Name: Bone Medium acondicionado: Preparación y Bioensayo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 18 s
Description: Aprende a preparar medio condicionado por hueso y evaluar su actividad biológica in vitro. Este método utiliza fragmentos de mandíbula porcina para estudiar la respuesta celular mediante PCR en tiempo real.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Los autores desean agradecer a Catherine Solioz por su hábil asistencia.

1. Preparación BCM <ol><li> Obtener mandíbulas de cerdos de la carnicería local lo más fresco posible. Coloque las mandíbulas sobre una superficie firme y suelte un colgajo de espesor total con especial atención para no dejar ningún tejido blando o periostio unido al hueso. Trabajar en un ambiente limpio y sin la necesidad de trabajar bajo la campana de flujo. </li><li> Una vez que se dio a conocer un colgajo de espesor total, use un raspador de hueso para recoger los fragmentos de hueso del lado bucal. Tenga en cuenta que el raspador de hueso tiene que ser fuerte. Maneje con firmeza el raspador de hueso y con movimientos largos recogen el hueso. Desechar astillas de hueso más pequeño que 1 mm. <ol><li> Para mantener astillas de hueso nativo, colocar directamente las astillas de hueso en placas de plástico de 10 cm de diámetro con medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado con 1% de antibióticos y antimicóticos no dejar que se sequen. </li><li> Para evaluar el impacto del procesamiento térmico, astillas de hueso sometidos a pasteurización durante 30 minutos a 80 ° C oautoclave durante 20 min a 121 ° C. </li><li> Para evaluar el impacto de la desmineralización, agitar astillas de hueso en 1 M HCL durante 4-6 horas a 4 ° C y lavar varias veces con medio de cultivo hasta que el pH es neutro. </li></ol></li><li> Coloque un total de 5 g de virutas de hueso por 10 ml de DMEM fresco suplementado con 1% de antibióticos y antimicóticos en un nuevo plato de plástico. </li><li> Coloque los platos de plástico en una atmósfera húmeda a 37 ° C durante 24 horas. Entonces, cosecha BCM. Centrifugar el BCM a 200 xg durante 10 minutos para eliminar los residuos, filtrarla estéril (0,2 nm), y tener alícuotas congeladas a -80 ° C. </li><li> Descongelar la población de BCM inmediatamente antes de su uso y evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación. </li><li> Para los experimentos indicados, remojar las membranas de colágeno con medio BCM o sin suero durante 1 hora a temperatura ambiente. Lave vigorosamente las membranas con PBS y colocarlos en placas de 96 pocillos. Membranas húmedas se siembran con células. </li><li> BCM proceso de preparación se resume en la Figura 1. </li&gt; </ol> 2. Los bioensayos Basado en células mesenquimales <ol><li> Células mesenquimales humanas de semillas (por ejemplo, células óseas, gingival y fibroblastos del ligamento periodontal) en una placa de 12 pocillos con una concentración de 30.000 células / cm2. Para sembrar las células utilizan el medio de cultivo que consiste en DMEM, 10% de suero fetal bovino y antibióticos. Deja que las células se adhieren a la placa de O / N. </li><li> Deseche el medio de cultivo y se lavan las células con PBS precalentado a 37 ° C. Estimular las células mediante la adición de medio de cultivo libre de suero pre-calentado con y sin 20% BCM. Colocar las células en un ambiente humidificado a 37 ° C durante 24 hr. </li><li> Deseche el medio de cultivo, enjuague las células con PBS precalentado y extraer el ARN de acuerdo con su protocolo preferido. </li><li> Ajustar la concentración de ARN con el fin de tener la misma cantidad de ARN en cada muestra. Preparar ADNc y realizar una QRT-PCR para analizar los genes seleccionados utilizando los cebadores mostrados en la Tabla 1. NOTA: Estas son las diluciones de todos los componentes: 2x SYBR verdes, 20x cebador directo, 20x cebador inverso, 5x agua DD estéril, ADNc 5x. La qRT-PCR se realiza en 40 ciclos de 95 ° C 15 seg y 60 ° C 1 min. </li><li> Calcular los niveles relativos de expresión mediante la normalización de la limpieza gen GAPDH utilizando el método Δ (Ct) donde Ct es objetivo CT - CT GAPDH y Δ (Ct) es estimulada Ct - Ct control. </li><li> Después de este control de calidad, añadir BCM al medio de cultivo para estimular todos los tipos de células, incluidas las células mesenquimales, células hematopoyéticas o células endoteliales. </li></ol>

