Name: Modelado 3D del lateral Ventrículos y histológico Caracterización de Tejidos periventricular en los seres humanos y de ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 26 s
Description: Aprende a crear reconstrucciones 3D de los ventrículos laterales cerebrales mediante imágenes de resonancia magnética y secciones coronales. Este método permite analizar cambios volumétricos y evaluar la integridad celular del revestimiento ventricular en modelos de ratón y humanos.

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Una subvención del NINDS NS05033 (JCC) apoyó este trabajo. Los programas RAC, SURF y OUR de la Universidad de Connecticut proporcionaron apoyo adicional.

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Los autores no tienen nada que revelar.

Presentamos herramientas y protocolos que pueden utilizarse para evaluar la integridad del sistema ventricular del cerebro en ratones y en seres humanos. Estas herramientas, sin embargo, pueden también ser aplicados a otras estructuras cerebrales o sistemas de órganos que sufren cambios debido a una lesión, enfermedad, o durante el proceso de envejecimiento 14,21,22. Las estrategias presentadas toma ventaja de software que permite la alineación de secuencias de RM transversales y longitudinales para generar r...

Un ependimarias líneas monocapa de células del sistema ventricular del cerebro que proporciona funciones de barrera y de transporte bidireccionales entre el líquido cefalorraquídeo (LCR) y el líquido intersticial (ISF), 1-3. Estas funciones ayudan a mantener el cerebro tóxico-libre y en equilibrio fisiológico 2,3. En los seres humanos la pérdida de porciones de este revestimiento a través de una lesión o enfermedad no parece resultar en sustitución regenerativa como se encuentra en otros revestimientos epiteliales; más bien la pérdida de cobertura de la célula ependimal parece resultar en astrogliosis periventricular con una malla de los astrocitos que cubren regiones desnudas de las células ependimarias en la superficie ventrículo. Repercusiones graves a mecanismos CSF / cambio ISF y remoción importantes se prevé que el resultado de la pérdida de esta capa epitelial 1,2,4-7. Una característica común de envejecimiento humano se amplía ventrículos laterales (ventrículomegalia) y edema periventricular asociado como observcado por resonancia magnética y la recuperación de la inversión a los fluidos atenuada resonancia magnética (MRI / FLAIR) 8-14. Para investigar la relación entre ventrículomegalia y la organización celular del revestimiento ventrículo, secuencias de RM humanos postmortem fueron emparejados con las preparaciones histológicas del tejido periventricular ventrículo lateral. En los casos de ventrículomegalia, áreas sustanciales de gliosis habían reemplazado la cobertura celular ependimaria lo largo de la pared del ventrículo lateral. Cuando la expansión ventrículo no se detectó por análisis de volumen a base de MRI, el revestimiento de células ependimarias estaba intacta y gliosis no se detectó a lo largo del revestimiento ventrículo 6. Este enfoque combinatoria representa la primera documentación que detalla los cambios globales en la integridad celular del revestimiento ventrículo lateral usando preparaciones wholemount de partes o toda la pared del ventrículo lateral y modelado 3D de los volúmenes ventriculares 6. Varias enfermedades (enfermedad de Alzheimer, la esquizofrenia) y lesiones (lesión cerebral traumática)mostrar ventrículomegalia como un rasgo neuropatológico temprano. Denudation de áreas del revestimiento de células ependimarias de ese modo se predijo para interferir con la función de las células ependimarias normal y comprometer el equilibrio homeostático entre CSF / fluido ISF y el intercambio de solutos. Por lo tanto, un examen más exhaustivo de los cambios en el sistema ventricular, su composición celular, y la consecuencia de las estructuras cerebrales subyacentes o vecinos en última instancia comenzará a revelar más sobre la neuropatología asociada con la ampliación ventrículo. La falta de datos de imágenes multimodales y, en particular secuencias de datos longitudinales, junto con un acceso limitado a las correspondientes muestras de tejidos histológicos hace análisis de patologías cerebrales humanas difícil. Fenotipos de modelado que se encuentran en el envejecimiento o enfermedad humana a menudo se puede lograr con modelos de ratón y modelos animales se convierten en uno de nuestros mejores medios para explorar preguntas acerca de la iniciación de la enfermedad humana y la progresión. Varios estudios enratones jóvenes sanos han descrito la citoarquitectura de las paredes del ventrículo lateral y el nicho de células madre subyacente 4,7-15. Estos estudios se han ampliado para incluir el modelado 3D y análisis celular de las paredes del ventrículo a través del envejecimiento 6,15. Ni gliosis periventricular ni ventrículomegalia se observan en ratones de edad, en lugar ratones muestran una zona subventicular relativamente robusto (SVZ) nicho de células madre subyacente a una célula intacta ependimaria forro 6,15. Por lo tanto, existen diferencias específicas de especie sorprendentes tanto en el mantenimiento y la integridad del revestimiento del ventrículo lateral en general durante el proceso de envejecimiento de 6,15. Por lo tanto, a mejores ratones uso para interrogar condiciones que se encuentran en los seres humanos, necesitan ser caracterizado y considerado apropiadamente en cualquier paradigma de modelado diferencias entre las dos especies. A continuación, presentamos los procedimientos para evaluar los cambios longitudinales a los ventrículos laterales y el tejido periventricular asociado tanto en humanos como mOuse. Nuestros procedimientos incluyen representación 3D y volumetría de ambos ventrículos del ratón y humanos, y el uso de análisis inmunohistoquímico de las preparaciones de todo el montaje de tejido periventricular para caracterizar tanto la organización celular y la estructura. Juntos, estos procedimientos proporcionan un medio para caracterizar cambios en el sistema ventricular y el tejido periventricular asociado.

