Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 4:46 min. • July 8th, 2025
Tome una sección fija de tejido cerebral de ratón que contenga una población escasa de astrocitos que expresan una proteína fluorescente.
Trate la sección flotante con un tampón que contenga detergente para permeabilizar las células.
Incube la sección en un tampón de bloqueo para evitar la unión de anticuerpos inespecíficos.
Trate la sección con anticuerpos primarios e incube para permitir que los anticuerpos se unan a las proteínas fluorescentes en los astrocitos.
Lave cualquier exceso de anticuerpos primarios con tampón.
A continuación, incube la sección con anticuerpos secundarios marcados con fluoróforos que se unen a los anticuerpos primarios.
Lave los anticuerpos secundarios no unidos con un tampón.
Transfiera la sección a una mezcla de agua desionizada para eliminar los residuos de detergente.
Coloque la sección en un portaobjetos que contenga agua desionizada con tampón. Retire el exceso de líquido y agregue medios de montaje. Luego, coloque un cubreobjetos y asegúrelo.
Finalmente, use microscopía confocal para visualizar los astrocitos que expresan proteínas fluorescentes marcados dentro de la sección.
Para comenzar, prepare una solución nueva de TBST agregando 1 mililitro
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