Name: Aislamiento y Caracterización cuantitativa inmunocitoquímica de células miogénicas Primarias y fibroblastos de músculo esquelético humano (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-12T13:15:00.000+00:00
Duration: 11 min 22 s
Description: Aprenda a aislar células miogénicas y fibroblastos de biopsias de músculo esquelético humano mediante clasificación inmunomagnética basada en CD56. Este método permite alto rendimiento y viabilidad celular para análisis de marcadores fenotípicos y factores de transcripción por inmunofluorescencia cuantitativa.

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Los autores desean agradecer a Carl Hobbs y Lindsey Majoram por su asistencia técnica, y al profesor Pat Doherty por el uso de las instalaciones de microscopía. El Dr. Agley contó con el apoyo de una beca del King's College de Londres. También se reconoce la financiación del Spurrell Trust.

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<li>Mackey, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+satellite+cell+number+and+activity+status+in+human+skeletal+muscle+biopsies%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+a+d+Nerve%22%5BJournal%5D)">Assessment of satellite cell number and activity status in human skeletal muscle biopsies.</a> Muscle a d Nerve. 40, 455-465 (2009).</li>
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<li>Grützkau, A., Radbruch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+but+mighty%3A+How+the+MACS-technology+based+on+nanosized+superparamagnetic+particles+has+helped+to+analyze+the+immune+system+within+the+last+20+years%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Small but mighty: How the MACS-technology based on nanosized superparamagnetic particles has helped to analyze the immune system within the last 20 years.</a> Cytometry Part A. 77A, 643-647 (2010).</li>
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<li>Castiglioni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Progenitors+that+Exhibit+Myogenic%2FOsteogenic+Bipotency+In+by+Fluorescence-Activated+Cell+Sorting+from+Human+Fetal+Muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Isolation of Progenitors that Exhibit Myogenic/Osteogenic Bipotency In by Fluorescence-Activated Cell Sorting from Human Fetal Muscle.</a> Stem Cell Reports. 2, 560(2014).</li>
<li>Fukada, S. -i, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD90-positive+cells%2C+an+additional+cell+population%2C+produce+laminin+%CE%B12+upon+transplantation+to+dy3k%2Fdy3k+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">CD90-positive cells, an additional cell population, produce laminin α2 upon transplantation to dy3k/dy3k mice.</a> Exp. Cell Res. 314, 193-203 (2008).</li>
<li>Stickland, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+development+in+the+human+fetus+as+exemplified+by+m.+sartorius%3A+a+quantitative+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anat%22%5BJournal%5D)">Muscle development in the human fetus as exemplified by m. sartorius: a quantitative study.</a> J. Anat. 132, 557-579 (1981).</li>
</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos.

Hemos descrito un procedimiento de clasificación immunomagentic para el enriquecimiento selectivo de precursores derivadas de músculo humanos a partir de pequeñas muestras de material de biopsia muscular. Esta técnica ha sido muy valiosa en nuestro laboratorio para superar la pérdida de cultivos de músculo humanos derivados de los fibroblastos, sino también para la comprensión del comportamiento único de poblaciones distintas de células progenitoras derivadas de músculo. Células miogénicas Una vez purificados pueden ser...

