Tinción de ácido peryódico Schiff o PAS: un método para evaluar las deformidades estructurales del glomérulo

El glomérulo es una red compleja de capilares dentro del riñón que filtra los desechos y elimina el exceso de líquido de la sangre. La tasa de filtración renal depende de esta estructura especializada, que se puede examinar utilizando tinción de Schiff o PAS de ácido peryódico.

Para comenzar, tome una sección de la corteza renal parafina en un portaobjetos de vidrio. Trate el portaobjetos con xileno. Las moléculas de xileno disuelven la cera de parafina de la sección de tejido. A continuación, exponga la muestra a concentraciones decrecientes de alcohol. El alcohol elimina los rastros de xileno mientras rehidrata la sección de tejido para la posterior unión de la mancha.

Ahora, agregue ácido periódico a la muestra. El ácido peryódico convierte los dioles presentes en los polisacáridos tisulares, como el glucógeno o la mucina, en aldehídos. Estos aldehídos reaccionan con el reactivo de Schiff, una combinación de fucsina y ácido sulfuroso, formando un tinte de color magenta que tiñe la sección del tejido. Enjuague el portaobjetos para eliminar el exceso de mancha.

Después del enjuague, agregue hierro-hematoxilina, una contratinción nuclear que se une al ADN y lo tiñe de púrpura. Lavar para eliminar el exceso de manchas. Finalmente, deshidrate la muestra con concentraciones crecientes de alcohol seguido de xileno, que sirve como agente de limpieza. Este paso ayuda a mejorar el contraste de la sección de tejido para el examen microscópico.

La enfermedad glomerular se puede visualizar como engrosamiento de la membrana basal, capilares alterados y células anormales que se relacionan con la función renal deteriorada.

Para una visualización detallada de las células glomerulares y la matriz mesangial, seque las muestras fijas de corteza renal incluidas en parafina a 37 grados Celsius durante 1 hora, seguido de desparafinación con xileno consecutivo e inmersiones descendentes en etanol. Rehidratar las muestras en agua destilada durante 5 minutos e incubar los portaobjetos en solución de ácido peryódico en una cabina de gases.

Después de 5 minutos, enjuague los portaobjetos con tres lavados de 5 minutos en 100 mililitros de agua destilada, seguidos de una incubación de 15 minutos en el reactivo de Schiff. Al final de la incubación, lave los portaobjetos con agua corriente del grifo durante 5 minutos y antitiñe con hematoxilina durante 3 segundos antes de enjuagar bien con agua corriente del grifo durante otros 15 minutos.

Luego, deshidrate los portaobjetos con inmersiones ascendentes en etanol y dos inmersiones consecutivas de xileno de 3 minutos. Después del secado al aire, los portaobjetos se pueden montar con un medio de montaje a base de xileno para evaluar su estructura glomerular en un microscopio óptico con un aumento de 400X.

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