<table><tbody><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Life Technologies</td><td>21600-069</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehído (PFA)</td><td>Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>19210</td><td>Uso al 4% en PBS, 4 & grados; C</td></tr><tr><td>Suero de Caballo Normal</td><td>Life Technologies</td><td>16050 10</td><td>% en PBS-TX (v/v)</td></tr><tr><td>Suero de Cabra Normal</td><td>Life Technologies</td><td>16210</td><td>10% en PBS-TX (v/v)</td></tr><tr><td>Triton X-100 (TX)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>0.1% en PBS (v/v)</td></tr><tr><td>Vibratomo</td><td>Leica</td><td>VT1000S</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de fluorescencia</td><td>Zeiss</td><td>Imager.M2</td><td></td></tr><tr><td>Cámara</td><td>Hamamatsu</td><td>ORCA R2</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio Controlador de etapa</td><td>Ludl Electronic Products</td><td>MAC 6000</td><td></td></tr><tr><td>Software de estereología</td><td>MBF Bioscience</td><td>Stereo Investigator 11</td><td></td></tr><tr><td>Software de estereología</td><td>ImageJ/NIH</td><td>NIH freeware</td><td></td></tr><tr><td>3D Software de reconstrucción MBF</td><td>Bioscience</td><td>Neurolucida Explorer</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio confocal</td><td>Leica</td><td>TCS SP2</td><td></td></tr><tr>Software <td></td><td></td><td></td>de<td>resonancia magnética</td></tr><tr><td>Freesurfer</td><td>https://surfer.nmr.mgh.harvard.edu/fswiki/DownloadAndInstall</td><td>Segmentación y volumen</td><td></td></tr><tr><td>ITK-Snap</td><td>http://www.itksnap.org/pmwiki/pmwiki.php</td><td></td><td>Segmentación y análisis de volumen</td></tr><tr><td>de múltiples imágenes GUI (Mango)</td><td>http://ric.uthscsa.edu/mango/ </td><td></td><td>Recubrimiento longitudinal</td></tr><tr><td>Equipo de montaje completo 22.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>& grados; cuchillo de puñalada recta microquirúrgico</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9854830</td><td></td></tr> plato de disección con fondo de cera <tr><td>parafilm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>pinzas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>finas</td></tr><tr><td>aquapolymount</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>microscopio de disección</td><td>Leica</td><td>MZ95</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpos</td><td></td><td></td><td></td>de montaje entero</tr><tr><td>ratón anti-b-catenina</td><td>BD Bioschiences, San José, CA, EE. UU</td><td></td>. <td>1:250</td></tr><tr><td>cabra anti-GFAP</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td></td><td>1:250</td></tr><tr><td>conejo anti-AQP4 (acuaporina-4)</td><td>&nbsp; Sigma-Aldrich</td><td></td><td>1:400</td></tr><tr><td>Anticuerpos</td><td></td><td></td><td></td>coronales</tr><tr><td>Anti-S100 y beta; anticuerpo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>1:500</td></tr><tr><td>4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI)</td><td>Life Technologies</td><td>D-1306</td><td>10 &micro; g/ml en PBS</td></tr></tbody></table>

modelado 3d del lateral ventrículos y histológico caracterización de tejidos periventricular en los seres humanos y de ratón

