Detección de proteínas priónicas anormales en el tejido cerebral mediante inmunohistoquímica

Tome una diapositiva con una sección fija del cerebro de un mamífero que exhibe agregados de proteínas priónicas mal plegadas.

Tratar la sección con ácido fórmico para reducir la infectividad de los agregados priónicos.

Tratar con un tampón ácido dentro de una cámara de presión hidratada. Un calor alto y un pH ácido rompen la fijación de proteínas reticuladas, desenmascarando los epítopos antigénicos.

Sumergir en peróxido de hidrógeno para inactivar la peroxidasa endógena, evitando manchas de fondo no deseadas.

Coloque el portaobjetos en una placa de cubierta y agregue un tampón para mantener la hidratación de los tejidos.

Introducir una solución de bloqueo, evitando la unión de anticuerpos no específicos.

Agregue un anticuerpo primario específico a los agregados de priones.

Retire las moléculas de anticuerpos no unidas. Introducir un anticuerpo secundario biotinilado que se une al anticuerpo primario.

Retire las moléculas de anticuerpos no unidas. Agregue una enzima peroxidasa biotinilada complejada con avidina que se une a la biotina en el anticuerpo secundario.

Agregue un sustrato cromogénico, que la peroxidasa oxida en un producto coloreado.

Con un microscopio, observe los agre