<ol><li>Buser, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+Stability+of+Early+Implant+Placement+with+Contour+Augmentation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+dental+research%22%5BJournal%5D)">Long-term Stability of Early Implant Placement with Contour Augmentation.</a> Journal of dental research. , (2013).</li>
<li>Chiapasco, M., Casentini, P., Bone Zaniboni, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((augmentation+procedures+in+implant+dentistry%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+journal+of+oral+%26+maxillofacial+implants.+24+Suppl%22%5BJournal%5D)">augmentation procedures in implant dentistry.</a> The International journal of oral & maxillofacial implants. 24 Suppl. , 237-259 (2009).</li>
<li>Giannoudis, P. V., Dinopoulos, H., Bone Tsiridis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((substitutes%3A+an+update.+Injury%5BTitle%5D)+AND+%2236%2C+Suppl+3.+S20-S27%22%5BJournal%5D)">substitutes: an update. Injury.</a> 36, Suppl 3. S20-S27. , (2005).</li>
<li>Jensen, S. S., Broggini, N., Hjorting-Hansen, E., Schenk, R., Bone Buser, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((healing+and+graft+resorption+of+autograft%2C+anorganic+bovine+bone+and+beta-tricalcium+phosphate.+A+histologic+and+histomorphometric+study+in+the+mandibles+of+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+oral+implants+research%22%5BJournal%5D)">healing and graft resorption of autograft, anorganic bovine bone and beta-tricalcium phosphate. A histologic and histomorphometric study in the mandibles of minipigs.</a> Clinical oral implants research. 17, 237-243 (2006).</li>
<li>Jensen, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+novel+biphasic+calcium+phosphate+in+standardized+bone+defects%3A+a+histologic+and+histomorphometric+study+in+the+mandibles+of+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+oral+implants+research%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a novel biphasic calcium phosphate in standardized bone defects: a histologic and histomorphometric study in the mandibles of minipigs.</a> Clinical oral implants research. 18, 752-760 (2007).</li>
<li>Grabowski, G., Bone Cornett, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((graft+and+bone+graft+substitutes+in+spine+surgery%3A+current+concepts+and+controversies%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Academy+of+Orthopaedic+Surgeons%22%5BJournal%5D)">graft and bone graft substitutes in spine surgery: current concepts and controversies.</a> The Journal of the American Academy of Orthopaedic Surgeons. 21, 51-60 (2013).</li>
<li>Khan, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+bone+grafting%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Academy+of+Orthopaedic+Surgeons%22%5BJournal%5D)">The biology of bone grafting.</a> The Journal of the American Academy of Orthopaedic Surgeons. 13, 77-86 (2005).</li>
<li>Bohr, H., Ravn, H. O., Werner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+osteogenic+effect+of+bone+transplants+in+rabbits.+The+Journal+of+bone+and+joint+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22British%22%5BJournal%5D)">The osteogenic effect of bone transplants in rabbits. The Journal of bone and joint surgery.</a> British. 50, 866-873 (1968).</li>
<li>Bone Urist, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((formation+by+autoinduction%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">formation by autoinduction.</a> Science. 150, 893-899 (1965).</li>
<li>Caballé-Serrano, J. D., Buser, D., Gruber, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+analysis+of+porcine+bone+conditioned+medium%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+journal+of+oral+%26+maxillofacial+implants%22%5BJournal%5D)">Proteomic analysis of porcine bone conditioned medium.</a> The International journal of oral & maxillofacial implants. , (2014).</li>
<li>Peng, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone-Conditioned+Medium+Inhibits+Osteogenic+and+Adipogenic+Differentiation+of+Mesenchymal+Cells+In+Vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+implant+dentistry+and+related+research%22%5BJournal%5D)">Bone-Conditioned Medium Inhibits Osteogenic and Adipogenic Differentiation of Mesenchymal Cells In Vitro.</a> Clinical implant dentistry and related research. , (2014).</li>
