Name: Sobreacumulación de Ileectomy inducida por bilis en intestino de ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 55 s
Description: Aprende a realizar una ileectomía segmental en ratón para estudiar la malabsorción y sobreacumulación de ácidos biliares en el intestino. Este modelo quirúrgico permite investigar mecanismos de diarrea por ácidos biliares.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Esta investigación es apoyada por Fundación de Tom Peterson y concesión de NIH R01-HL119780 (Jain, MK).

animal protocolo fue revisado y aprobado por el cuidado institucional de animales y uso en el caso Western Reserve University School of Medicine y se llevó a cabo con arreglo a la guía de institutos nacionales de salud (NIH) para la Uso y cuidado de animales de laboratorio (8ª edición, 2011). Ratones fueron sacrificados por métodos compatibles con las directrices de la Asociación Médica Veterinaria americana (AVMA) para la eutanasia de animales (edición de 2013). C57BL/6J, ratones machos, de 8-16 semanas de edad fueron utilizados en el presente Protocolo. Ratones fueron alojados en un entorno de ciclo luz/oscuridad de 12 horas.
 1. preparación preoperatoria <ol><li>transferencia de ratones en una jaula limpia 24 h antes del procedimiento. Permitir que los animales libre acceso al agua. Vuelva a poner comida chow con alimentos blandos (suplemento dietético gel) 4-6 h antes de la cirugía para reducir el contenido del intestino para la cirugía.</li>
	<li>Esterilizar todos los instrumentos quirúrgicos y preparar el material quirúrgico estéril de un solo uso. Limpiar el área de cirugía y el cono de nariz anestesia con etanol al 70%.</li>
	<li>Creó un microscopio de disección, vaporizador anestésico isoflurano, instrumentos y una control de temperatura pequeños animal mesa quirúrgica para el mantenimiento de la temperatura de cuerpo. Organizar los instrumentos, suturas y jeringas en un lugar de libre acceso durante la cirugía.</li>
	<li>Configurar una fuente de luz para proporcionar suficiente luz para el área quirúrgico.</li>
	<li>Preparación de solución salina 0.9% estéril en la jeringa de 5 mL para la limpieza intestinal y abdominal.</li>
</ol> 2. Ileectomy y Anastomosis <ol><li>Anesthetize ratones con isoflurano (2-3%) en una cámara de incubación animales pequeños. Determinar la anestesia adecuada, utilizando la técnica del pellizco del dedo del pie mientras que el animal está en isoflurano.</li>
	<li>Retire pelo abdominal aplicando producto del retiro del pelo y pelo lejos usando esponjas quirúrgicas mientras mantiene la anestesia. Coloque el ratón sobre un control de temperatura pequeños animal mesa quirúrgica ( figura 1 A) a mantener la temperatura corporal en anestesia de mantenimiento de 37 ° C. con isoflurano (1-2%) a través de una máscara. Tratamiento de los ojos del ratón con el ungüento ocular.</li>
	<li>Limpiar la piel con povidona yodada y el 70% alcohol y cubrir la zona quirúrgica del abdomen con una gasa quirúrgica estéril ( figura 1 B).</li>
	<li>Hacer una incisión abdominal de línea media, utilizando un bisturí quirúrgico una vez que la anestesia es en efecto. Use un aplicador con punta de algodón para proteger el intestino y tire del ratón músculo abdominal con separadores para poder abrir y exponer la cavidad abdominal ( figura 1 C).</li>
	<li>Localiza el ciego. A partir del ciego, mueva con cuidado la parte del yeyuno e íleon conectado fuera de cavidad abdominal ( figura 1 D). 
	Nota: El ciego puede ser fácilmente identificado debido a su gran tamaño incluso después de un ayuno.</li>
