Sobreacumulación de Ileectomy inducida por bilis en intestino de ratón

El objetivo general de esta cirugía es evaluar la malabsorción biliar inducida por ileectomía, la sobreacumulación y la toxicidad en el intestino del ratón. Las enfermedades del íleon, como la enfermedad de Crohn, el cáncer, los trastornos autoinmunes o las infecciones, son fuentes importantes de morbilidad y mortalidad. Creemos que el desarrollo de este modelo que implica la extirpación segmentaria del íleon puede aprovecharse para obtener información sobre biología y terapia.

Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia el tratamiento de la diarrea por ácidos biliares, ya que la ileectomía puede inducir una sobreproducción de ácidos biliares por parte del hígado y la malabsorción y sobreacumulación por parte del intestino. Por lo general, las personas nuevas en este método lucharán con la anastomosis intestinal, que es la parte más crítica y difícil de esta cirugía. Comience confirmando el nivel adecuado de sedación mediante un pellizco en los dedos de los pies y la aplicación de crema depilatoria en el abdomen del ratón.

Retire el pelo con esponjas quirúrgicas y coloque al animal en una mesa quirúrgica para animales pequeños con temperatura controlada y a 37 grados centígrados. Aplique ungüento en los ojos del animal y desinfecte la piel expuesta con un exfoliante secuencial de povidona yodada y etanol al 70%. Cubra el área quirúrgica del abdomen con una gasa quirúrgica estéril y use un bisturí para hacer una incisión en la línea media del abdomen y cortar a través de la capa muscular.

Usando un aplicador con punta de algodón para proteger los intestinos, abra completamente los músculos abdominales del ratón con retractores para exponer la cavidad abdominal. A partir del ciego, mueva con cuidado el íleon conectado y parte del yeyuno fuera de la cavidad abdominal y use una sutura de seda 7-0 para ligar la rama superior de la arteria mesentérica superior. Cuando el color del tejido cambie de rosa a oscuro, lo que indica una oclusión completa, utilice unas tijeras para extirpar el 50 o el 90% del íleon, dependiendo de los parámetros del experimento.

Enjuague el lumen de ambos extremos ileales con solución salina al 0,9%. Después de ubicar el mesenterio en el lado de ambos extremos ileales, alinee los mesenterios en ambos extremos del tejido extirpado y use un 8-0 sutura para unir los extremos. Suturar el lado contralateral del íleon para mantener el íleon anastomoso, de forma natural y suturar los lados superior e inferior entre las dos suturas originales para unir completamente los dos extremos ileales.

Después de confirmar la ausencia de fugas del sitio de la anastomosis, devuelva el ciego y el intestino delgado a sus ubicaciones anatómicas originales y use una aguja roma para lavar el área quirúrgica con solución salina tibia al 0,9%. Cierre la capa muscular abdominal con una sutura 6-0 y alinee la incisión de la piel abdominal para cerrar la piel y facilitar la cicatrización óptima de la herida. Luego, transfiera el ratón a una unidad de cuidados intensivos en una jaula de cama de papel en una almohadilla térmica con temperatura controlada para recuperarse durante la noche con alimentos blandos además de la comida y el agua habituales.

Un día después de la cirugía, pesar todo el animal. Luego, extraiga el tracto gastrointestinal o gastrointestinal y pese el tejido intestinal. Transfiera el tejido gastrointestinal a un tubo cónico de 15 mililitros y use unas tijeras para cortar el tejido en segmentos cortos.

A continuación, granule los trozos de tejido por centrifugación y transfiera el sobrenadante que contiene sales biliares a un nuevo tubo. El análisis cuantitativo de la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real revela una expresión abundante del factor de crecimiento de fibroblastos 15, el transportador apical de sodio-ácido biliar, la proteína de unión a ácidos biliares ileales y el ARNm beta del transportador de solutos orgánicos dentro del íleon con una expresión menor o extremadamente baja dentro del yeyuno y el resto del intestino. Los niveles de ARNm de la poliposis adenomatosa, que se miden como un control negativo, permanecen similares en todo el intestino.

A las 24 horas, el intestino de la cirugía simulada es normal, mostrando un tamaño y morfología similares a los de los animales no quirúrgicos. Los volúmenes de líquido exhiben un aumento del gradiente de 0% a 90% de ileectomía correspondiente a la relación GI/peso corporal significativamente aumentada observada después de una resección del 90%. El líquido gastrointestinal recolectado de los tractos gastrointestinales después de la cirugía y la relación entre el peso del líquido gastrointestinal y el peso del tracto gastrointestinal también muestran un aumento del gradiente después de la resección.

Además, el ensayo de ácidos biliares confirma que la cantidad de ácidos biliares detectados en el sobrenadante aumenta a medida que aumenta el tamaño de la resección ileal, lo que sugiere que la resección de íleon al 50% es un modelo de ileectomía en ratones más aplicable debido a sus efectos adversos relativamente más moderados. Una vez dominada, esta técnica se puede completar en 30 minutos si se realiza correctamente. Tras su desarrollo, esta técnica abrió el camino para que los investigadores en el campo de la microcirugía exploraran la biología del íleon y también el síndrome biliar en animales pequeños.

Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo identificar y extirpar correctamente el segmento ileal y cómo realizar una anastomosis intestinal.