<li>Brolese, E., Buser, D., Kuchler, U., Schaller, B., Gruber, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+bone+chips+release+of+sclerostin+and+FGF-23+into+the+culture+medium%3A+an+in+vitro+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+oral+implants+research%22%5BJournal%5D)">Human bone chips release of sclerostin and FGF-23 into the culture medium: an in vitro pilot study.</a> Clinical oral implants research. , (2014).</li>
<li>Caballé-Serrano, J., Bosshardt, D. D., Gargallo-Albiol, J., Buser, D., Bone Gruber, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((conditioned+medium+enhances+osteoclastogenesis+in+murine+bone+marrow+cultures.+Clin+Oral+Impl+Res%3B+in%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Oral+Maxillofac+Surg%22%5BJournal%5D)">conditioned medium enhances osteoclastogenesis in murine bone marrow cultures. Clin Oral Impl Res; in.</a> Int J Oral Maxillofac Surg. , (2015).</li>
<li>Zimmermann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone-conditioned+medium+changes+gene+expression+in+bone-derived+fibroblasts%29%5BTitle%5D)+AND+%22IJOMI+accepted%22%5BJournal%5D)">Bone-conditioned medium changes gene expression in bone-derived fibroblasts).</a> IJOMI accepted. , (2014).</li>
<li>Fulzele, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelopoiesis+is+regulated+by+osteocytes+through+Gsalpha-dependent+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Myelopoiesis is regulated by osteocytes through Gsalpha-dependent signaling.</a> Blood. 121, 930-939 (2013).</li>
<li>Becerra, J., Andrades, J. A., Ertl, D. C., Sorgente, N., Nimni, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demineralized+bone+matrix+mediates+differentiation+of+bone+marrow+stromal+cells+in+vitro%3A+effect+of+age+of+cell+donor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of%22%5BJournal%5D)">Demineralized bone matrix mediates differentiation of bone marrow stromal cells in vitro: effect of age of cell donor.</a> Journal of. 11, 1703-1714 (1996).</li>
<li>Kupcova Skalnikova,, H, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+techniques+for+characterisation+of+mesenchymal+stem+cell+secretome%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Proteomic techniques for characterisation of mesenchymal stem cell secretome.</a> Biochimie. , (2013).</li>
<li>Romanello, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblastic+cell+secretome%3A+A+novel+role+for+progranulin+during+risedronate+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Osteoblastic cell secretome: A novel role for progranulin during risedronate treatment.</a> , Bone. (2013).</li>
<li>Schuldt Filho,, G, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+medium+of+demineralized+bone+matrix+activates+TGF-%CE%B2+signaling+pathways+in+mesenchymal+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cranio+Maxill+Surg%22%5BJournal%5D)">Conditioned medium of demineralized bone matrix activates TGF-β signaling pathways in mesenchymal cells in vitro.</a> J Cranio Maxill Surg. , (2015).</li>
<li>Buser, D., Chen, S. T., Weber, H. P., Belser, U. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+implant+placement+following+single-tooth+extraction+in+the+esthetic+zone%3A+biologic+rationale+and+surgical+procedures%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+journal+of+periodontics+%26+restorative+dentistry%22%5BJournal%5D)">Early implant placement following single-tooth extraction in the esthetic zone: biologic rationale and surgical procedures).</a> The International journal of periodontics & restorative dentistry. 28, 441-451 (2008).</li>
<li>Stoecklin-Wasmer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absorbable+collagen+membranes+for+periodontal+regeneration%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+dental+research%22%5BJournal%5D)">Absorbable collagen membranes for periodontal regeneration: a systematic review.</a> Journal of dental research. 92, progress. 773-781 (2013).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar. Jordi Caballé-Serrano recibió una beca de la Fundación de Investigación Dental y Educación, Basilea, Suiza.