	<li>Ligar la rama superior de la arteria mesentérica superior con una sutura de seda 7-0 para ocluir la sangre suministra el segmento ileal que debe ser suprimido. El íleon color cambia de rosado a púrpura oscuro después de la ligadura. ( figura 1 E - F).</li>
	<li>Dependiendo de la finalidad del experimento, usando las tijeras, suprimir y eliminar el 50% o el 90% de íleon. 
	Nota: Para la cirugía del impostor, no realice la ligadura de la arteria mesentérica superior y no retire el íleo.</li>
	<li>Irrigue el lumen de ambos extremos ileales con solución salina al 0.9%. 
	Nota: como el íleo intacto restantes todavía está recibiendo un suministro normal de sangre desde la arteria mesentérica superior, una pequeña cantidad de sangre saldrán hacia fuera durante el proceso. Esto también indica que el suministro de sangre a los extremos ileales es normal y no garantiza isquemia durante el procedimiento de la anastomosis ( figura 1 G).</li>
	<li>Ubicar los entresijos del lado de ambos extremos ileales. Alinee los entresijos y suturar los extremos ileales con sutura 8-0 ( figura 1 G - H).</li>
	<li>Sutura de la parte contralateral del íleo para evitar el íleo anastomosada de forma natural ( figura 1 ).</li>
	<li>Sutura los lados superiores e inferiores entre las dos suturas originales a bien unir los dos ileal extremos juntos ( figura 1 J).</li>
	<li>Confirmar que no hay ninguna salida desde el sitio de la anastomosis después de terminar el procedimiento de sutura de tres pasos ( figura 1 G-I). Volver el intestino ciego y el intestino en la cavidad abdominal a la localización anatómica original. Lave el área quirúrgica con solución salina 0.9% tibia utilizando una aguja Roma. ( figura 1 K).</li>
	<li>Cerrar la incisión de la capa de músculo abdominal con sutura 6-0. Alinee la incisión de la piel abdominal con unas pinzas y sutura de la piel abdominal para facilitar la óptima cicatrización de heridas ( figura 1 L).</li>
</ol> 3. Cuidados postoperatorios ratones <ol><li>transferencia después de la cirugía a la unidad de cuidados intensivos para recuperación. Alojarlos en una jaula de la ropa de cama de papel sobre una almohadilla de calefacción de temperatura controlada para continuar la recuperación después de la cirugía durante la noche. Ratones con alimentos blandos además de comida regular y el agua de la fuente.</li>
	<li>Administra buprenorfina (0.05 - 0.1 mg/kg) con la inyección subcutánea cada 8-12 h para la analgesia. 
	Nota: Eutanasia ratones por CO 2 si severamente enfermo.</li>
	<li>En el punto final, sacrificar ratones utilizando muestras overdosed de isoflurano y cosecha según sea necesario (sección 4).</li>
</ol> 4. Evaluación de sobreacumulación de bilis inducida por Ileectomy <ol><li>pesan y diseccionar los ratones un día después de una resección de 0% (falso), 50% o el 90% de íleon.</li>
	<li>Retirar el tracto gastrointestinal y pésalo. Calcular el peso de GI al cociente de peso corporal para evaluar la gravedad de la malabsorción de sales biliares y sobreacumulación.</li>
	<li>Transferencia de los tractos GI en tubos cónicos de 15 mL y cortarlas en segmentos cortos con unas tijeras. Después del corte, centrifugar a 3.000 x g durante 10 minutos transferir el sobrenadante (líquido de GI que contiene sales biliares) a un tubo limpio.</li>
	<li>Medir el volumen total y el peso de líquido GI y calcular el peso de fluido al cociente de peso tracto GI más evaluar sobreacumulación de bilis en el tracto GI.</li>
	<li>Determinar la cantidad total de bilis en el sobrenadante por el análisis de ácido biliar como se describe en la referencia 8.</li>
</ol>

