Un dispositivo de microfluidos gradiente de generación de Biología Celular

Mi nombre es Jiang. Soy becario de póster en Harvard y MIT en Salud, Ciencia y Tecnología. Y mi nombre es Amir Manchi y soy profesor estudiante de pregrado en el laboratorio SANE en Harvard, MIT, división de Ciencias de la Salud y Tecnología.

Esta diapositiva muestra el proceso del esquema de cómo hacer el dispositivo, por lo que simplemente giré el recubrimiento SUA 50 sobre el vapor de silicona y luego coloqué una máscara más en su lugar sobre un vapor de silicona y luego la exposición y revelo. Finalmente podemos obtener, poner estas almohadillas sobre el vapor de silicona. Después de eso, podemos lanzar el PDMS y luego arrastrarnos y hornear y hasta un pequeño golpe y luego podemos simplemente unirnos y entregar la unión entre el dispositivo PDMS y el glace de directamente usando el plasma de oxígeno.

Bien, ahora estamos en la sala de microfabricación dentro del laboratorio y vamos a empezar haciendo algunas capas de PDMS. Lo que quiero decir con PDMS, el término científico real es polimetilsuboxano y es un polímero orgánico. Es el polímero orgánico a base de silicio más utilizado.

En realidad, es una mezcla de dos cosas diferentes, es una mezcla de base de elastómero de silicona y también agente de curado de elastómero de silicona. Por lo tanto, la proporción es 10 de base y uno de agente de curado. Necesitamos unos 10 gramos de base y, por lo tanto, necesitamos aproximadamente un gramo de agente de curado elastómero y trataré de mezclar esta base y el agente de curado que se puede usar entre sí.

Usaré pipetas. Así que ahora que la mezcla está lista, voy a verterla encima de la oblea de silicona. Así que la idea es que estas obleas de silicio tengan algunos patrones encima.

De hecho, ayudan a este polímero PDMS a obtener el patrón y usamos esos patrones para tener canales y ranuras y o cualquier otro patrón que necesitemos en esos polímeros. Así que el siguiente paso es que, dado que tenemos muchas burbujas dentro de esta mezcla, vamos a intentar ponerla dentro de un vacío para evitar esas burbujas dentro de nuestro polímero. Voy a colocar los geles de PDMS en la oblea de silicona dentro de la cámara de vacío.

Voy a cerrar la cámara y voy a abrir el vacío. Después de que las burbujas se hayan ido, tal vez un par de minutos, lo colocaremos dentro del horno durante la noche, que está a unos 70 grados centígrados y esto hará que se solidifiquen. El patrón al que quiero que presten atención son estas tres guerras de reserva diferentes con el fin de hacer gradientes para que tengamos cero concentración en un lado y tengamos una cantidad específica de concentración en este lado y nos moveríamos uniformemente hacia eso y haremos un pequeño golpe en el otro extremo, que sería nuestra salida en este caso.

El siguiente paso es cortar uno de estos patrones y transferirlo a un plato patriota, con las superficies del patrón hacia arriba. Así que espero que puedas ver las tres entradas y una salida que te expliqué en estos patrones. Usaremos punzones pequeños para nuestra entrada para poder usar tubos de polietileno y voy a usar punzones grandes para mi salida para tener una guerra de reserva.

Así que vamos a empezar por la primera entrada. Voy a hacer un puñetazo, lo mismo con el segundo y también otro puñetazo pequeño para el tercero. El último paso es hacer un gran puñetazo en la salida.

Entonces, una vez que hayamos terminado, tendremos la capa A-P-D-M-S, que es la capa superior y voy a usar otra capa de vidrio en la parte inferior. Y estos micro portaobjetos van a ser mi capa inferior en los micro dispositivos fólicos. Ahora estamos en la sala de microfabricación y tengo una capa de vidrio y una capa de PDMS y quiero unirlas entre sí.