La reparación y la regeneración del músculo esquelético requiere la acción de las células satélite 1, las células madre miogénicas 2,3. In vivo estas células existen en un estado quiescente reversible situado entre el sarcolema y la lámina basal de cada miofibrillas, pero se activan para proliferar, fusibles y diferenciarse como el tejido muscular están dañados, reparar y regenerar 3. Las células satélite se pueden aislar a partir de muestras de biopsia de músculo humano joven y de edad avanzada utilizando digestión enzimática 4 y sus propiedades miogénicos posteriormente se pueden estudiar en la cultura primaria 5. La eficiencia de este proceso de aislamiento con respecto a tanto el rendimiento y la pureza de la población de células depende de los métodos utilizados y puede variar de muestra a muestra. Los dos principales tipos de células adherentes obtenidas a partir de la digestión enzimática son las células satélite (células miogénicas ahora denominados o células precursoras de músculo), identificados inicialmente como células CD56 + / desmina, y mufibroblastos SCLE derivados, identificadas como CD56 - y TE7 + 5 células. Los fibroblastos tienen una tasa de proliferación rápida y no se someten a la detención del crecimiento y la diferenciación terminal irreversible al contacto célula-célula, como las células miogénicas; por lo tanto en poblaciones mixtas, los fibroblastos pueden invadir células miogénicas a dominar la cultura. Los fibroblastos a menudo se han visto como una irritación para los biólogos musculares, sin embargo, ahora existe un creciente interés en los fibroblastos como células dignos de estudio por derecho propio, en particular, ya que han demostrado tener un papel cooperativo con células miogénicas durante la reparación del músculo 6 . El aislamiento y purificación de diferentes tipos de células de músculo humano es por lo tanto una consideración metodológica importante cuando se trata de investigar el comportamiento innato de ambos tipos de células en cultivo. Activada por fluorescencia de células (FACS) es un método por el cual las células pueden ser ordenados para el estudio adicional y / o se contaron y seanalizada. FACS se ha demostrado para enriquecer de forma fiable células miogénicas humanos, pero el rendimiento de las células para el cultivo posterior hasta el momento no ha sido alto 7. Dado el potencial de replicación limitado de células somáticas, tales como células derivadas de células satélite miogénicas y muy pobre la proliferación y diferenciación asociados con la senescencia 4, se requieren métodos más suaves. Culturas individuales de fibras musculares ofrecen otra, menos agresivo, los medios de obtención de células satélite murinos todavía residente en su nicho sublaminal y después de su activación en la cultura 8,9. Sin embargo, esto a menudo no es posible a partir del material de biopsia de músculo humano (porque las fibras rara vez se pueden obtener de tendón a tendón) lo que significa que esta técnica puede no ser accesible a muchos laboratorios de investigación interesados ​​en el estudio de células derivadas de músculo humanos. Por otra parte, la técnica de la fibra individual sólo proporciona el número de células muy limitadas. Aquí se describe un sistema de clasificación basada en el gendigestión enzimática TLE de células utilizando colagenasa y dispasa seguido por dos rondas sucesivas de clasificación magnética de células activadas (MACS), que da a la vez una alta pureza (&gt; 95% de células miogénicas) y rendimiento (~ 2,8 x 10 6 ± 8,87 x 10 5 células / g de tejido) para experimentos en la cultura. CD56 se considera el marcador de superficie estándar de oro para la identificación de las células satélite humanos in situ e in vitro 10 11 y proporciona el candidato ideal marcador de superficie para la fijación del talón. En este enfoque anticuerpos CD56 conjugados con óxido de hierro y perlas superparamagnéticas que contiene polisacárido se une a las células y pasa a través de una columna de separación celular magnética de alto gradiente colocado en un fuerte campo magnético 12,13. Las columnas de separación se llenan con una matriz de lana de acero o de hierro esferas ferromagnéticas que sirven para enfocar líneas de campo magnético hacia su superficie generar fuertes gradientes de campo magnético (~ 4tesla) 14. En estas columnas incluso células ligeramente magnéticos son atraídos y absorbidos a su superficie 14. Sin consolidar (CD56 -) las células pasan a través de la columna mientras que las células CD56 + etiquetados con microperlas magnéticas se conservan hasta la retirada del campo magnético 12,15. Las suspensiones celulares de cualquier etapa del proceso de clasificación se pueden colocaron en placas a la densidad deseada para la experimentación adicional. A raíz de una intervención dada los constituyentes celulares pueden identificarse utilizando inmunocitoquímica, utilizando imágenes de campo amplio o microscopía de fluorescencia confocal y analizados cuantitativamente usando un enfoque de análisis de imágenes que permite una rápida medición objetiva de todas las células marcadas en cualquier imagen dada. En nuestro laboratorio hemos utilizado este enfoque doble clasificación inmunomagnética seguido por análisis de imagen 16 para demostrar que CD56 - fibroblastos humanos transdifferentiate fácilmente en los adipocitos, mientras que las células myogenics de origen satélite son altamente resistentes a esta conversión adipogenic 5.