<ol><li>McLeod, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgery+for+inflammatory+bowel+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis%22%5BJournal%5D)">Surgery for inflammatory bowel diseases.</a> Dig Dis. 21, 168-179 (2003).</li>
<li>Hancock, L., Windsor, A. C., Mortensen, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+bowel+disease%3A+the+view+of+the+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22Colorectal+Dis%22%5BJournal%5D)">Inflammatory bowel disease: the view of the surgeon.</a> Colorectal Dis. 8, 10-14 (2006).</li>
<li>Polle, S. W., Bemelman, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgery+insight%3A+minimally+invasive+surgery+for+IBD%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Clin+Pract+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Surgery insight: minimally invasive surgery for IBD.</a> Nat Clin Pract Gastroenterol Hepatol. 4, 324-335 (2007).</li>
<li>Fon Tacer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+resource%3A+Comprehensive+expression+atlas+of+the+fibroblast+growth+factor+system+in+adult+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Research resource: Comprehensive expression atlas of the fibroblast growth factor system in adult mouse.</a> Mol Endocrinol. 24, 2050-2064 (2010).</li>
<li>Pournaras, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+bile+after+Roux-en-Y+gastric+bypass+in+promoting+weight+loss+and+improving+glycaemic+control%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">The role of bile after Roux-en-Y gastric bypass in promoting weight loss and improving glycaemic control.</a> Endocrinology. 153, 3613-3619 (2012).</li>
<li>Spreckley, E., Murphy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+L-Cell+in+Nutritional+Sensing+and+the+Regulation+of+Appetite%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Nutr%22%5BJournal%5D)">The L-Cell in Nutritional Sensing and the Regulation of Appetite.</a> Front Nutr. 2, 23(2015).</li>
<li>Inagaki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+growth+factor+15+functions+as+an+enterohepatic+signal+to+regulate+bile+acid+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Fibroblast growth factor 15 functions as an enterohepatic signal to regulate bile acid homeostasis.</a> Cell Metab. 2, 217-225 (2005).</li>
<li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+control+of+bile+acid+synthesis+by+a+KLF15-Fgf15+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Circadian control of bile acid synthesis by a KLF15-Fgf15 axis.</a> Nat Commun. 6, 7231(2015).</li>
<li>Christl, S. U., Scheppach, W. <a target="_blank" href="http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/00365521.1997.11720712?journalCode=igas20">Metabolic consequences of total colectomy.</a> Scand J Gastroenterol Suppl. 222, 20-24 (1997).</li>
<li>Helmrath, M. A., VanderKolk, W. E., Can, G., Erwin, C. R., Warner, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+adaptation+following+massive+small+bowel+resection+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Surg%22%5BJournal%5D)">Intestinal adaptation following massive small bowel resection in the mouse.</a> J Am Coll Surg. 183, 441-449 (1996).</li>
<li>Tappenden, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+short+bowel+syndrome%3A+considerations+of+resected+and+residual+anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Parenter+Enteral+Nutr%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of short bowel syndrome: considerations of resected and residual anatomy.</a> J Parenter Enteral Nutr. 38, 14-22 (2014).</li>
<li>Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+Acid+diarrhea%3A+prevalence%2C+pathogenesis%2C+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Liver%22%5BJournal%5D)">Bile Acid diarrhea: prevalence, pathogenesis, and therapy.</a> Gut Liver. 9, 332-339 (2015).</li>
<li>Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+understanding+of+bile+acid+diarrhea%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Advances in understanding of bile acid diarrhea.</a> Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 8, 49-61 (2014).</li>
<li>Mottacki, N., Simren, M., Bajor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+article%3A+bile+acid+diarrhoea+-+pathogenesis%2C+diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Aliment+Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Review article: bile acid diarrhoea - pathogenesis, diagnosis and management.</a> Aliment Pharmacol Ther. 43, 884-898 (2016).</li>
<li>Rao, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+organic+solute+transporter+alpha-beta%2C+Ostalpha-Ostbeta%2C+is+essential+for+intestinal+bile+acid+transport+and+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">The organic solute transporter alpha-beta, Ostalpha-Ostbeta, is essential for intestinal bile acid transport and homeostasis.</a> Proc Natl Acad Sci. 105, 3891-3896 (2008).</li>
<li>Hofmann, A. F., Poley, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholestyramine+treatment+of+diarrhea+associated+with+ileal+resection%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Cholestyramine treatment of diarrhea associated with ileal resection.</a> N Engl J Med. 281, 397-402 (1969).</li>
<li>Kir, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FGF19+as+a+postprandial%2C+insulin-independent+activator+of+hepatic+protein+and+glycogen+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">FGF19 as a postprandial, insulin-independent activator of hepatic protein and glycogen synthesis.</a> Science. 331, 1621-1624 (2011).</li>
<li>Kuipers, F., Bloks, V. W., Groen, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+intestinal+soap--bile+acids+in+metabolic+control%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Beyond intestinal soap--bile acids in metabolic control.</a> Nat Rev Endocrinol. 10, 488-498 (2014).</li>
<li>Buchman, A. L., Scolapio, J., Fryer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AGA+technical+review+on+short+bowel+syndrome+and+intestinal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">AGA technical review on short bowel syndrome and intestinal transplantation.</a> Gastroenterology. 124, 1111-1134 (2003).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Para llevar a cabo una exitosa ileectomy, la arteria mesentérica superior debe ligarse por adelantado para bloquear el suministro de sangre al segmento resecting. El segmento de íleon isquémico volverá púrpura oscuro después de la ligadura. El segmento ileal entonces debe ser resecado totalmente. Un suministro normal de sangre se realizará para los extremos retenidos. Esto es esencial para evitar el sangrado e incorrecta eliminación, que puede fácilmente causa fracaso quirúrgico debido a la necrosis isquémica después de ...

