Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 5:03 min. • July 8th, 2025
La tinción fluorescente de plata de proteínas en geles de poliacrilamida emplea sondas fluorogénicas para detectar y cuantificar las proteínas.
Comience con un gel de poliacrilamida con proteínas, separadas en bandas mediante electroforesis. Remoje en una mezcla fijadora de etanol y ácido acético, que evita que las bandas se difundan al desnaturalizar las proteínas.
Lave el gel para eliminar el ácido acético residual y el etanol. Sumerja el gel en tinte de nitrato de plata. Los iones de plata se unen fuertemente a grupos cargados negativamente en las proteínas.
Incubar en la oscuridad. Enjuague el gel en agua ultrapura para eliminar los complejos de iones de plata no unidos.
Sumerja el gel en una solución de desarrollo que contenga una sonda fluorogénica multicomponente: TPE-4TA. Esta sonda aniónica se dirige a los iones de plata unidos a la proteína, formando agregados insolubles que activan las propiedades fluorogénicas de la sonda, impartiendo así fluorescencia.
Como la activación de la fluorescencia depende de la agregación, las sondas no unidas no emiten ninguna señal, lo que permite la tinción total de proteínas con una emisión de fondo reducida.
Incube el gel en la oscuridad
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