenos. Expresión de tipo III efectores en la levadura en ciernes<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt; Podría permitir eludir las limitaciones y la ayuda a la caracterización funcional de las proteínas efectoras. Porque el tipo de efectores III a menudo se dirigen los procesos celulares que se conservan entre la levadura y otros eucariotas, su expresión en la levadura puede dar lugar a fenotipos de la inhibición del crecimiento que puede ser aprovechado para aclarar las funciones efectoras y objetivos. Otras ventajas de usar la levadura para estudios funcionales de los efectores bacterianos incluyen su maleabilidad genética, información sobre las funciones previstas de la gran mayoría de sus ORFs, y la disponibilidad de numerosas herramientas y recursos para los experimentos tanto en todo el genoma y en pequeña escala. Aquí hablamos de los factores críticos para el diseño de un sistema de levadura para la expresión de las proteínas bacterianas de tipo III efector. Estos incluyen un promotor apropiado para conducir la expresión del gen efector (s) de interés, el número de copias del gen efector, la etiqueta de epítopo utilizado para verificar la expresión de proteínas, y la cepa de levadura. Se presentan los procedimientos para inducir la expresión de los efectores en la levadura y para verificar su expresión por immunoblotting. Además, se describe un ensayo de manchas en las placas de agar para la identificación de los fenotipos de efectos inducidos por la inhibición del crecimiento. El uso de este protocolo podrá ser extendido al estudio de los factores de patogenicidad entregado en la célula huésped por cualquier patógeno y el mecanismo de translocación.

En este video, se describe un procedimiento para la expresión de las bacterias de tipo III efectores en la levadura y la identificación de los fenotipos de efectos inducidos por la inhibición del crecimiento. Fenotipos como puede ser explotada posteriormente para aclarar las funciones efectoras y objetivos.

Identificación de los fenotipos de inhibición del crecimiento inducida por la expresión de tipo bacteriana efectores III en la levadura

Muchas bacterias patógenas Gram-negativas utilizan un sistema de secreción tipo III para translocar un conjunto de proteínas efectoras al citosol de las células huésped. Dentro de...

