Cribado de muerte celular mediante tinción DAPI: un método para el cribado rápido de la muerte celular clonogénica inducida por IR en líneas celulares cancerosas

La exposición a radiaciones ionizantes como los rayos X puede causar daños en el ADN y, finalmente, provocar la muerte celular. Para detectar el efecto de las radiaciones ionizantes en los perfiles de muerte celular, comience tomando una placa de cultivo que contenga células cancerosas adherentes colocadas sobre la superficie de un cubreobjetos.

Irradie la placa de cultivo con rayos X durante el tiempo deseado. Este tratamiento causa daño en el ADN dentro de las células. A continuación, aspire los medios gastados de la placa de cultivo y agregue un fijador adecuado. Esta solución impregna las células y bloquea los componentes celulares en su lugar durante los pasos de tinción posteriores.

Deseche la solución fijadora. Retire el cubreobjetos que contiene células tratadas con rayos X de la placa de cultivo. Voltee el cubreobjetos y colóquelo sobre la superficie de un portaobjetos de vidrio que lleve una gota de tinción DAPI sobre él, de modo que las células estén en contacto directo con DAPI.

Las moléculas DAPI ingresan a los núcleos y se unen a los sitios ricos en A-T del ADN. Ahora, visualice las células bajo un microscopio de fluorescencia. Los núcleos aparecen azules y exhiben mo