3D Modeling of the Lateral Ventricles and Histological Characterization of Periventricular Tissue in Humans and Mouse

El sistema ventricular transporta y hace circular el líquido cefalorraquídeo (LCR) y facilita la eliminación de solutos y toxinas del cerebro. Las unidades funcionales de los ventrículos son células epiteliales ciliadas denominadas células ependimarias, que recubren los ventrículos y, a través de la acción ciliar, son capaces de generar flujo laminar de LCR en la superficie del ventrículo. Esta monocapa de células ependimarias también proporciona funciones de barrera y filtración que promueven el intercambio entre los fluidos intersticiales cerebrales (ISF) y el LCR circulante. Los cambios bioquímicos en el cerebro se reflejan en la composición del líquido cefalorraquídeo y la destrucción del epéndimo puede alterar el delicado equilibrio del intercambio entre el líquido cefalorraquídeo y el líquido cefalorraquídeo. En los seres humanos existe una fuerte correlación entre la expansión del ventrículo lateral y el envejecimiento. La ventriculomegalia asociada a la edad puede ocurrir incluso en ausencia de demencia u obstrucción del flujo del líquido cefalorraquídeo. A menudo se desconoce la causa exacta y la progresión de la ventriculomegalia; Sin embargo, los ventrículos agrandados pueden mostrar una pérdida regional y, a menudo, extensa de la cobertura de las células ependimarias, con astrogliosis de la superficie del ventrículo y edema periventricular asociado que reemplaza la monocapa funcional de células ependimarias. Utilizando resonancias magnéticas junto con tejido cerebral humano postmortem, describimos cómo preparar, obtener imágenes y compilar representaciones en 3D de los volúmenes de los ventrículos laterales, calcular los volúmenes de los ventrículos laterales y caracterizar el tejido periventricular mediante el análisis inmunohistoquímico de las preparaciones de tejido de la pared del ventrículo lateral en la cara. También se presentan los análisis correspondientes del tejido cerebral de ratón, lo que respalda el uso de modelos de ratón como medio para evaluar los cambios en los ventrículos laterales y el tejido periventricular que se encuentran en el envejecimiento y la enfermedad humana. En conjunto, estos protocolos permiten investigar la causa y el efecto de la ventriculomegalia y destacar las técnicas para estudiar la salud del sistema ventricular y sus importantes funciones de barrera y filtración dentro del cerebro.

Contorno de trazado de los ventrículos laterales del ratón sobre la base de inmunoteñidas 50 micras secciones coronales y reconstrucciones en 3D (Figura 3) permite que los datos de volumen para ser recogidos en diferentes paradigmas experimentales utilizando el ratón como sistema modelo para la enfermedad o lesión. Fundamental para este procedimiento es la exclusión de las regiones donde las paredes del ventrículo lateral se adhieren el uno al otro. Por subsegmenting regiones de los ventrículos y la des...

Utilizando resonancias magnéticas (humanas), software de imágenes 3D y análisis inmunohistológicos, documentamos los cambios en los ventrículos laterales del cerebro. El mapeo longitudinal en 3D de los cambios en el volumen del ventrículo lateral y la caracterización de los cambios celulares periventriculares que ocurren en el cerebro humano debido al envejecimiento o la enfermedad se modelan en ratones.

Modelado 3D del lateral Ventrículos y histológico Caracterización de Tejidos periventricular en los seres humanos y de ratón

The ventricular system carries and circulates cerebral spinal fluid (CSF) and facilitates clearance of solutes and toxins from the brain. The functional ...