Para comenzar este protocolo, seleccione un vector para la expresión de su efector bacteriano de interés. En levadura y cepa de levadura, el vector se transforma luego en células de levadura. A continuación, se induce la expresión del efector.Las células inducidas se lisan para un análisis posterior por inmunotransferencia western a fin de verificar la expresión del efector. Tras confirmar la expresión del efector, las células se cultivan y se realizan diluciones seriadas de diez veces que se depositan en medios represores e inductores. Finalmente, tras dos o tres días, se analiza el crecimiento de la levadura.Hola, soy Do Solomon del laboratorio del Dr. Guido Cesa en el Departamento de Ciencias de las Plantas de la Universidad de Tel Aviv. Hoy les mostraremos un procedimiento para la identificación de fenotipos de inhibición del crecimiento inducidos por la expresión de efectores bacterianos del tipo tres en levaduras. Utilizamos este procedimiento en nuestro laboratorio para estudiar la función de los efectores del tipo tres procedentes de bacterias patógenas gramnegativas y es una herramienta que nos ayuda en la identificación de los blancos TIC de los efectores.Así que comencemos. Se deben considerar y optimizar varios factores importantes al diseñar un sistema de levadura adecuado para la expresión de los efectores de tipo tres de interés. El primero es el promotor que impulsa la expresión de los efectores.Dado que los efectores bacterianos del tipo tres pueden ser tóxicos para las células de levadura, se debe utilizar un promotor inducible para controlar su expresión. En este experimento emplearemos el promotor GAL1. El segundo factor es el número de copias del gen del efector.Se logran niveles altos de expresión cuando el gen efector está presente en un plásmido de dos micrones. Se obtiene una expresión intermedia utilizando un plásmido que contiene un centrómero, y se alcanza una expresión baja cuando el gen efector se integra en el genoma de levadura mediante recombinación homóloga. Un tercer factor a considerar es la etiqueta epítope utilizada para verificar la expresión proteica en casos donde no están disponibles anticuerpos contra el efector de interés.Las etiquetas comúnmente utilizadas son la hemaglutinina M HA o la etiqueta flag, para las cuales existen anticuerpos comerciales confiables. Sugerimos utilizar solo una copia de la etiqueta para minimizar efectos deletéreos no deseados sobre la estructura y la actividad de la proteína efectora. Por último pero no menos importante, la cepa de levadura que se utilizará para la expresión debe ser trópica para el marcador seleccionable del vector de expresión.Para cultivar células de levadura para la transformación, tome una colonia de levadura de una placa fresca e inocule tres mililitros de YPD en un tubo de polipropileno de 15 mililitros. Vortexee brevemente el tubo de cultivo y colóquelo en un agitador rotatorio para incubarlo durante la noche a 30 grados Celsius con rotación constante. A la mañana siguiente, retire el cultivo del agitador y centrifugue a 800 Gs durante cinco minutos a temperatura ambiente.Después de la centrifugación, retire completamente el sobrenadante y re suspenda las células en un mililitro de tampón de suspensión Resus mezclado por vortex a velocidad máxima durante aproximadamente 10 segundos. Para cada plásmido que se va a transformar y una transformación de control adicional, transfiera 100 microlitros de la suspensión celular a un tubo microfuge. Añada cinco microlitros de ADN de esperma de salmón de cadena sencilla y de 250 a 500 nanogramos de ADN plasmídico a cada tubo, excepto al tubo de control.A continuación, agregue cuidadosamente 650 microlitros de solución de transformación a cada tubo y vortexee. Incube los tubos a 30 grados Celsius durante 30 minutos en un agitador rotatorio. Una vez finalizada la incubación, agregue 70 microlitros de DMSO a cada tubo y mezcle invirtiendo los tubos de 10 a 15 veces para evitar romper las células.No vortexe los tubos. Coloque los tubos en un baño de agua precalentado a 42 grados Celsius y incube durante 15 minutos. Después de 15 minutos, retire los tubos del baño de agua y colóquelos inmediatamente en hielo durante dos minutos.Una vez que los tubos se hayan enfriado, recoger las células mediante centrifugación y luego usar una pipeta para eliminar cuidadosamente el sobrenadante viscoso. Suspender cada precipitado en 150 microlitros de agua estéril doblemente destilada y sembrar la suspensión celular en una placa con el medio selectivo adecuado. Dejar las placas abiertas durante dos minutos y permitir que se sequen en una cabina de flujo laminar.Después de eso, coloque las placas en un incubador a 30 grados Celsius durante dos o tres días para cultivar las células de levadura. Para preparar un extracto proteico, inocule tres mililitros del medio represor adecuado con una colonia de levadura proveniente de una placa fresca y vortexee. Al día siguiente, coloque brevemente el tubo de cultivo en un rotafusor a 30 grados Celsius.Retire el cultivo del agitador rotatorio y centrifugue