Preparación y transformación de bacterias mediante electroporación de alto voltaje

Comience con un tubo que contenga bacterias inoculadas en un medio nutritivo.

Incubar agitando hasta que las células alcancen la fase de división activa.

Centrifugar para recoger las células y desechar el sobrenadante.

Lave repetidamente las células con glicerol helado para eliminar las sales y vuelva a suspender en glicerol para mantener la viabilidad celular.

Prepare un plásmido que contenga un gen de resistencia a los antibióticos en agua estéril con EDTA para evitar la degradación del ADN.

Mezcle la solución plásmida con las células bacterianas.

Aplique un pulso corto de alto voltaje para crear poros temporalmente en la membrana bacteriana.

Esto permite que el ADN plasmídico ingrese al citoplasma.

Transfiera inmediatamente las células a un medio de recuperación e incube agitando.

Los componentes del medio apoyan la reparación de membranas y la expresión génica de resistencia a antibióticos codificada por plásmidos.

Extienda las células en agar nutritivo que contenga el antibiótico e incube hasta que se formen colonias.

Elija una sola colonia y colóquela en una placa nueva para purificar los transformadores.

Para comenzar el experimento, prepare células electrocompetentes de las 10 cepas pr