Bone medio acondicionado refleja la actividad liberada de injertos óseos durante las primeras etapas de la regeneración ósea. El protocolo se describe aquí puede adaptarse para estudiar la respuesta de diferentes tipos de células implicadas en la regeneración ósea. Además, el protocolo se puede utilizar para preparar el medio de rellenos óseos o hueso procesado condicionado. Los métodos son fáciles de realizar y se basan en un concepto simple: los factores liberados de varios hueso nativo y procesados. La comprensión de...

El hueso autólogo es ampliamente utilizado para cerrar defectos que se produjeron como consecuencia de la malformación, la cirugía de resección, la cirugía reconstructiva trauma, y antes de la colocación del implante 1,2. La comprensión de los principios biológicos de cómo injertos óseos apoyan el proceso de consolidación del injerto no sólo es clave para entender por qué los autoinjertos son considerados como el estándar de oro en la cirugía reconstructiva, también es biónico para la mejora del diseño de los sustitutos óseos 3. Sin embargo, la consolidación del injerto es más rápido con hueso autólogo en comparación con sustitutos óseos 4,5. Por lo tanto, es imperativo para revelar los mecanismos moleculares y celulares que hacen hueso autólogo tan eficaz para apoyar la regeneración ósea. Hay tres características de libros de texto de autoinjertos que se consideran para apoyar el proceso de consolidación 6,7. En primer hueso, autólogo es osteoconductiva, proporcionar orientación para el hueso de nueva formación para creceren el defecto. En segundo lugar, el hueso autólogo es osteogénico, lo que significa que contiene células mesenquimales que pueden diferenciarse en osteoblastos 8. Hueso Tercero, autólogo es osteoinductivo como factores de crecimiento, como las proteínas morfogenéticas óseas sepultados en la matriz pueden iniciar el proceso de endocondral o incluso la formación de hueso intramembranosa 9. Hay otro aspecto: astillas de hueso recién preparados tienen una función paracrina sobre la base de las observaciones in vitro con &quot;medio hueso acondicionado&quot; 10-15. También el impacto de mielopoyesis debe mencionarse 16. Un término similar &quot;medio de matriz ósea desmineralizada acondicionado&quot; ya fue acuñado en 1996 y es compatible con el concepto general de una función paracrina del hueso, incluso cuando procesada por desmineralización 17. Para nuestros propósitos, BCM puede prepararse a partir de cerdo fresca mandíbulas 10,11. Análisis proteómico de BCM revelaron la composición compleja, incluyendo hecho de crecimientoors y componentes de la matriz extracelular 10, que también se extiende el conocimiento existente sobre el proteasoma de toda ósea 18,19. Por lo tanto, BCM debe reflejar la actividad de lanzamiento de varias modificaciones de injertos óseos in vitro. ¿Qué ocurre cuando las células mesenquimales, por ejemplo los aislados de virutas de hueso o de tejido blando oral, están expuestos a BCM? In vitro, BCM reduce osteogénico y la diferenciación adipogénica, y provoca un fuerte aumento de la expresión de IL11 11. Genoma amplia microarrays reveló más genes que se expresó diferencialmente en las células mesenquimales en respuesta a BCM. Entre estos genes son adrenomedulina (ADM), IL11, IL33, NADPH oxidasa 4 (NOX4), proteoglicanos 4 (PRG4 o lubricina) y pentraxina 3 (PTX3) 15. BCM obtenido a partir de astillas de hueso en autoclave no pudo cambiar la expresión de los genes respectivos 14. BCM de astillas de hueso que se sometieron a la pasteurización y la congelación fue capaz decambiar la expresión del gen 14. Medio de la matriz ósea desmineralizada (DBM-CM) También acondicionado cambia la expresión de TGF-β genes regulados 20. Curiosamente, las membranas de barrera de colágeno utilizados para proteger los chips de hueso a partir del tejido blando circundante 21,22, adsorbidos aquellas partes de BCM que son responsables de los cambios en la expresión génica 23. Investigación BCM se puede extender a otros tipos de células que participan en la regeneración ósea, tales como los osteoclastos de resorción ósea y células endoteliales, para nombrar unos pocos. En general, los datos se acumulan in vitro proporcionan la base científica para el diseño de un estudio preclínico. El presente protocolo es doble: Primero, muestra cómo preparar BCM. En segundo lugar, muestra cómo probar su actividad biológica basado en células mesenquimales in vitro.