a 800 G durante cinco minutos a temperatura ambiente, deseche el sobrenadante y resuspenda el botón celular. En tres mililitros de agua destilada estéril (DDW), mezcle por vortex y centrifugue nuevamente; deseche el sobrenadante y resuspenda las células en tres mililitros de DDW estéril. Ahora, transfiera 200 microlitros de la suspensión celular a un nuevo tubo de 15 mililitros que contenga tres mililitros del medio inductor apropiado mezclado por vortex.Coloque el tubo en un agitador rotatorio e incube durante la noche a 30 grados Celsius. A la mañana siguiente, transfiera un mililitro de la cultura, o más en el caso de cultivos de baja densidad, a un tubo de microcentrífuga. Recopile las células mediante centrifugación a 800 Gs durante cinco minutos a temperatura ambiente. A partir de este momento, trabaje en una campana extractora para evitar inhalar los vapores tóxicos de etanol Beamer capto.Retire cuidadosamente el sobrenadante utilizando una pipeta y re suspenda el botón celular en 100 microlitros de solución de lisis fría con hielo. Mezcle vigorosamente por vortex y incube en hielo durante 30 minutos. Durante la incubación de 30 minutos, determine el volumen de ácido clorhídrico normal seis necesario para titular 100 microlitros de tampón de lisis hasta un pH de nueve a 10.Para hacer esto, agregue diferentes volúmenes de ácido clorhídrico a 100 microlitros de tampón de lisis en 10 tubos diferentes y verifique el pH de la solución utilizando una tira indicadora de pH al final de la incubación, añadiendo el volumen adecuado de ácido clorhídrico al lisado y mezclando mediante vortex. Luego, agregue 50 microlitros de tampón de muestra 3x al lisado y mezcle mediante vortex; haga un orificio en la tapa del tubo de microcentrífuga con una aguja y hierva la solución de lisado en un bloque calefactor durante cinco minutos. Tras la ebullición, deje enfriar la solución durante dos minutos a temperatura ambiente.Luego, vortexar la solución del lisado y centrifugarla durante 10 segundos. El lisado ya está listo para el análisis inmunológico de sangre para preparar las células para el ensayo de spotting. Cultivar cultivos de tres mililitros de cada cepa como se indicó anteriormente al día siguiente.Prepare dos placas que contengan medio sintético completo sin leucina. El medio de una placa debe suplementarse con 2% de glucosa y el de la otra placa con 2% de galactosa y 1% de rafinosa. Seque las placas en un flujo laminar estéril a temperatura ambiente durante 20 minutos.Recoger las células y resuspender cada pellet celular en tres mililitros de agua destilada estéril (DDW). Repetir el paso de centrifugación y resuspender las células nuevamente en tres mililitros de DDW estéril. Determinar la densidad óptica o DO de cada cultivo, y luego preparar suspensiones celulares de un mililitro con una DO 600 de uno en tubos microficha estériles.A continuación, prepare tres diluciones seriadas de diez veces a partir de cada una de las suspensiones celulares utilizando tres microtubos estériles con 900 microlitros de agua destilada estéril (DDW). Coloque las placas secas sobre una cuadrícula y, para cada punto de cultivo, agregue 10 microlitros de cada una de las cuatro diluciones en fila. Después de aplicar las muestras, deje las placas abiertas en la cabina durante varios minutos.Una vez que las manchas estén secas, cubra las placas y colóquelas en un incubador a 30 grados Celsius durante dos o tres días. Ahora mostraremos los resultados de un ensayo de microdistribución con levaduras para la detección de la inhibición del crecimiento. Fenotipos inducidos por la expresión de efectores del tipo tres aquí, los efectores del tipo tres, A-V-R-P-T-O hop, AA uno uno y AAV RE uno de la bacteria.La ruta de Pseudomona Riner de nuestro tomate se expresó a partir de un plásmido que contiene un centrómero en una cepa de levadura en medio represor. Las cepas de levadura que portaban el plásmido para la expresión de A-V-R-P-T-O y HOP AA uno uno mostraron un crecimiento similar al de la cepa control que contenía un vector vacío. Mientras tanto, las levaduras que portaban AAV RE uno mostraron un crecimiento ligeramente reducido, probablemente debido al escape del promotor GAL uno y a la alta citotoxicidad de AV RE uno. Bajo condiciones inductoras, la expresión de cualquiera de los factores AV E uno o HOP AA uno uno provocó un fenotipo de inhibición del crecimiento drástico, reflejado por la ausencia de colonias en cualquier dilución. En contraste, la expresión de A-V-R-P-T-O no ejerció ningún efecto inhibitorio sobre el crecimiento.Acabamos de mostrarle cómo identificar fenotipos de inhibición del crecimiento causados por la expresión de efectores bacterianos del tipo tres en levadura. Al realizar este procedimiento, es importante recordar elegir cuidadosamente tanto el vector de expresión como esta cepa, ya que ambos pueden afectar drásticamente los resultados. Además, recuerde utilizar colonias recién transformadas en todos los pasos del procedimiento.Así que eso es todo. Gracias por verlo y buena suerte con sus experimentos.

