Análisis de la dinámica del calcio y los cambios potenciales en la membrana del endotelio arteriolar de un ratón
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:38 min. • April 28th, 2025
Asegure un tubo endotelial arteriolar extraído de un cerebro de ratón en una cámara con un flujo amortiguador continuo.
Coloque la cámara en una configuración de grabación.
Introduce un tinte fluorescente sensible al calcio. Incubar para permitir la absorción celular del tinte.
Lavar para eliminar cualquier tinte no internalizado.
Inserte un electrodo en una célula endotelial y registre el potencial de membrana en reposo.
Elevar la temperatura del baño a una temperatura fisiológica para facilitar la unión del calcio intracelular al tinte.
Excitar el colorante y medir la fluorescencia para cuantificar los niveles basales de calcio celular.
Introducir un fármaco que se une a receptores específicos acoplados a proteínas G en las células endoteliales, iniciando una cascada de señalización.
Esta cascada libera iones de calcio del retículo endoplásmico al citoplasma, mejorando la unión del colorante de calcio y la fluorescencia.
Los niveles elevados de calcio citoplasmático también activan los canales de potasio, lo que facilita la salida de iones de potasio y disminuye el potencial de membrana.
Registre los datos.
El aumento de la fluorescencia y la disminución del potencial de membrana indican u
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