Imágenes de lapso de tiempo de la división de células madre neurales de ratón mediante microscopía confocal

Tome una placa de pocillos múltiples que contenga células madre neurales adheridas o NSC aisladas de un cerebro de ratón transgénico. Estas NSC contienen una proteína etiquetada con fluorescencia que es específica de la primera fase de crecimiento, o G1.

A medida que el NSC se divide, emite fluorescencia en la fase G1 del ciclo celular mientras que no emite fluorescencia en otras fases.

Coloque la placa en una cámara de imágenes de microscopio de escaneo láser confocal, mantenida a una temperatura controlada.

Seleccione la lente del objetivo deseada y ajuste la intensidad de fluorescencia.

Configure los parámetros para la creación de imágenes de lapso de tiempo.

Elija la opción de imagen grande y programe la adquisición de imágenes a intervalos regulares durante la duración deseada.

Utilice un escáner resonante de alta velocidad para evitar el fotoblanqueo y mantener una alta resolución.

Utilice la configuración de campo claro para visualizar la forma de la celda y use un filtro fluorescente apropiado para capturar la fluorescencia.

Inicie imágenes de lapso de tiempo del NSC para visualizar diferentes fases del ciclo celular.

Prepare un microscopio de escaneo láser confocal para obtener imágenes precalentando la cámara de control de temperatura adjunta a 37 grados Celsius bajo una atmósfera de dióxido de carbono al 5%. Coloque la placa de 96 pocillos dentro de la cámara del microscopio precalentada y enfoque el primer pocillo. Luego, abra el software de imágenes y haga clic derecho en la ventana principal para seleccionar Adquirir controles de adquisición y desadquisición para abrir el TI Pad y seleccionar el objetivo DIC plan Apo VC 20x.

A continuación, haga clic en Adquirir controles de adquisición y luego abra las opciones de lapso de tiempo. Establezca el centro de cada pocillo como una posición de escenario y seleccione la opción Imagen grande en 7 por 7 milímetros cuadrados. Observe una imagen de mosaico alrededor del centro de cada pozo. Establezca la superposición de la imagen de mosaico grande en 5% y establezca la frecuencia para que las imágenes se tomen cada 20 minutos durante 24 horas.

En la configuración A1 plus, seleccione el nivel de voltaje del tubo fotomultiplicador para cada fluorescencia que aparece en la barra de menú. Seleccione esta opción para adquirir imágenes con un escáner resonante de alta velocidad en un formato de 512 por 512 píxeles y utilice DIC para visualizar las celdas. Luego, seleccione la carpeta para guardar los archivos de datos. Seleccione el botón Ejecutar ahora en la ventana de adquisición de ND para comenzar la adquisición.