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DOI: 10.3791/51528-v
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La inmunotinción es una técnica eficaz para visualizar tipos específicos de células y proteínas dentro de los tejidos. Al utilizar la sonicación, el protocolo descrito aquí alivia la necesidad de diseccionar tejidos de Drosophila melanogaster de embriones y larvas en fase avanzada antes de la inmunotinción. Proporcionamos una metodología eficiente para la inmunotinción de larvas enteras fijadas en formaldehído.
El objetivo general de este procedimiento es visualizar o saciar los tejidos en C dos utilizando microscopía de fluorescencia después de la sonicación. Esto se logra recolectando primero muestras embrionarias y larvales y luego fijándolas con formaldehído, heptano y metanol. El segundo paso es sonicar la muestra fija para eliminar la cutícula y permitir la penetración de los anticuerpos.
A continuación, la muestra se tiñe inmunológicamente con anticuerpos primarios y secundarios fluorescentes. El paso final es montar la muestra en una solución Antifa a base de glicerol. En última instancia, la microscopía confocal o epifluorescente se utiliza para visualizar el tejido en desarrollo, así como la expresión y localización de proteínas.
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