<table><tbody><tr><td>Mandíbulas de cerdo</td><td>Raspador de huesos de bucher</td><td></td><td></td>local</tr><tr><td></td><td>Hu-Friedy PPBUSE2</td><td>/36</td><td></td></tr><tr><td>Antibióticos & Antimicotics</td><td>All life Technologies</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>Membranas de colágeno (Bio-Gide)</td><td>Geistlich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fetal Calf Serum</td><td>Invitrogen Corporation</td><td>16030074</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen Corporation</td><td>21885-025</td><td></td></tr><tr><td> Kit de aislamiento de ARN de alta pureza</td><td>Roche</td><td>11828665001</td><td></td></tr><tr><td>Transcriptor First Kit de síntesis de ADNc Roche</td><td></td><td>4379012001</td><td></td></tr><tr><td>Primers</td><td>Microsynth</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SYBR Verde (para Q-RT-PCR)Roche</td><td></td> <td>4673484001</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Roche</td><td>11666789001</td><td></td></tr></tbody></table>

bone medium acondicionado: preparación y bioensayo

Bone Conditioned Medium: Preparation and Bioassay

Injertos óseos autólogos son ampliamente utilizados en la cirugía oral y maxilofacial, ortopedia y traumatología. Injertos óseos autólogos no sólo reemplazan el hueso faltante, también apoyan el complejo proceso de regeneración ósea. Este comportamiento favorable de los autoinjertos se atribuye a las tres características: osteoconductividad, osteogenicidad y osteoinductividad. Sin embargo, hay otro aspecto: Bone injertos de liberar una gran variedad de moléculas, incluyendo factores de crecimiento, que pueden dirigirse a las células mesenquimales implicadas en la regeneración ósea. Las propiedades paracrinos de injertos óseos se pueden estudiar in vitro mediante el uso de medio hueso acondicionado (BCM). Aquí presentamos un protocolo sobre cómo prepararse medio hueso acondicionado de hueso cortical cerdo nativo, y el hueso que sufrió el procesamiento térmico o desmineralización. Las células pueden ser expuestos directamente a BCM o sembradas en biomateriales, tales como membranas de colágeno, previamente remojados con BCM. Damos ejemplos para in vitro bioassays con células mesenquimales en la expresión de genes regulados TGF-β. Los protocolos presentados deben animar a revelar aún más los efectos paracrinos de injertos óseos durante la regeneración ósea y abrir un camino para la investigación traslacional en el amplio campo de la cirugía reconstructiva.

Bone Medium acondicionado se preparó a partir de astillas de hueso porcino frescas. Visión general del proceso para preparar BCM y usar biomateriales en combinación con BCM se muestra en la Figura 1 y la Figura 2 respectivamente. Durante la preparación del BCM, es importante para obtener grandes astillas de hueso con movimientos largos como movimientos cortos o muy pequeñas astillas de hueso puede afectar a la calidad del BCM final. Calidad de BCM se puede controlar mediante el análisis...

Se describe aquí cómo preparar medio hueso acondicionado (BCM) y probar su actividad in vitro.

Bone Medium acondicionado: Preparación y Bioensayo

Autologous bone grafts are widely used in oral and maxillofacial surgery, orthopedics, and traumatology. Autologous bone grafts not only replace missing ...

El objetivo general de este video es describir cómo preparar un medio condicionado óseo y probar su actividad in vitro. Esto se logra recolectando primero astillas de hueso de la mandíbula de un cerdo con un raspador de huesos. El segundo paso es tratar térmicamente, desmineralizar o no hacer nada con las astillas de hueso antes de incubarlas en medio de cultivo durante 24 horas.A continuación, se recoge el medio condicionado óseo que contiene todos los factores liberados por las virutas óseas. El paso final es estimular las células con el medio condicionado óseo o preincubar un biomaterial con el medio condicionado óseo y las células semilla en él después del período de incubación. En última instancia, la PCR cuantitativa en tiempo real se utiliza para mostrar los cambios en la expresión génica de las células después del tratamiento.La utilización de injertos óseos autólogos solos o en combinación con otros biomateriales estimula la regeneración ósea en los defectos óseos periimplantarios y, por lo tanto, garantiza buenos resultados a largo plazo. Este video presenta un bioensayo in vitro, que es útil para determinar la respuesta genética de las células masivas a las biomoléculas

bone-conditioned-medium-preparation-and-bioassay

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Este video muestra la evaluación de múltiples activaciones de caspasas en macrófagos derivados de la médula ósea a través de la estimulación con el virus de la influenza. Tras la lisis de macrófagos, la inactivación térmica del lisado y la centrifugación, se recogen caspasas intracelulares para su posterior análisis inmunológico.

