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DOI: 10.3791/51774-v
Yong Wang*1,2, En Cai*1,2, Janet Sheung1,2, Sang Hak Lee1,2, Kai Wen Teng2,3, Paul R. Selvin1,2,3
1Department of Physics,University of Illinois at Urbana-Champaign, 2Center for the Physics of Living Cells,University of Illinois at Urbana-Champaign, 3Center for Biophysics and Computational Biology,University of Illinois at Urbana-Champaign
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article discusses the FIONA technique, which allows for the localization of single fluorophores with nanometer precision. It details the steps necessary to conduct FIONA experiments, including equipment setup and molecule immobilization.
Fluoróforos individuales pueden ser localizados con precisión nanométrica utilizando FIONA. Aquí se reporta un resumen de la técnica de FIONA, y la forma de llevar a cabo experimentos de FIONA se describe.
El objetivo general de este procedimiento es demostrar cómo llevar a cabo imágenes de fluorescencia con una precisión de un nanómetro o experimentos de Fiona. Esto se logra configurando primero el equipo requerido y alineando la óptica para la reflexión interna total, la fluorescencia, la microscopía o el césped. El siguiente paso es inmovilizar CY 3D NA en la superficie interna de una cámara de muestras y localizar moléculas individuales de CY 3D NA con precisión nanométrica.
Posteriormente, se aplica Fiona para estudiar el movimiento de una sola miosina truncada cinco un motor marcado con un punto cuántico. En última instancia, el tamaño del paso de la miosina a medida que camina, Acton, se midió como 36 nanómetros mediante el análisis de Fiona. Aunque este método puede proporcionar información sobre los motores moleculares, también se puede aplicar a otros sistemas, como el seguimiento de receptores en la membrana de las células.
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