En investigación biomédica moderna, modelos de animales genéticamente manipulados son ampliamente utilizados para recoger ideas sobre enfermedades humanas. En particular, tejido o célula-funciones específicas de ganancia y la pérdida de genes se han utilizado para estudiar la regulación molecular así como efectos biológicos inducidos. A pesar de los avances en la manipulación de genes diana en vivo, hay limitaciones persistentes. Primero, muchas células o tejido deleciones específicas afecta múltiples órganos. Por ejemplo, canceladura del gene epitelial eliminará la expresión en los epitelios de tejidos múltiples. Además, incluso si la eliminación se limita a un tejido específico, control espacial es raramente factible. Por ejemplo, en un tejido como el intestino, distintos segmentos realizan funciones muy específicas que no pueden manipularse con precisión en vivo. En estas situaciones, la resección de los tejidos que contienen el gen se considera un enfoque de estudio más eficiente para determinar el significado funcional y mecanicista de la comunicación del tejido.
Ileectomy es sobre todo utilizado en pacientes con Crohn y enfermedades inflamatorias que involucra el íleo distal 1,2,3. El íleon normalmente produce varias hormonas de almacenamiento de energía como factor de crecimiento fibroblástico 15/19 (FGF15/19), péptido YY (PYY) y péptido similar al glucagón GLP1/2; 1/2 estas hormonas desempeñan importantes funciones locales y endocrinas en muchas funciones biológicas4,5,6. Entre estas hormonas, FGF15 ha sido identificado como un robusto endocrino inhibidor de síntesis de ácidos biliares en el hígado. Una vez reabsorbido en enterocitos ileales, ácidos biliares activan el receptor de farnesoid X receptor nuclear (FXR) para estimular la expresión de Fgf15 , que posteriormente conduce a la inhibición de la regeneración de la síntesis de ácido biliar hepática 7. En un estudio reciente, introdujo el modelo de ileectomy de ratón para estudiar el íleon kruppel-like factor 15 (KLF15) -Fgf15 señalización eje que regula la producción de los ácidos biliares en el hígado 8. Lo más importante, hemos introducido a una nueva familia, los factores kruppel-like, particularmente KLF15, en Biología del ácido de bilis. Basado en estudios funcionales, incluyendo la ileectomy, se determinan KLF15 estimula ácido de bilis síntesis a través de un mecanismo indirecto de no-hepático. Por último, KLF15 ileal también se identifica como el primer regulador negativo endógeno de Fgf15.
Los segmentos intestinales desde proximal a distales regiones son responsables de la absorción de diferentes nutrientes. El íleon es el segmento principal responsable de ácido biliar y vitamina B12 (v.B12) absorción 9. Un estudio anterior empleó un modelo de ratón de la resección de intestino proximal para estudiar el síndrome de intestino corto; varias longitudes de resección, las dietas y tipos de sutura se propusieron mantener una tasa de supervivencia después de la cirugía óptima del 10. Además, una revisión más reciente indica que la resección ileal típicamente resulta en una enfermedad más severa que otras resecciones de segmentos gastrointestinales (GI) debido a la disminuida capacidad de adaptación de los restantes de la zona 11. Este tema ha ganado a intensivo intereses de grupos de investigación básica y clínica, mientras que la comprensión de los enfoques terapéuticos eficaces y recuperación son todavía limitadas.
Diarrea biliar ácida el resultado de desequilibrios en la homeostasis ácido de bilis en la circulación enterohepática 12,13. Puede ser una consecuencia de la resección ileal, enfermedad gastrointestinal o un resultado de malabsorción idiopática de ácidos biliares. Se han encontrado más de 80% de los pacientes que presentan diarrea tras someterse a una resección ileal 14. Ileectomy tiene el potencial para ser un modelo de cirugía importante para la investigación de la diarrea de ácidos biliares. En este estudio, una serie de resecciones ileales proporcionar una evaluación del gradiente de FGF15 deficiencia así como malabsorción de sales biliares intestinales, sobreacumulación y daños tóxicos.

