Medición de la carga in vivo de bacterias que expresan luciferasa en una larva de insecto

Para medir la carga bacteriana in vivo, comience con larvas de insectos esterilizadas preinfectadas con Bacillus Calmette-Guérin o BCG lux. BCG lux es una cepa de Mycobacterium bovis BCG modificada genéticamente que expresa luciferasa, una enzima productora de bioluminiscencia.

Transfiera una larva de insecto a un tubo de matriz lisante que contenga tampón con bolas de acero. Con un homogeneizador, homogeneice la larva, liberando los componentes intracelulares, incluidas las bacterias, en el tampón.

Centrifugar el tubo para recoger el homogeneizado y transferirlo a un tubo luminómetro.

Lave el tubo de matriz con un tampón que contenga detergente para solubilizar los fragmentos celulares y liberar las bacterias residuales.

Combine las fracciones en el mismo tubo del luminómetro y agregue el sustrato de luciferasa. Los sustratos entran en las bacterias e interactúan con las enzimas luciferasas, lo que da como resultado la bioluminiscencia. Cargue el tubo en un luminómetro y mida la bioluminiscencia.

El luminómetro mide la intensidad de la luz emitida y calcula la unidad de luz relativa, o RLU, indicativa de la carga in vivo de BCG en una larva de insecto.

Extienda la suspensión homog