Modificación de un Colliculo-tálamo-cortical del ratón Cerebro Loncha, incorporación de la impresión 3-D de la Cámara Componentes e Imagen óptica multi-escala

El objetivo general de este procedimiento es preparar el corte cortical de Calot Thal con cuatro estructuras auditivas principales, el colo inferior, el tálamo auditivo, la porción auditiva del núcleo reticular talámico y la corteza auditiva. Esto se logra primero quitando el cerebro del ratón. El segundo paso es bloquear el cerebro en preparación para cortar.

A continuación, corte el cerebro para obtener rodajas que contengan la conexión cortical thal de Calot. El último paso es utilizar la imagen de flavoproteínas para evaluar la conectividad. En última instancia, el corte de cerebro que contiene la conexión cortical carotal se puede utilizar para una variedad de experimentos para comprender mejor el procesamiento de la información en las regiones auditivas del cerebro medio y cuatro. La demostración visual de este método es fundamental, ya que los pasos para bloquear el cerebro antes de cortar son difíciles de aprender porque requiere un corte complejo de doble ángulo. lo cual es clave para obtener proyecciones intactas.

Para preparar la etapa de corte para el corte, corte un pequeño trozo de barrena al 3% de aproximadamente un centímetro cúbico para utilizarlo como respaldo para el cerebro, y otro trozo de 1,5 centímetro por 1,5 milímetro por tres milímetros para utilizarlo como protuberancia para soportar el colículo inferior. A continuación, pegue el tope trasero en el escenario con adhesivo de cianocrilato y luego pegue la protuberancia en el lado derecho del tope de manera que formen un ángulo de 80 grados en una diapositiva marcada con dos líneas a 90 grados y una línea diagonal a 17 grados desde la parte superior izquierda hasta la parte inferior derecha, coloque el cerebro con el lado dorsal hacia arriba en el punto de intersección de las dos líneas. Con una cuchilla de afeitar, retire de dos a cuatro milímetros del extremo rostral del cerebro para crear una superficie plana.

A continuación, coloque el cerebro con el lado del mimo hacia arriba sobre la superficie plana recién creada. Alinee la superficie dorsal del cerebro con una línea horizontal y la línea media del cerebro con una línea vertical marcada en el portaobjetos. A continuación, alinea la hoja de afeitar con una línea de 17 grados.

Inclina la navaja en un ángulo de 30 grados y retira aproximadamente tres milímetros de la corteza derecha en un doble corte diagonal para montar el cerebro en la etapa de vibrato. Coloque un pequeño trozo de papel de filtro en el lado ventral del cerebro para que la dimensión larga sea perpendicular a la línea media. Aplique con cuidado una pequeña cantidad de adhesivo de cianoacrilato en el área frente al tope trasero y a la izquierda del bulto.

Posteriormente, coloque el lado del cerebro cortado en diagonal doble sobre el pegamento de modo que la parte mimada del cerebro y el cerebro posterior estén apoyados en la protuberancia, y el lado derecho del cerebro esté contra el tope. En este procedimiento, coloque rápidamente la etapa de corte en el vibrato, construya una etapa con solución de corte. A continuación, alinee la hoja con la parte superior del cerebro.

Extrae de uno a 1,5 milímetros de la parte superior del cerebro. A continuación, corte y retire más rodajas de 300 a 500 micrómetros mientras se mueve más profundamente. Cuando el colículo inferior, el cuerpo medial y el núcleo lateral de la ICT son visibles, la circunvolución dentada debe aparecer en forma de C y la estructura debe estar alineada.

Obtenga aproximadamente dos rebanadas de 600 micrómetros. Estos son los cortes corticales carotales. Después de eso, transfiéralos a la cámara de retención de 32 grados centígrados.

Para adquirir la imagen de autofluorescencia de flavoproteínas, recoja las imágenes a cuatro hercios durante 105 segundos. Ilumine el tejido con luz azul de 470 a 490 nanómetros y capture por encima de 515 nanómetros, asegurándose de que la imagen no sea demasiado oscura ni se apague. A continuación, utilice la estimulación eléctrica para activar el tejido y adquirir una imagen de calcio.

Recopile imágenes a 10 hercios durante 25 segundos. Ilumina el tejido con luz de 365 nanómetros y captura la fluorescencia por encima de 510 nanómetros. De nuevo, asegurándote de que la imagen no sea ni demasiado oscura ni desgastada.

A continuación, utilice la estimulación eléctrica para activar las células. Esta imagen muestra la confirmación de la conexión cortical carotal en el corte de cerebro por autofluorescencia de flavoproteína. La estimulación eléctrica administrada a 0,05 hercios al colo inferior se visualizó a cuatro hercios y se procesó cuatro a para mostrar la potencia a esa estimulación.

Frecuencia, el tálamo auditivo, el tálamo, el reticular, el núcleo y la corteza auditiva se activan sinápticamente. Aquí hay una porción inconexa. La estimulación eléctrica del clo inferior con activación solo se observó en el tálamo auditivo.

No se capturó todo el camino, probablemente debido a que uno de los cortes estaba ligeramente fuera de plano. Con proyecciones corticales de Alam. Esta imagen muestra una activación atípica de la corteza auditiva.

La estimulación eléctrica del colo inferior activó la corteza auditiva sin señal visible. En el tálamo auditivo, es probable que el tálamo todavía estuviera activado, pero no estaba en la superficie de la imagen. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo obtener el corte cortical talámico AAL y evaluar su conectividad.