<table><tbody><tr><td>Microscopio de disección</td><td>Olympus</td><td>SZ61</td><td>Para cirugía&nbsp;</td></tr><tr><td>Controlador de temperatura animal</td><td>Physitemp Instruments, Inc.</td><td>TCAT-2LV</td><td>Para el control de la temperatura corporal</td></tr><tr><td>Vaporizador anestésico de isoflurano</td><td>VetEquip</td><td>&nbsp; 911104</td><td>Para la anestesia</td></tr><tr><td>Pinzas de disección</td><td>&nbsp; Herramientas de Ciencia Fina, Inc.</td><td>11274-20</td><td>Para cirugía&nbsp;</td></tr><tr><td>Tijeras</td><td>&nbsp; Herramientas de Ciencia Fina, Inc.</td><td>14084-08</td><td>Para cirugía&nbsp;</td></tr><tr><td>Portaagujas</td><td>&nbsp; Roboz Instrumento Quirúrgico Co.</td><td>RS-7882</td><td>Para cirugía&nbsp;</td></tr><tr><td>Micro cuchillos-hoja de aguja Fisher</td><td>Scientific</td><td>10318-14</td><td>Para cirugía&nbsp;</td></tr><tr><td>Sutura monofilamento 6-0</td><td>Ethicon</td><td>1698G</td><td>Para el cierre de la piel abdominal</td></tr><tr><td>7-0 sutura de seda</td><td>Ethicon</td><td>766G</td><td>Para ligadura</td></tr><tr><td>8-0 sutura monofilamento</td><td>Ethicon</td><td>1714G</td><td>Para anastomosis</td></tr><tr><td>Esponjas quirúrgicas</td><td>Dynarex Corp.</td><td>3333</td><td>Para cirugía&nbsp;</td></tr><tr><td>Pequeños aplicadores con punta de algodón&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-118</td><td>Para cirugía&nbsp;</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Piramal Healthcare Limited</td><td>66794-013-25</td><td>Para anestesia</td></tr><tr><td>Clorhidrato de buprenorfina</td><td>Reckitt-Benckiser Pharmaceuticals</td><td>12496-0757-1</td><td>Para analgesia</td></tr><tr><td>Inyección de cloruro de sodio al 0,9%</td><td>B. Braun Medical Inc.</td><td>0264-7800-10</td><td>Para lavado/inyección</td></tr> de <tr><td>povidona solución de preparación de yodo</td><td>Dynarex Corp.</td><td>1413</td><td>Para la preparación de la piel</td></tr><tr><td>Puralube ungüento veterinario</td><td>Dechra Productos veterinarios</td><td>17033-211-38</td><td>Para la protección de los ojos</td></tr><tr><td>Loción removedora de vello</td><td>Church & Dwight Co., Inc.</td><td></td><td>Para la preparación</td></tr> de la piel <tr><td>Unidad de cuidados intensivos</td><td>ThermoCare</td><td>FW-1</td><td>Para la recuperación postoperatoria</td></tr><tr><td>DietGel recovery</td><td>ClearH2O</td><td>72-06-5022</td><td>Para la recuperación postoperatoria</td></tr><tr><td>Aurum kit de tejido graso y fibroso de ARN total Bio-Rad</td><td>7326830</td><td></td><td>Para el aislamiento de ARN</td></tr><tr><td>iScript supermix de transcripción inversa para RT-qPCR</td><td>Bio-Rad</td><td>1708841</td><td>para ensayo de transcripción inversa</td></tr><tr><td>TaqMan fast advanced master mix</td><td>Applied Biosystems/Life Technologies</td><td>4444965</td><td>para el análisis QPCR</td></tr><tr><td>kit de ensayo de ácidos biliares totales</td><td>Genzyme Diagnostic</td><td>DZ042A-K01</td><td>Para ensayo de ácidos biliares</td></tr><tr><td>C57BL/6J&nbsp;</td><td>El Laboratorio Jackson</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