El objetivo general de los siguientes procedimientos es proporcionar un medio para permitir investigaciones sobre la causa y el efecto de la megacardia ventricular y resaltar técnicas que permitan estudiar la salud del sistema ventricular y sus importantes funciones de barrera y filtración dentro del cerebro. Esto se logra mediante la recolección de cortes coronales del cerebro de ratón o escáneres de RM del cerebro humano para generar reconstrucciones tridimensionales de los ventrículos y calcular los volúmenes ventriculares. Como segundo paso, el tejido post mortem que incluye preparaciones en bote de la superficie apical de los ventrículos se tiñe con anticuerpos específicos para células, con el fin de revelar la integridad celular del revestimiento ventricular. A continuación, se prepara un mosaico de la organización celular en toda la superficie ventricular y se superpone al modelo tridimensional del ventrículo para demostrar regiones de gliosis frente a células tapizantes intactas.Los resultados muestran regiones de expansión de los ventrículos basadas en un modelado longitudinal tridimensional de los ventrículos y áreas donde la capa celular térmica adyacente al revestimiento ventricular ya no está intacta, sino reemplazada por cicatrices gliales. Al combinar los datos de modelado 3D con los datos inmunohistoquímicos, puede generarse un mapa tridimensional específico por regiones de la composición celular del revestimiento ventricular. Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia la terapia o el diagnóstico de lesiones cerebrales, enfermedades neurodegenerativas como la enfermedad de Alzheimer y el envejecimiento normal, todas las cuales típicamente presentan algún grado de expansión ventricular y, por lo tanto, probable escoliosis de la superficie ventricular.Para demostrar los procedimientos en ratón estarán Richard Wolffer y un estudiante universitario de nuestro laboratorio; los procedimientos realizados con datos de RMN humanos y tejido humano posmortem serán demostrados por Yeun, actualmente estudiante de medicina, y Rebecca Chu, una estudiante de posgrado en el laboratorio. Prepare las láminas para su observación mediante fijación, corte, tinción inmunohistoquímica y montaje del cerebro de ratón según se describe en la sección escrita del protocolo. Para comenzar el procedimiento, para trazar los ventrículos laterales del ratón, encienda el microscopio de fluorescencia invertido y la computadora; el microscopio debe estar equipado con una platina automatizada y una cámara digital CCD.Inicie el software de mapeo en modo de fluorescencia y abra las opciones de visualización para cargar las barras de herramientas y los paneles de acoplamiento necesarios para el trazado. A continuación, haga clic en opciones, accesorios de opciones de visualización, y seleccione las barras de herramientas principal y de marcadores en el mismo menú. En paneles de acoplamiento, seleccione histograma de cámara, control de múltiples canales, configuración de cámara y adquisición de imágenes.Identifique el primer fragmento de tejido que contiene los ventrículos laterales, basándose en la intensa fluorescencia de S 100 beta que marca las células apendiculares que recubren el ventrículo lateral. Oriente los hemisferios izquierdo y derecho identificando la pequeña incisión realizada durante el corte.Ahora cree un nuevo archivo de datos y designe un punto de referencia para el movimiento de la etapa haciendo clic en la ventana de la imagen por encima del ventrículo lateral izquierdo. Mantenga este punto de referencia en una ubicación consistente en relación con los ventrículos laterales en todos los archivos de trazado. Para facilitar la importación de contornos en la reconstrucción seriada, seleccione el tipo de contorno preestablecido adecuado desde el menú desplegable de contornos.Utilice un color diferente para cada uno de los trazados de los ventrículos laterales izquierdo y derecho. Ahora haga clic a lo largo de toda la superficie apical del revestimiento del apéndice para trazar el contorno del ventrículo. Mueva la ventana de trazado utilizando las teclas de flecha.Después de trazar el contorno, haga clic derecho y seleccione cerrar contorno. Repita el trazado para el ventrículo derecho utilizando un color diferente. A continuación, seleccione el marcador adecuado de la barra de herramientas de marcadores situada a la izquierda y haga clic para colocar un marcador en la pantalla de trazado a lo largo de la línea media para ayudar a alinear los contornos en serie durante la reconstrucción 3D.Repita este procedimiento para hacer una segunda marca. Guarde los rastros del tejido seleccionando Archivo Guardar archivo de datos como y cree una nueva carpeta y un nombre de archivo numerando