Cambios morfológicos de imagen en bacterias mediante microscopía de fluorescencia de células vivas

Comienza con un cultivo bacteriano inmovilizado bajo una losa de agarosa en un plato de fondo de cristal.

Las membranas celulares bacterianas están marcadas con un colorante fluorescente.

Las bacterias también están diseñadas para expresar un ARN antisentido que se dirige a un ARNm específico, inhibiendo la producción de una proteína esencial de división celular.

Añade una gota de aceite de inmersión al objetivo del microscopio de fluorescencia invertida.

Coloca el plato en una carcasa metálica y fíjalo en el escenario del microscopio.

Sube el objetivo hasta que el aceite toque el plato, luego céntrate en las células.

Utiliza software de imagen para configurar pilas Z y capturar imágenes a múltiples profundidades.

Comienza a adquirir imágenes de fluorescencia en time-lapse.

A medida que las células responden a la expresión del ARN antisentido, no se dividen y desarrollan formas hinchadas.

La organización de la membrana se altera, lo que provoca una fluorescencia desigual y focal que indica una división celular defectuosa.

Para obtener imágenes de la muestra, utiliza el botón de enfoque de ajuste grueso para asegurarte de que el objetivo está completamente bajado antes de inicializar el micro