sobreacumulación de ileectomy inducida por bilis en intestino de ratón

Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine

La resección intestinal es un enfoque terapéutico común para enfermedades humanas como la obesidad, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn y cáncer de colon que a menudo resulta en intestino corto severo síndrome-como los efectos adversos como diarrea de ácidos biliares, deshidratación, trastornos electrolíticos y mala absorción de nutrientes. Aquí introducimos un modelo murino de resección iléica, denominado ileectomy, para evaluar la comunicación de tejido y el mantenimiento de la homeostasis sistémica. Después de la resección ileal, sangre circulante carece permanentemente el factor de crecimiento del fibroblasto hormona endocrina específica de íleon 15 (FGF15), que lanza su endocrinas inhibición de la síntesis de ácidos biliares en el hígado. En combinación con el aumento de la producción y suprimido la reabsorción de ácidos biliares después de quitar el íleo, ratones que experimentaron la cirugía sufren de sobreacumulación de sales biliares en el intestino y asoció diarrea, morbilidad y mortalidad. Uso novedoso del cirugía modelo introducido en este estudio puede proporcionar la visión mecanicista y funcional control ileal de regulación metabólica sistémica en fisiología y enfermedad.

Los procedimientos para la ileectomy se muestran en la figura 1. El primer paso incluye preparación de la piel abdominal de ratón, haciendo una incisión abdominal y usando retractores para exponer completamente el intestino (figura 1A-C). A continuación, el ciego de ratón fue localizado (figura 1D); Dado que su tamaño y su forma hacen un hito fácilmente identificable...

Reabsorción del ácido de bilis del intestino-dependiente y la inhibición de la regeneración de la síntesis hepática de ácidos biliares es importante para la salud y la homeostasis sistémica. En este estudio, describimos un modelo de ratón para la resección ileal evaluar la malabsorción biliar inducida por ileectomy, la sobreacumulación y la toxicidad en intestino de ratón.

Sobreacumulación de Ileectomy inducida por bilis en intestino de ratón

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer ...