los rastreos según la convención número de diapositiva guion número de tejido para facilitar la identificación de los rastreos provenientes de secciones seriadas. Luego repita el procedimiento mostrado anteriormente para todas las secciones que contengan un ventrículo.Para realizar la reconstrucción 3D del ventrículo lateral. Abra el programa de reconstrucción 3D. Luego haga clic en Archivo Abrir y seleccione el archivo de contorno de la primera sección seriada trazada.Importe todas las trazas de contorno del ventrículo izquierdo y derecho, así como cualquier marcador adicional. Alinee los contornos según las instrucciones de la sección escrita del protocolo. Luego seleccione todos los contornos en el panel izquierdo y haga clic en el botón de visualización 3D para mostrar la reconstrucción final en 3D.Esta imagen muestra una sección coronal del cerebro de ratón que incluye los ventrículos laterales delimitados por células alargadas inmunorreactivas a la proteína S100 beta. El asterisco indica los ventrículos laterales. Los corchetes delimitan la adherencia y la barra de escala representa 500 micrones.Los ventrículos laterales del ratón se trazan como contornos y se organizan en secciones de subsegmentos. Las regiones intraventriculares se eliminan para evitar interferencias con el análisis volumétrico. Esta imagen muestra la reconstrucción 3D final de los contornos de los ventrículos laterales.El color amarillo representa el contorno de los volúmenes cerebrales completos que abarcan la región de interés que contiene los ventrículos laterales. Debe tener una buena comprensión de cómo crear reconstrucciones tridimensionales de los ventrículos a partir de tejido cerebral seccionado en corona. Se enumeran protocolos para crear la reconstrucción de imágenes tridimensionales y la cuantificación volumétrica de los ventrículos laterales, así como para evaluar los cambios volumétricos a lo largo del tiempo mediante análisis de superposición longitudinal; es importante tener en cuenta que la consistencia en la recopilación de datos de RM y en el procesamiento posterior a la adquisición son criterios extremadamente importantes para la inclusión de conjuntos de datos. Para realizar la segmentación ventricular, se utiliza ITK-SNAP para segmentar los ventrículos a partir de imágenes de RM ponderadas en T1 de alta resolución. Después de iniciar el programa, abra la imagen en escala de grises, seleccione el archivo deseado y ábralo como un archivo nifty.A continuación, desplácese por cada plano anatómico y observe las anomalías ventriculares, como regiones nasales, cuernos temporales grandes o pequeños u otras similares. Luego, en la caja de herramientas principal, haga clic en la herramienta de serpenteo (snake, ROI). A continuación, segmente en 3D y seleccione la opción de región de intensidad.Ahora haga clic en preprocesar imagen y seleccione la opción anterior. Registre la intensidad máxima utilizando la barra deslizante. Luego, establezca el umbral en el 15% de la intensidad máxima y registre este valor.Esto debería resaltar la ROI en blanco. Establezca el parámetro de suavizado en 10. Haga clic en aceptar.Luego a continuación. A continuación, agregue de 10 a 12 burbujas pequeñas de tamaño dos en cada ventrículo. Dos en el cuerno frontal anterior, siete espaciadas uniformemente a lo largo de la superficie superior del cuerpo del ventrículo lateral, una en el cuerno occipital y una en el cuerno temporal del ventrículo lateral.A continuación, seleccione los parámetros y establezca la fuerza de curvatura en 0,4. Luego, haga clic en el símbolo de reproducción para iniciar la evolución del contorno activo. Ahora, haga clic en actualizar malla para visualizar la superficie.Luego, marque la actualización automática. Detenga el proceso de segmentación cuando todas las áreas del ventrículo lateral estén incluidas en la región de interés. Evite la inclusión del tercer ventrículo.Finalmente, haga clic en finalizar y guarde los resultados de la segmentación en un formato de archivo nifty. Para obtener el volumen total de los ventrículos, seleccione segmentación, volumen y estadísticas para obtener el volumen total del ventrículo utilizando la etiqueta de color establecida. En este segmento, las ROI longitudinales se superponen utilizando el software mango para demostrar cualitativa y cuantitativamente los cambios en el volumen ventricular dentro de los sujetos a lo largo del tiempo.Después de abrir el software, haga clic en abrir, abra el archivo y cargue el archivo nifty guardado previamente. Una vez cargado el archivo de imagen, haga clic en archivo cargar ROI y cargue la ROI del punto temporal de línea base como verde. Haga clic en archivo cargar ROI y cargue la segunda ROI del punto temporal como