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JoVE Journal Biology
Sonication-facilitated Immunofluorescence Staining of Late-stage Embryonic and Larval Drosophila Tissues In Situ

La sonicación-facilitado Inmunofluorescencia tinción de etapa tardía embrionario y larval Drosophila Tejidos In Situ

Full Text
13,245 Views
10:10 min
August 14, 2014

DOI: 10.3791/51528-v

Ashley Fidler*1, Lauren Boulay*1, Matthew Wawersik1

1Department of Biology,College of William & Mary

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

La inmunotinción es una técnica eficaz para visualizar tipos específicos de células y proteínas dentro de los tejidos. Al utilizar la sonicación, el protocolo descrito aquí alivia la necesidad de diseccionar tejidos de Drosophila melanogaster de embriones y larvas en fase avanzada antes de la inmunotinción. Proporcionamos una metodología eficiente para la inmunotinción de larvas enteras fijadas en formaldehído.

El objetivo general de este procedimiento es visualizar o saciar los tejidos en C dos utilizando microscopía de fluorescencia después de la sonicación. Esto se logra recolectando primero muestras embrionarias y larvales y luego fijándolas con formaldehído, heptano y metanol. El segundo paso es sonicar la muestra fija para eliminar la cutícula y permitir la penetración de los anticuerpos.

A continuación, la muestra se tiñe inmunológicamente con anticuerpos primarios y secundarios fluorescentes. El paso final es montar la muestra en una solución Antifa a base de glicerol. En última instancia, la microscopía confocal o epifluorescente se utiliza para visualizar el tejido en desarrollo, así como la expresión y localización de proteínas.

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Biología Molecular Número 90 Drosophila Embriones larvas sonicación fijación immunostain inmunofluorescencia organogénesis desarrollo

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