El objetivo general de esta cirugía es evaluar la malabsorción de sales biliares inducida por ileectomía, así como su sobreacumulación y toxicidad en el intestino del ratón. Las enfermedades del íleon, que se manifiestan en condiciones como la enfermedad de Crohn, el cáncer, trastornos autoinmunes o infecciones, son causas importantes de morbilidad y mortalidad. Consideramos que el desarrollo de este modelo, que implica la extirpación segmentaria del íleon, puede aprovecharse para obtener conocimientos sobre la biología y también sobre terapias. Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia la terapia de la diarrea por ácidos biliares, ya que la ileectomía podría inducir una sobreproducción de ácidos biliares por parte del hígado y una malabsorción y sobreacumulación por parte del intestino. En general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades con la anastomosis intestinal, que es la parte más crítica y difícil de esta cirugía. Comience confirmando el nivel adecuado de sedación mediante la compresión del dedo del pie y aplicando crema depilatoria en el abdomen del ratón.Retire el pelo con esponjas quirúrgicas y coloque al animal sobre una mesa quirúrgica para pequeños animales con control de temperatura ajustada a 37 grados Celsius. Aplique pomada en los ojos del animal y desinfecte la piel expuesta mediante una limpieza secuencial con povidona-yodo y etanol al 70 %. Cubra el área quirúrgica del abdomen con gasa quirúrgica estéril y use un escalpelo para realizar una incisión media en el abdomen y corte a través de la capa muscular.Utilizando un aplicador de algodón para proteger los intestinos, abra completamente los músculos abdominales del ratón con separadores para exponer la cavidad abdominal. A partir del ciego, mueva cuidadosamente el íleon conectado y una parte del yeyuno fuera de la cavidad abdominal y use una sutura de seda 7-0 para ligar la rama superior de la arteria mesentérica superior. Cuando el color del tejido cambie de rosa a oscuro, indicando una oclusión completa, use tijeras para extirpar el 50 o el 90 % del íleon, según los parámetros del experimento.Lave el lumen de ambos extremos ileales con solución salina al 0,9%. Después de localizar el mesenterio en el lado de ambos extremos ileales, alinee los mesenterios en ambos extremos del tejido extirpado y utilice una sutura de 8-0 para unir los extremos entre sí. Suture el lado contralateral del íleon para mantener el íleon anastomosado de manera natural y suture las partes superior e inferior entre las dos suturas originales para unir completamente los dos extremos ileales.Tras confirmar la ausencia de fugas en el sitio de anastomosis, devuelva el ciego y el intestino delgado a sus ubicaciones anatómicas originales y utilice una aguja roma para lavar el área quirúrgica con solución salina tibia al 0,9%. Cierre la capa muscular abdominal con una sutura 6-0 y alinee la incisión cutánea abdominal para cerrar la piel y facilitar una cicatrización óptima de la herida. A continuación, transfiera el ratón a una unidad de cuidados intensivos en una jaula con cama de papel sobre una placa calefactora con control de temperatura para la recuperación nocturna, proporcionando alimento blando además del alimento y agua habituales.Un día después de la cirugía, pese al animal completo. Luego, extraiga el tracto gastrointestinal o GI y pese el tejido intestinal. Transfiera el tejido GI a un tubo cónico de 15 mililitros y use tijeras para cortar el tejido en segmentos cortos.Luego, pelletice los fragmentos de tejido mediante centrifugación y transfiera el sobrenadante que contiene sales biliares a un nuevo tubo. El análisis de reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real revela una expresión abundante de factor de crecimiento de fibroblastos 15, transportador apical de sodio y ácidos biliares, proteína fijadora de ácidos biliares del íleon y ARNm de la beta del transportador de solutos orgánicos en el íleon, con expresión baja hasta extremadamente baja en el yeyuno y el resto del intestino. Los niveles de ARNm de adenomatous polyposis coli, que se miden como control negativo, permanecen similares en todo el intestino.Después de 24 horas, el intestino procedente de la cirugía simulada es normal, mostrando un tamaño y una morfología similares a los de los animales sin cirugía. Los volúmenes de líquido muestran un aumento gradual del 0 % al 90 % de ileectomía, lo que corresponde a la relación significativamente aumentada entre el peso del tracto gastrointestinal y el peso corporal observada tras una resección del 90 %. El líquido gastrointestinal recolectado de los tractos gastrointestinales posteriores a la cirugía, así como la relación entre el peso del líquido gastrointestinal y el peso del tracto gastrointestinal, también muestran un aumento progresivo tras la resección.Además, el ensayo de ácidos biliares confirma que la cantidad de ácidos biliares detectada en el sobrenadante aumenta conforme se incrementa el tamaño de la resección ileal, lo que sugiere que la resección del 50 % del íleon es un modelo de ileectomía en ratón más aplicable debido a sus efectos adversos relativamente más moderados. Una vez dominada, esta técnica puede completarse en 30 minutos si se realiza adecuadamente. Tras su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la microcirugía exploraran la biología del íleon y también el síndrome biliar en animales pequeños.Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo identificar y extraer adecuadamente el segmento ileal y cómo realizar una anastomosis intestinal.

ileectomy-induced-bile-overaccumulation-in-mouse-intestine

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este video describe el protocolo detallado para la resección intestinal en un modelo murino. Esta técnica proporciona información sobre la malabsorción biliar inducida por ileectomía, la sobreacumulación y la toxicidad en el intestino del ratón.