<table><tbody><tr><td>Colagenasa&nbsp; D</td><td>Roche&nbsp;</td><td></td><td></td>11088866001</tr><tr><td>Dispasa II</td><td>Sigma</td><td>D4693-1G</td><td>Debe ser esterilizado con filtro antes de usar</td></tr><tr><td>Tripsina/EDTA</td> <td>(Gibco) Invitrogen</td><td>15400-054</td><td></td></tr><tr><td>100 &#956; filtro de células m</td><td>BD Biosciences</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>Solución de colágeno (3 mg/ml en ácido acético al 0,1%)</td><td>Sigma, Dorset, Reino Unido</td><td>C8919&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Filtro de jeringa Minisart SRP15 (0.2 &#956; m)</td> <td>Sartorius</td><td>17573ACK</td><td>Membrana de politetrafluoretileno (PTFE)</td></tr><tr><td>CD56 microperlas humanas</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-050-401</td><td>Tenga en cuenta la vida útil limitada de las microperlas</td></tr><tr><td>Microperlas anti-fibroblastos humanas</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-050-601</td><td></td></tr><tr><td>40 &mu; m Filtros de preseparación</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>Columnas de células grandes</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-042-202</td><td>Estas columnas vienen con una resistencia de flujo. El uso de la resistencia de flujo no es necesario para obtener las altas purezas miogénicas descritas aquí.</td></tr><tr><td>Columnas LS&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MiniMacs Separador</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-042-102</td><td>Este separador se adapta a la columna de celdas grandes pero no a la columna LS.</td></tr><tr><td>MidiMACS</td><td>Miltenyi Biotech&nbsp;</td><td>130-042-302</td><td></td></tr><tr><td>MACS multistand</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td></td><td>Debe ser esterilizado con filtro antes de usar</td></tr><tr><td>Aceite Red O</td><td>Sigma</td><td>O0625</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de trietilo</td><td>Sigma 538728</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Whatman Paper</td><td>Sigma</td><td>Z241121-1PAK</td><td>Nº 42, Sin cenizas. Para preparar el filtro, dobla el papel de filtro circular para hacer un semicírculo, luego vuelve a doblar el semicírculo por la mitad para formar un cono. Coloque el cono en un embudo para filtrar.</td></tr><tr>Sondas moleculares <td>de reactivo antidecoloración ProLong Gold</td><td>, Invitrogen</td><td>P36930</td><td>Esto se puede comprar con o sin DAPI y no apaga la fluorescencia inicial.</td></tr><tr><td>AxioVision</td><td>Carl Zeiss</td><td>Contacto Zeiss</td><td></td></tr><tr><td>Adobe Photoshop CS5 Extended</td><td>Adobe (comprado en Pugh Computers)</td><td>ADPH16982*&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

aislamiento y caracterización cuantitativa inmunocitoquímica de células miogénicas primarias y fibroblastos de músculo esquelético humano

Isolation and Quantitative Immunocytochemical Characterization of Primary Myogenic Cells and Fibroblasts from Human Skeletal Muscle

La reparación y la regeneración del músculo esquelético requiere la acción de las células satélite, que son las células madre de músculo residente. Estos se pueden aislar a partir de muestras de biopsia de músculo humano usando digestión enzimática y sus propiedades miogénicas estudiados en cultivo. Cuantitativamente, los dos principales tipos de células adherentes obtenidas a partir de la digestión enzimática son: (i) las células satélite (denominadas células miogénicas o células precursoras del músculo), identificado inicialmente como CD56 + y más tarde como desmina + / CD56 + células y (ii) músculo- fibroblastos derivados, identificadas como CD56 - y TE-7 +. Los fibroblastos proliferan de manera muy eficiente en la cultura y en las poblaciones de células mixtas estas células pueden invadir células miogénicas de dominar la cultura. El aislamiento y purificación de diferentes tipos de células de músculo humano es por lo tanto una consideración metodológica importante cuando se trata de investigar el comportamiento innato de cualquiera de los tipos de células en cultivo. Aquí DescrIbe un sistema de clasificación basada en la digestión enzimática suave de las células utilizando colagenasa y dispasa seguido por clasificación magnética de células activadas (MACS), que da a la vez una alta pureza (&gt; 95% de células miogénicas) y buen rendimiento (~ 2,8 x 10 6 ± 8,87 x 10 5 células / g de tejido después de 7 días in vitro) de experimentación en la cultura. Este enfoque se basa en la incubación de la población de células derivadas de músculo mezclado con microperlas perlas magnéticas conjugadas con un anticuerpo contra CD56 y luego pasar las células a través de un campo magnético. Células CD56 + unidos a microperlas son retenidos por el campo mientras que CD56 - células pasan sin impedimentos a través de la columna. Las suspensiones celulares de cualquier etapa del proceso de clasificación pueden ser en placas y se cultivaron. A raíz de una intervención dada, la morfología celular, y la expresión y localización de proteínas, incluyendo factores de transcripción nuclear puede cuantificarse utilizando el etiquetado de inmunofluorescencia con anticuerpos específicos y una imagen Processing y el paquete de análisis.

