Purificación de afinidad de complementación bimolecular para aislar dos proteínas que interactúan

Para detectar y aislar un par de proteínas específicas que interactúan mediante purificación de afinidad de complementación bimolecular, agregue un par de plásmidos de complementación de fluorescencia bimolecular-mezcla de agente de transfección en una placa de cultivo que contenga células de mamíferos.

Un plásmido codifica una proteína que interactúa, la proteína de cebo, fusionada con un fragmento de proteína fluorescente reportera. El otro plásmido codifica para la otra proteína de unión, la proteína presa, fusionada con el fragmento complementario de la proteína fluorescente.

incubar. El agente de transfección facilita la absorción celular de plásmidos. Las células transfectadas con éxito expresan proteínas localizadas en la membrana celular.

Las interacciones de las proteínas cebo-presa acercan los fragmentos de proteínas fluorescentes. Esto hace que los fragmentos se fusionen y se vuelvan a plegar, formando la proteína fluorescente funcional, cuya fluorescencia se puede visualizar bajo un microscopio de fluorescencia.

Reemplace el medio con un tampón de lisis que contenga detergente no iónico para alterar las membranas celulares, liberando las proteínas de fusión. Recoja el l