Modelo de resección ileal murina: estudio del metabolismo biliar inducido por ileectomía en modelo murino

La resección ileocólica se realiza comúnmente en varias enfermedades humanas; sin embargo, se sabe poco sobre el impacto de la resección intestinal en las enfermedades quirúrgicas. Este artículo proporciona instrucciones sobre la ejecución del procedimiento en ratones con alto éxito, proporcionando un medio para estudiar los efectos de la resección ileocólica en modelos de enfermedad.

Murino ileocólica Resección intestinal con anastomosis primaria

La interrupción del flujo biliar da lugar a una lesión hepática colestásica inflamatoria grave con una secuencia característica de alteraciones morfológicas dependientes del tiempo. En este trabajo presentamos un protocolo para la ligadura quirúrgica de la colédoca en ratones que permite inducir una fuerte respuesta fibrótica a los 21 a 28 días.

Ligadura del conducto biliar en los ratones: Inducción de la injuria hepática inflamatoria y fibrosis por colestasis obstructiva

Presentamos la ligadura del conducto biliar parcial como modelo quirúrgico de lesión hepática y regeneración en roedores.

Ligadura del conducto biliar parcial en el ratón: un modelo controlado de la colestasis obstructiva localizada

Obstrucciones intestinales son una obstrucción parcial o completa del intestino que puede causar dolor abdominal severo, náuseas, vómitos y evitando el paso de las heces. Este procedimiento para crear tiene obstrucciones parciales intestinal en ratones es confiable en el estudio de los mecanismos de crecimiento celular patológico y la muerte en el intestino.

Un modelo de ratón de la obstrucción Intestinal parcial

El protocolo presentado describe una extirpación quirúrgica fácil del apéndice (parche cecaco) en un ratón seguido de la inducción del cáncer colorrectal asociado a la enfermedad inflamatoria intestinal. Este modelo de apendicectomía murina permite investigar el papel biológico del apéndice en la patogénesis de la enfermedad gastrointestinal humana.

Modelo de apendicectomía murine del cáncer colorrectal asociado a la colitis crónica por localización precisa del parche de Caecal

El bypass duodeno-ileal de anastomosis única (SADI-S) es un procedimiento bariátrico emergente con importantes efectos metabólicos. En este artículo, presentamos un modelo confiable y reproducible de SADI-S en ratones.

Bypass duodeno-ileal de anastomosis única con modelo de gastrectomía en manga en ratones

Describimos un modelo murino de íleo postoperatorio generado por manipulación intestinal. Se evaluó la función del tránsito gastrointestinal, los cambios patológicos y la activación de las células inmunitarias 24 h después de la cirugía.

Modelo murino de íleo postoperatorio

El clamp hiperinsulinémico euglucémico, o una pinza de insulina, es el estándar de oro para evaluar la acción de la...

Hiperinsulinémico euglucémico abrazaderas en ratones conscientes, sin freno

Un método para visualizar y cuantificar la estructura 3-dimensional de la vena portal hepática del ratón o del conducto biliar intrahepático se describe. Esta técnica de colada de resina también se puede aplicar a otros sistemas de conductos o vascular y...

3-Dimensional resina de moldeo e Imagen de la vena portal del ratón o Sistema vías biliares intrahepáticas

Aprende a realizar una ileectomía segmental en ratón para estudiar la malabsorción y sobreacumulación de ácidos biliares en el intestino. Este modelo quirúrgico permite investigar mecanismos de diarrea por ácidos biliares.

Sobreacumulación de Ileectomy inducida por bilis en intestino de ratón

Explorar más videos