Células miogénicas y fibroblastos purificadas pueden ser cultivadas en un medio de diferenciación adipogénica durante tres días seguidos por medio de la nutrición adipogenic desde cualquier lugar entre 7-30 días para evaluar su potencial para la adipogénesis. Uso de las poblaciones de células purificadas, la tinción con Oil Red O en combinación con inmunotinción para marcadores de linaje adipogénicos y miogénicas mostró que sólo la fracción de fibroblastos era capaz de diferenciación adipogénica (Figura 2).</str...

Los principales tipos de células adherentes derivadas del músculo humano son las células miogénicas y los fibroblastos. Aquí, las poblaciones celulares se enriquecen mediante la clasificación de células activadas magnéticamente basadas en el antígeno CD56. El posterior inmunomarcaje con anticuerpos específicos y el uso de técnicas de análisis de imagen permiten cuantificar las características citoplasmáticas y nucleares de las células individuales.

Aislamiento y Caracterización cuantitativa inmunocitoquímica de células miogénicas Primarias y fibroblastos de músculo esquelético humano

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated ...

El objetivo general de este procedimiento es separar las dos principales poblaciones celulares obtenidas de muestras de biopsia muscular humana con una alta eficiencia y rendimiento para permitir la evaluación de marcadores fenotípicos y de factores de transcripción específicos. Esto se logra disociando primero una muestra de biopsia de músculo humano en una suspensión de una sola célula en el segundo paso. Después de un cultivo de siete días, las células se separan mediante perlas inmunomagnéticas que se clasifican en CD 56 positivas, que son células miogénicas, y fracciones CD 56 negativas, que son los fibroblastos.A continuación, las células se tiñen y se obtienen imágenes para obtener los marcadores fenotípicos y proteicos deseados de interés. En última instancia, la microscopía de inmunofluorescencia y el análisis cuantitativo de imágenes se pueden utilizar para medir la intensidad de los factores de transcripción localizados nucleares seleccionados dentro de las poblaciones celulares clasificadas. Las principales ventajas de esta técnica, que utiliza la clasificación de células inmunomagnéticas sobre los métodos existentes como la clasificación de células activadas por fluorescencia, son que es suave, permite una excelente clasificación de las células musculares primarias humanas con un alto rendimiento y viabilidad y se puede realizar rápidamente.Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia el aumento de nuestra comprensión de las bases celulares de la degeneración del músculo fibrograso observada en el envejecimiento, así como en una serie de patologías musculares para aislar las células precursoras derivadas del músculo lo antes posible después de obtener la biopsia. Primero, determine el peso de la muestra de tejido y luego hinche el músculo en medio basal varias veces para lavar la muestra y eliminar el exceso de sangre. Deje que el músculo se sedimente a temperatura ambiente durante 30 a 60 segundos y luego aspire todo el tubo, excepto los últimos dos o tres mililitros de medio.A continuación, invierta el tubo en una placa de Petri estéril para permitir que el líquido restante lleve el músculo a la placa. Ahora limpie la muestra de cualquier pieza visible de cualquier grasa o tejido conectivo obvio. A continuación, gire el plato para movilizar el medio restante, y luego aspire todo el medio y agregue tres mililitros de una solución de colagenasa y enzima disbe por cada 100 a 400 miligramos de tejido, y corte la muestra de músculo en trozos cúbicos muy pequeños de uno a dos milímetros.Cuando la muestra esté suficientemente picada. Utilice una pipeta de 25 mililitros para transferir los fragmentos de tejido y la solución enzimática a un tubo cónico estéril de 10 a 20 mililitros. Lave la placa con otros tres mililitros de solución enzimática y luego use una pipeta de 10 mililitros para transferir los fragmentos musculares restantes al tubo.Coloque el tubo a 37 grados centígrados durante 60 minutos. Rehacer la suspensión de tejido cada 15 minutos con una pipeta de 10 mililitros. A continuación, termine la disociación enzimática con al menos una cantidad equivalente