Multimer-PAGE para separar complejos de proteínas nativas: una técnica de separación híbrida que consiste en Blue Native-PAGE y SDS-PAGE para separar proteínas multiméricas intactas del lisado de tejidos.

Los complejos proteicos multiméricos son esenciales para diversos procesos biológicos.

Para separar los complejos de proteínas en su estado nativo mediante multimer-PAGE, tome lisado de tejidos que contenga los complejos deseados. Cargue el lisado en un conjunto de gel para Blue native PAGE.

Llene el sistema con un tampón alcalino que contenga colorante aniónico azul y conéctelo a la fuente de alimentación. A un pH alcalino, las moléculas de colorante se unen al complejo proteico impartiéndole una carga negativa general sin desnaturalizarse. Este complejo proteico intacto y cargado negativamente migra a través del gel como una banda azul.

Después de una ejecución mínima, y permitiendo que la proteína intacta migre al gel de resolución, extirpe la tira que contiene el complejo. Incube la tira en una solución que contenga un agente de reticulación para permitir que sus grupos reactivos interactúen con los grupos amina de la proteína proximal, estabilizando el complejo multimérico.

Reemplace la solución de reticulación con un reactivo de enfriamiento para disminuir la actividad de los reticulantes no reaccionados. Agregue SDS, un detergente aniónico, que imparte una carga negativa uni