roja.Guarde la superposición longitudinal seleccionando guardar archivo ROI y asigne a cada imagen un nombre de archivo según la convención que ahora aparece en pantalla. A continuación, abra ITK-SNAP. Luego, vuelva a abrir el ROI combinado como una imagen en escala de grises; cargue el ROI combinado seleccionando segmentación cargar desde imagen archivo ROI combinado para obtener los datos volumétricos longitudinales. Ejecute a continuación el volumen de segmentación y las estadísticas correspondientes.Etiquete uno rojo igual a volumen de expansión, etiquete dos verde igual a volumen de estenosis, etiquete tres azul igual a volumen basal, comenzando con un hemisferio intacto que ha sido fijado en formaldehído al 10 % durante un máximo de seis semanas y enjuagado cuidadosamente con PBS 0,1 molar. Corte secciones coronales de 1,5 centímetros de espesor a través de todo el hemisferio utilizando un cuchillo grande y un escalpelo microquirúrgico. Diseque la pared ventricular a una profundidad de un centímetro, manteniendo una sección continua para toda la pared lateral; subdivida la pared según sea necesario para crear secciones del tamaño adecuado para la tinción. Haga una muesca en el lado opuesto de la pared ventricular.Para identificar la orientación superior-inferior, realice inmunohistoquímica y monte las secciones según el protocolo escrito. Bajo un microscopio estereoscópico, sujete el tejido utilizando alfileres con un bisturí microquirúrgico, cree una sección uniformemente delgada de la pared del ventrículo lateral y monte un penem hacia arriba sobre un portaobjetos. Cuando los portaobjetos estén completamente secos, examine las secciones mediante microscopía confocal de inmunofluorescencia. Establezca el plano focal de imagen en la superficie del ventrículo, determinado mediante el uso de beta-catenina, un marcador de la unión apical.Proteínas de unión de las células apéndiculares. Luego, delinee las regiones de cobertura de las células apéndiculares y la astrogliosis superficial según la tinción de GFAP en la superficie del ventrículo para documentar y montar toda la superficie ventricular. Utilice imágenes superpuestas de toda la superficie para crear un mosaico de imágenes en serie.Abra Adobe Photoshop y utilice el comando Archivo > Automatizar > Unir automáticamente > Diseño interactivo para seleccionar las imágenes que se superpondrán, realizando ajustes manuales si es necesario. Cree una nueva capa para trazar el mosaico y generar una representación esquemática del tejido intacto. Según la cobertura celular o la superficie del ventrículo en la escoliosis G, compile todas las secciones para reconstruir el mapa de la pared ventricular y vincularlo con la región correspondiente en la reconstrucción por resonancia magnética.Este es el ensamblaje de imágenes de resonancia magnética humana. El ventrículo lateral se ha definido como la región de interés en rojo. La reconstrucción tridimensional de la imagen, como se muestra aquí, permite la cuantificación volumétrica y la visualización cualitativa del ventrículo lateral.Esta imagen muestra la evaluación de la expansión ventricular longitudinal en un paciente anciano. Las resonancias magnéticas longitudinales de múltiples puntos pueden alinearse y superponerse para visualizar y cuantificar la expansión del volumen ventricular dentro de los sujetos a lo largo del tiempo. Estas últimas tres imágenes muestran la evaluación inmunohistoquímica y el mapeo regional de la superficie del ventrículo lateral humano. Aquí.Las áreas de células apendiculares intactas delimitadas por beta catenina y tinción muestran una apariencia empedrada, tal como indica el asterisco, y están delimitadas por una línea punteada frente a regiones de astrogliosis en la superficie del ventrículo delineadas por la tinción de GFAP. Se superponen imágenes confocales seriadas para generar un mosaico regional y se trazan mediante Adobe Photoshop o una representación esquemática de la organización celular en la superficie ventricular. Esta imagen esquemática del mosaico se proyecta sobre la superficie ventricular en la reconstrucción tridimensional del ventrículo correspondiente basada en MRI.Como se muestra, el color verde indica el apéndice intacto y las áreas rojas indican gliosis. Durante la realización de este procedimiento, es importante mantener una documentación cuidadosa de cada muestra de tejido para poder realizar la reconstrucción seriada y el mapeo de la integridad celular. Tras este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como la subsegmentación de los ventrículos laterales, con el fin de responder preguntas adicionales sobre la expansión específica de la región a lo largo del tiempo.

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