Detección cuantitativa multiplexada de bacterias mediante microesferas magnéticas marcadas con colorantes

Tome una placa de ensayo que contenga una mezcla de microesferas magnéticas de poliestireno teñidas internamente con fluoróforos espectralmente diferentes.

Cada conjunto de microesferas está acoplado covalentemente a distintos anticuerpos de captura específicos de bacterias patógenas.

Agregue una mezcla bacteriana patógena muerta por calor. Incubar.

Los anticuerpos de captura se unen a los antígenos bacterianos diana, formando complejos microesfera-bacteria.

Utilice un separador magnético para sedimentar complejos. Deseche las bacterias no unidas y lave con tampón.

Agregue anticuerpos de detección tampón y biotinilados, que se unen específicamente a las bacterias unidas a microesferas.

Separe magnéticamente los complejos y lave con tampón.

Vuelva a suspender los complejos en el búfer. Moléculas reporteras de pipetas que comprenden estreptavidina acoplada a fluoróforos, que se unen a los anticuerpos de detección biotinilados.

Separe y lave magnéticamente los complejos. Vuelva a suspender en el búfer.

Durante el análisis basado en flujo, el primer láser excita los fluoróforos internos de la microesfera, generando firmas espectrales únicas e identificando conjuntos de microesferas úni