Visualización de la expresión de proteínas basada en CUBIC: un procedimiento para visualizar la expresión de proteínas en biopsias de piel de ratón de espesor completo

- La piel es un órgano complejo que consta de diversas poblaciones celulares dispuestas en múltiples capas. CUBIC, una técnica de imagen tridimensional basada en la limpieza de tejidos, ayuda a visualizar los patrones de expresión de proteínas dentro de estas células de la piel mediante biopsias de piel completa. Comience tomando un ratón sacrificado y quitándole el pelo de la región dorsal del cuello. Extrae un trozo de piel y córtalo en trozos pequeños.

Sumerja las piezas en una solución de limpieza CUBIC1 e incube. Las células de la piel no son transparentes, debido a la presencia de cromóforos y lípidos que causan la dispersión de la luz. Los productos químicos de la solución CUBIC eliminan estas moléculas, reduciendo así la dispersión de la luz y haciendo que el tejido sea transparente.

A continuación, trate el tejido con los anticuerpos primarios deseados que se unen específicamente a sus proteínas intracelulares diana expresadas en las células de la piel. Además, trate con anticuerpos secundarios marcados con fluorescencia que se unen a los complejos proteína-anticuerpo primario. Contratiñe el tejido con un tinte de unión al ADN que tiñe el núcleo.

Por último, sumerja la mue