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Aquí presentamos un método rentable para definir las interacciones químico-genéticas en levaduras en ciernes. El enfoque se basa en técnicas fundamentales en biología molecular de levaduras y es muy adecuado para la interrogación mecanicista de colecciones pequeñas y medianas de productos químicos y otros entornos de medios.

La rápida identificación de químicos interacciones genéticas en<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Este artículo describe un ensayo basado en el crecimiento de levaduras para la determinación de los requisitos genéticos para la degradación de proteínas. También demuestra un método para la extracción rápida de proteínas de levadura, adecuado para la transferencia de Western para confirmar bioquímicamente los requisitos de degradación. Estas técnicas se pueden adaptar para monitorear la degradación de una variedad de proteínas.

Determinación basada en el crecimiento y en la confirmación bioquímica de Requisitos Genéticos para la degradación de proteínas en<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

El método descrito aquí se utiliza para inducir la cascada de señalización apoptótica en pasos definidos con el fin de diseccionar la actividad de una proteína efectora bacteriana antiapoptótica. Este método también se puede utilizar para la expresión inducible de proteínas proapoptóticas o tóxicas, o para diseccionar la interferencia con otras vías de señalización.

La aplicación de un sistema de expresión inducible para el Estudio de la interferencia de los factores de virulencia bacteriana con Señalización Intracelular

proteínas efectoras bacterianas son importantes para establecer infecciones exitosas. Este protocolo describe la identificación experimental de parejas de unión proteica de una proteína efectora bacteriana en su huésped natural de la planta. La identificación de estas interacciones efectoras a través de levadura híbrido de dos pantallas se ha convertido en una herramienta importante en el descubrimiento de estrategias moleculares de patogenicidad.

Desenredar la función de un efector bacteriana de una planta de patógenos no cultivables Uso de una levadura de dos híbridos pantalla

Presentamos un método para cuantificar los fenotipos de crecimiento de células de levadura individuales a medida que crecen en colonias en medios sólidos usando microscopía de lapso de tiempo denominada Evaluación de Duplicación de células vivas de levaduras (ODELAY). La heterogeneidad de la población de células genéticamente idénticas que crecen en colonias puede observarse y cuantificarse directamente.

ODELAY: Un método a gran escala para la cuantificación multiparamétrica del crecimiento de la levadura

Aquí se presentan cuatro protocolos para construir y explotar cepas de reporteros de Saccharomyces cerevisiae para estudiar el potencial de transactivación P53 humano, los impactos de sus diversas mutaciones asociadas al cáncer, las proteínas interexpresas que interactúan y las proteínas interexpresas que interactúan, y los efectos de moléculas pequeñas específicas.

Levadura como chasis para el desarrollo de ensayos funcionales para estudiar P53 humanos

Los patógenos bacterianos secretan proteínas en el huésped que se dirigen a procesos biológicos cruciales. Identificar las vías del huésped a las que se dirigen las proteínas efectoras bacterianas es clave para abordar la patogénesis molecular. Aquí, se describe un método que utiliza un supresor de levadura modificado y una pantalla de toxicidad para dilucidar las vías huésped dirigidas por proteínas efectoras bacterianas tóxicas.

Identificación de caminos de huésped dirigidos por proteínas de efector bacteriano utilizando la toxicidad de levadura y las pantallas supresoras

Las bacterias colonizan los tejidos del huésped que varían en biodisponibilidad de oxígeno y hierro, sin embargo, la mayoría de los enfoques para estudiar las bacterias utilizan medios aireados y ricos. Este protocolo describe el cultivo del patógeno humano Yersinia pseudotuberculosis bajo diferentes concentraciones de hierro y tensión de oxígeno, y cuantifica la actividad del sistema de secreción de Yersinia tipo III, que es un factor de virulencia importante.

Cuantificación de la actividad del sistema de secreción de Yersinia pseudotuberculosis tipo III después de la inanición de hierro y el crecimiento anaeróbico

La levadura de fisión se utiliza aquí como huésped heterólogo para expresar proteínas citoesqueléticas bacterianas como FtsZ y MreB como proteínas de fusión traduccional con GFP para visualizar su polimerización. Además, los compuestos que afectan a la polimerización se identifican mediante imágenes con un microscopio de fluorescencia.

La levadura de fisión como plataforma para el cribado de fármacos antibacterianos dirigidos a las proteínas del citoesqueleto bacteriano

Aprende a identificar fenotipos de inhibición del crecimiento mediante la expresión de efectores de tipo III bacterianos en levadura. Este método permite estudiar las funciones y dianas de estos efectores en un modelo eucariota.

Identificación de los fenotipos de inhibición del crecimiento inducida por la expresión de tipo bacteriana efectores III en la levadura (Video) | JoVE Journal

Identificación de los fenotipos de inhibición del crecimiento inducida por la expresión de tipo bacteriana efectores III en la levadura

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