de medio de crecimiento fresco recalentado.A continuación, pase la suspensión celular a través de un filtro de 100 micrómetros para eliminar cualquier pieza grande de desechos y luego centrifugue el resus. Suspenda el pellet en siete u ocho mililitros de medio de crecimiento y luego incube las células en un matraz de cultivo de tejidos T 25 sin recubrimiento. A 37 grados centígrados con 5% de dióxido de carbono durante siete días.Al final de la semana, la tripsina observa la monocapa celular durante tres minutos. Cuando las células se hayan desprendido, agregue de cinco a 10 mililitros de crecimiento del músculo esquelético, medio para evitar la digestión excesiva y aplique las células por centrifugación. Luego, después del recuento, reserve algunas de las células para la caracterización del marcador de linaje celular y lave las células restantes en 15 mililitros de ganancia de centrífuga PBS.Esta vez, vuelva a suspender el pellet en 170 microlitros de tampón de clasificación máximo a temperatura ambiente y pipetee suavemente para resus. Suspender las células a 35 microlitros de micro perlas magnéticas conjugadas anti CD 56 anticuerpo anti CD 56 bien mezcladas. Mezcle la solución celular varias veces con pipeta e incube la mezcla durante 15 minutos a cuatro grados centígrados con vegetación suave.A mitad de camino después de la incubación, lavar la celda y la solución de perlas con 10 mililitros de centrífuga tampón de clasificación y reus. Suspenda el pellet en un mililitro de tampón de clasificación fresco. A continuación, lubrique el filtro de separación de presos y la columna con 500 microlitros de tampón de abastecimiento.Y luego mezcle y transfiera inmediatamente todo el mililitro de suspensión celular a través del filtro de separación pres y dentro de la columna, enjuague la columna tres veces con un mililitro de lavado a presión de tampón de abastecimiento, recogiendo la fracción de fibroblastos no retenida, pasando a través de la columna a un tubo cónico estéril de 50 mililitros que contiene una pequeña cantidad de medio de crecimiento. A continuación, retire la columna del imán y presione el émbolo en la parte superior de la columna para recoger la fracción de celda positiva CD 56. En un tubo cónico separado de 50 mililitros que contiene crecimiento caliente, se emite un medio de crecimiento medio desde este paso.Si se va a realizar una doble clasificación, contemple las fracciones de células positivas y negativas recolectadas. Si se requiere una doble fuente para obtener una pureza adicional, no coloque medios en el tubo de recolección positivo CD 56 en la primera clasificación, sino que repita los pasos comenzando desde el filtro y la lubricación de la columna en el punto final experimental apropiado. Fije los cultivos celulares positivos CD 56 en su medio de cultivo, utilizando un volumen equivalente de formaldehído caliente al 8%.Los 10 minutos con vegetación suave. A continuación, aspire el fijador y lave las células dos veces con PBS para inmunoteñir los antígenos de la superficie celular. Bloquee las células durante al menos una hora en 1%BSA en PBS y, a continuación, etiquete las células con los anticuerpos primarios y secundarios relevantes.Optimice la ganancia del detector, la potencia del láser y los ajustes de exposición relevantes para su microscopio y tinción. Antes de la obtención de imágenes, las células toman las imágenes de las células en el número deseado de canales de detección y en más de seis campos de visión diferentes. Para el análisis, abra los archivos de imagen TIFF apropiados y arrastre las imágenes entre sí para superponer los canales correspondientes apropiados.Cada canal aparecerá como una capa separada en el panel de capas. A continuación, en la ventana de análisis, elija seleccionar puntos de datos y, a continuación, personalizar y seleccionar las mediciones deseadas. Para analizar la intensidad de la fluorescencia nuclear, abra el cuadro de diálogo de la gama de colores y seleccione los colores muestreados en el menú desplegable.A continuación, manteniendo pulsada la tecla Mayús, seleccione los tonos específicos de los núcleos etiquetados. Haga clic en Guardar para almacenar esta máscara de selección de gama de colores para utilizarla con otras imágenes seleccionadas en la misma sesión. Una vez