Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:42 min. • July 8th, 2025
Coloque las mitocondrias aisladas de las células de neuroblastoma en un tampón que contenga un tinte fluorescente impermeable a la membrana y unido al calcio.
Incubar para permitir que las mitocondrias se estabilicen en el tampón.
Agregue un tampón que contenga calcio e incube agitando.
Los iones de calcio se unen a las moléculas de colorante, provocando su fluorescencia.
Con un espectrómetro de fluorescencia, controle la fluorescencia del tinte en tiempo real.
Ahora, inyecte tampón que contenga calcio a intervalos regulares.
El aumento de la concentración de calcio promueve la absorción de calcio mitocondrial, reduciendo los iones de calcio libres disponibles para unirse al tinte, lo que resulta en una disminución de la fluorescencia.
Una vez que las mitocondrias alcanzan su capacidad máxima de almacenamiento de calcio, la adición adicional de calcio desencadena la apertura del poro de transición de permeabilidad mitocondrial (mPTP).
Esta abertura de poros libera calcio de las mitocondrias hacia el tampón, donde se une al tinte y provoca un aumento de la fluorescencia.
Determinar la cantidad total de calcio necesaria para inducir la apertura de mPTP, que refleja la capacidad de re
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