Lo que vamos a usar ahora es una máquina que se llama limpiador de plasma. Lo que va a suceder dentro de la cámara es que el plasma ayuda a romper el débil equilibrio de la superficie y reemplazarlo con grupos químicos altamente reactivos y también la superficie resultaría ser hidrófila. Lo que va a pasar ahora mismo es que voy a coger el molde de PDMS, que era la capa superior y tenía unos canales en su interior y voy a sacar la cinta que puse antes para evitar que el polvo se adhiera a nuestro molde.

Voy a colocarlo dentro de la cámara. Lo siguiente que tengo que hacer es que tengo una capa de vidrio, que es un portaobjetos de microscopio, y esta va a ser nuestra capa inferior dentro del dispositivo. Así que voy a colocar este dentro de la cámara también.

Y cierro la cámara por completo, una vez que está cerrada, primero la energía y luego la bomba y luego tenemos que volver a esta máquina dentro de unos cinco minutos. Lo que haré es que quiero apagar la máquina. Así que primero apago la bomba y luego la energía y abro la cámara.

Este sonido se debe en realidad a la presión negativa que se ha aplicado durante el proceso dentro de la cámara. Así que sacaré las diferentes capas y quiero unirlas. Dado que el vidrio es la capa inferior, lo tomaré con mi mano izquierda y lo arreglaré y tomaré la capa de PDMS y la colocaré encima de mi capa de vidrio.

Pero dado que, en realidad, los patrones están enfrentados en este momento, invertiré la capa PDMS. Lo colocaré en el vidrio después de presionarlos. Se adhieren muy fácilmente y parte de la ventaja de este proceso de tratamiento con plasma es la fuerza adhesiva y la permanencia.

Así es como se ve al final. Así que, de nuevo, estas son nuestras entradas y esto está en mi salida y estamos listos para pasar al siguiente paso. La cocción de fibra dentro del dispositivo y luego para la incubadora durante una hora y luego sacar una muestra SIM de la incubadora después de una hora y luego poner el alimento de cultivo de peces y luego hacer la solución.

Para hacer la solución de EGF, simplemente colocamos los dos medios de cultivo de molino como Azure, ya que solo colocamos los 15 nanogramos por EGF y 10 micromolares 50 D ejecutamos esta solución muy duro para visualizar el gradiente de EGF a través del canal. Luego tomamos dos medios de molino, medios virtuales y ponemos aquí otros dos medios de molino. Estas dos sesiones solo cultivos normales, normal, infusión de cultivo normal en el dispositivo.

Así que quito la burbuja, me conecto de nuevo, esta también es la burbuja móvil M que vuelve a bajar. Y luego solo uso 15 nanogramos de EGF y 10 micromolares fi dextra y dos mil medios de la extracción, la muestra y pongo la jeringa y luego conoces la burbuja. Y luego, simplemente cambie de solución, vuelva a cambiar.

La solución se introduce en la jeringa de tipo gas y empuja SH durante varias veces para eliminar la burbuja, la solución de la jeringa de todos los interruptores llega aquí primero y luego cambia la barra y la solución a través de la barra de tres vías y ninguno de los tubos y la solución que sale de la tubería. Y luego, después de la mezcla, sale la solución, podemos insertar el tubo en el dispositivo My Predict y luego las tres soluciones son iguales. Simplemente puede conectarse suavemente, conectar la red de entrada del canal de infusión.

Así que, finalmente, dos son los medios culturales normales. Uno de ellos son los medios culturales con FEAG y para confirmar el perfil de gradiente del FEAG. Esta es la celda en la red, la celda en la red.

Esto hará que la salida de la celda, por lo tanto, se genere un gradiente utilizando el canal de tres concentradores y luego generará el graduado dentro del área de la celda. Así que normalmente lo que quiero es que solo hagamos el asiento de la celda, la suspensión de la celda, el asiento de la salida, y luego podemos succionar suavemente en la red y luego el flujo de la célula a través del área de la celda se asienta automáticamente y se asientan en el recubrimiento y luego se aseguran de que la célula se extienda completamente. Y después de hacer, después de asegurarnos de que la célula se propague completamente, podemos simplemente, podemos comenzar a infundir y luego estudiar la migración celular usando el dispositivo generador de radio.