seleccionados los núcleos, escriba clic y seleccione relleno.A continuación, elija negro en el menú desplegable y confirme que la opacidad está establecida en 100%Siguiente, haga clic en seleccionar e invertir. A continuación, haz clic con el botón derecho del ratón y elige Relleno de nuevo y elige un relleno blanco en el menú desplegable. Realice un algoritmo de cuenca hidrográfica para separar cualquier núcleo parcialmente superpuesto en la capa nuclear ahora binaria.Vaya a seleccionar, luego a la gama de colores y luego a las sombras para seleccionar los núcleos separados individuales. A continuación, transfiera la selección a la capa que contiene una imagen en escala de grises de 16 bits del marcador deseado y haga clic en registrar medidas. Por último, exporte las mediciones seleccionadas como archivos de texto al software de análisis adecuado para su posterior procesamiento del aceite.La tinción roja de las poblaciones celulares purificadas en combinación con la inmunotinción para marcadores de linaje adipogénicos y miogénicos revela que solo la fracción de fibroblastos es capaz de una diferenciación epigénica con la acumulación masiva de grasa por parte de los fibroblastos visible a simple vista y con una demostración adicional de su transformación completa por la fuerte expresión de PPAR gamma nuclear por estas células en el día 15 de tratamiento. estas células han liberado cualquier antígeno del tejido conectivo TE siete A restante en su sustrato. Por el contrario, las células miogénicas mantienen su fenotipo normal, incluida su expresión de desmina y cadena pesada de miosina sin regulación positiva de la expresión gamma nuclear de PPAR. En esta figura, se muestra un ejemplo del análisis cuantitativo de un campo de células miogénicas positivas de Desmond y el campo del que se obtuvieron estos datos, lo que ilustra la variación de la expresión miogénica en núcleos individuales en esta densidad de siembra y punto de tiempo específicos.En este gráfico, se demuestra la utilidad del método para comparar directamente los niveles de factores de transcripción en diferentes tipos de células a nivel de célula por célula. Por ejemplo, estos fibroblastos musculares CD 56 negativos expresan un alto nivel del factor de transcripción adipogénico nuclear, PPAR gamma, mientras que las células miogénicas CD 56 positivas mantienen solo niveles muy bajos de factor de transcripción del receptor nuclear después de la exposición al medio inductor de adipocitos. Esta técnica permite a los investigadores en el campo de la biología muscular explorar los mecanismos de las decisiones sobre el destino celular en muestras de músculo humano sanas o patológicas.Después de ver este video, debe tener, en primer lugar, una buena comprensión de cómo obtener altos rendimientos de células derivadas de músculo humano purificadas y bien caracterizadas y, en segundo lugar, cómo realizar un análisis cuantitativo objetivo de los constituyentes celulares identificados por tinción inmunofluorescente.

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Investigación

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Developmental Biology

Biología del Desarrollo

Aislamiento y cultivo de fibras musculares es el estándar de...

Aislamiento y cultivo de fibras individuales y sus células satélite del músculo esquelético adulto

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Aislamiento de células satélite del músculo esquelético para estudios in vitro de miogénesis

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Ensayo de aislamiento de fibra única para la evaluación del comportamiento oxidativo de miofibras

Aprenda a aislar células miogénicas y fibroblastos de biopsias de músculo esquelético humano mediante clasificación inmunomagnética basada en CD56. Este método permite alto rendimiento y viabilidad celular para análisis de marcadores fenotípicos y factores de transcripción por inmunofluorescencia cuantitativa.

Aislamiento y Caracterización cuantitativa inmunocitoquímica de células miogénicas Primarias y fibroblastos de músculo esquelético humano (Video) | JoVE Journal

Aislamiento y Caracterización cuantitativa inmunocitoquímica de células miogénicas Primarias y fibroblastos de músculo esquelético humano

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