Evaluación de la activación de múltiples caspasas en macrófagos

Este video demuestra la producción de medio condicionado por oligodendrocitos (OCM) a partir de células del linaje de oligodendrocitos estresándolas para mejorar su liberación molecular en el medio. Este medio, que es rico en factores de crecimiento, citocinas y otras moléculas bioactivas, se puede agregar a los cultivos de neuronas para obtener información sobre el impacto de los factores secretados por oligodendrocitos en la fisiología y la conectividad neuronal.

Un método para generar medio condicionado por oligodendrocitos

La placa de piso es una estructura fundamental de las neuronas en desarrollo de la médula espinal, que proporcionan señales difusibles a progenitores y diferenciadoras. Se describe un método para producir suelo-placa de medio condicionado, para aplicarlo al tejido de la médula espinal fresco, y para evaluar las consecuencias de las proteínas de interés por la bioquímica.

Cultura de tejido aislado de la placa de piso y Producción de medio acondicionado para evaluar las propiedades funcionales de piso Señales Plate-lanzado

Este manuscrito describe un sistema modelo ex vivo compuesto por medios condicionados por órganos derivados del ganglio linfático, hueso, pulmón y cerebro de ratones. Este sistema modelo se puede utilizar para identificar y estudiar los factores solubles derivados de órganos y sus efectos sobre el tropismo de órganos y el comportamiento metastásico de las células cancerosas.

Generación de medios y aplicaciones acondicionado de órganos para el estudio de las influencias específicas de órganos en el seno cáncer metastásico Comportamiento

El número de nuevos biomateriales ingeniería para reparar las lesiones del hueso grande está en continua expansión con el objetivo de acelerar la cicatrización ósea y superar las complicaciones asociadas con el trasplante de hueso. Aquí, presentamos una estrategia multidisciplinaria para las pruebas de biocompatibilidad preclínico de Biomateriales para la reparación de hueso.

Perfil de compatibilidad biológica de Biomateriales para regeneración ósea

Este protocolo presenta un ensayo de captación de aminoácidos radiomarcado, que es útil para evaluar el consumo de aminoácidos en células primarias o en huesos aislados.

Evaluación del consumo de aminoácidos en células óseas cultivadas y tallos óseos aislados

El ensayo de flujo metabólico celular en tiempo real mide la tasa de consumo de oxígeno y la tasa de acidificación extracelular, que corresponde a la producción mitocondrial y glicolítica de trifosfato de adenosina, utilizando sensores de pH y oxígeno. El manuscrito explica un método para comprender el estado energético de los osteoblastos y la caracterización e interpretación del estado bioenergético celular.

Uso del analizador de flujo metabólico celular en tiempo real para monitorear la bioenergética de osteoblastos

Este protocolo describe un método integral para evaluar la activación de caspasas (caspasa-1, caspasa-3, caspasa-7, caspasa-8, caspasa-9 y caspasa-11) en respuesta a modelos de infección, insultos estériles y cáncer tanto in vitro como in vivo (en ratones) para determinar el inicio de vías de muerte celular, como piroptosis, apoptosis, necroptosis y PANoptosis.

Evaluación de la activación de la caspasa para evaluar la muerte celular inmune innata

Presentamos un protocolo de dos pasos para el aislamiento de mitocondrias de alta calidad que es compatible con el descubrimiento y cuantificación de proteínas a escala de proteoma. Nuestro protocolo no requiere ingeniería genética y, por lo tanto, es adecuado para estudiar las mitocondrias de cualquier célula y tejido primario.

Aislamiento de dos pasos sin etiquetas de las mitocondrias para mejorar el descubrimiento y la cuantificación de proteínas

Este video describe un método para la purificación de Wolbachia pipientis de una línea celular Anopheles gambiae y el cultivo de la endosimbionte en medio libre de células. Un ensayo de viabilidad de la bacteria se demuestra.

El mantenimiento de Wolbachia en medio libre de células

Aprende a preparar medio condicionado por hueso y evaluar su actividad biológica in vitro. Este método utiliza fragmentos de mandíbula porcina para estudiar la respuesta celular mediante PCR en tiempo real.

Bone Medium acondicionado: Preparación y Bioensayo

Explorar más videos