Name: Construcción de base de células fluorescentes de neurotransmisores (Engineered Reporteros CNiFERs) para la detección óptica de los neurotransmisores En Vivo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 48 s
Description: Aprende a construir CNiFERs con células HEK293 para detectar neurotransmisores en vivo mediante imagen fluorescente. Esta técnica permite monitorear dinámicas neuronales en tiempo real.

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Agradecemos a B. Conklin (Universidad de California, San Francisco) para proporcionar los qi5 G y G QS5 ADNc, A. Schweitzer para obtener ayuda con la electrónica, N. Taylor para obtener ayuda con el análisis de clones, Ian y Robert Rifkin Glaaser para la corrección de pruebas y Olivier Griesbeck para TN-XXL. Este trabajo fue apoyado por becas de investigación a través del Instituto Nacional sobre Abuso de Drogas (NIDA) (DA029706; DA037170), el Instituto Nacional de Imágenes Biomédicas y Bioingeniería (NIBIB) (EB003832), Hoffman-La Roche (88610A) y el &quot;Neurociencia relacionados con las drogas de abuso beca de formación &quot;a través de NIDA (DA007315).

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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

La creación de CNiFERs proporciona una estrategia novedosa y única para medir ópticamente liberación de neurotransmisores en el cerebro in vivo. CNiFERs son ideales para la medición de la liberación extrasináptico, es decir, la conducción volumen, por neurotransmisores. Es importante destacar que cada CNiFER posee las propiedades de la GPCR nativo, proporcionando una medición óptica fisiológica de los cambios en los niveles de neurotransmisores en el cerebro. Hasta la fecha, se han creado CNiFERs para ...

Para comprender completamente cómo se comunican las neuronas en el cerebro, es necesario disponer de un método para medir la liberación de neurotransmisores en vivo. Existen varias técnicas bien establecidas para la medición de los neurotransmisores en vivo. Una técnica comúnmente usada es de microdiálisis, en el que se inserta una cánula en el cerebro y un pequeño volumen de líquido cefalorraquídeo se recoge y se analizó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento y detección electroquímica 1. La microdiálisis tiene una resolución espacial del orden de unos pocos diámetros de la sonda, por ejemplo, ~ 0,5 mm para una microsonda de 200 m de diámetro. La resolución temporal de esta técnica, sin embargo, es lento debido a los intervalos de muestreo que típicamente duran ~ 5 min o más 1. Por otra parte, los análisis no se realizan en tiempo real. Otra técnica es escaneado rápido voltametría cíclica (FSCV), que utiliza una sonda de fibra de carbono que se inserta en el cerebro. FSCV tiene una excelente tempresolución por vía oral (por debajo del segundo), alta sensibilidad (nanomolar), y la resolución espacial con diámetro de la sonda de 5 a 30 micras. Sin embargo, FSCV está limitada a los transmisores que producen una oxidación característica y el perfil de reducción con el voltaje en una sonda potenciométrica de carbono 2. Una tercera técnica para medir los neurotransmisores es directamente a través de neurotransmisores codificado genéticamente biosensores (NT) 3. Con este método, se crea una proteína de fusión que contiene un dominio de unión a ligando para un transmisor acoplado a una transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET) par de fluoróforos con base 4 o una GFP permutado 5. A diferencia de los dos métodos anteriores, estos biosensores están genéticamente codificados y expresados ​​en la superficie de una célula huésped, tal como una neurona, a través de la producción de animales transgénicos o de forma aguda con el uso de agentes virales para infectar las células. Hasta la fecha, los biosensores codificados genéticamente sólo se han desarrollado para detecting glutamato y GABA 3-5. Limitaciones con estas técnicas han sido la baja sensibilidad, en el rango nM, y la incapacidad para ampliar la detección al gran número de transmisores, por ejemplo, neurotransmisores clásicos, neuropéptidos y neuromoduladores, que señalan a través de receptores acoplados a proteínas G (GPCRs). De hecho, hay cerca de 800 GPCRs en el genoma humano. Para hacer frente a estas deficiencias, hemos desarrollado una herramienta innovadora para la liberación medida ópticamente de cualquier neurotransmisor que las señales a través de un GPCR. (Reporteros ingeniería neurotransmisor fluorescentes basado en células) CNiFERs son células HEK293 clonales ingeniería genética para expresar un GPCR específico que, cuando se estimula, provoca un aumento de intracelular [Ca 2 +] que es detectada por un sensor de Ca2 + a base de FRET codificado genéticamente, TN-XXL. Por lo tanto, CNiFERs transformada de unión en un cambio en la fluorescencia, proporcionando un r óptica en tiempo real directa y receptor neurotransmisoread de salida de la actividad del neurotransmisor local. Mediante la utilización del receptor nativo para un neurotransmisor determinado, CNiFERs retienen la especificidad química, la afinidad y la dinámica temporal de los receptores expresados ​​de forma endógena. Hasta la fecha, hemos creado tres tipos de CNiFERs, una para la detección de la acetilcolina mediante el receptor M1, uno para la detección de la dopamina usando el receptor D2, y uno para la detección de norepinefrina mediante el 6,7 receptor a1a. La tecnología CNiFER es fácilmente ampliable y escalable, por lo que es susceptible de cualquier tipo de GPCR. En este artículo JoVe, describimos e ilustramos la metodología para diseñar, realizar, y la prueba en vivo CNiFERs para cualquier aplicación.

<table><tbody><tr><td>pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro&nbsp;</td><td>System Biosciences</td><td>CD510B-1</td><td>Clonación: para la generación de lentivirus</td></tr><tr><td>12 x 75 *BD Falcon Tubo de ensayo de polipropileno de alta claridad de fondo redondo</td><td>BD Biosciences</td><td>352063</td><td>FACS</td></tr><tr><td>BD 40 mmm Filtros de células Falcon</td><td>BD Biosciences</td><td>352340</td><td>FACS</td></tr><tr><td>0.05% Tripsina EDTA&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>25200056</td><td>FACS</td></tr><tr><td>96 Placa de pocillos, fondo plano, transparente&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>3596</td><td>FACS</td></tr><tr><td>96 placas de cultivo celular de pocillos&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>CLS3997</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Optilux fondo transparente negro&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>3603</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Puntas de pipeta Flexstation</td><td>Molecular Devices</td><td>9000-0911</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Cloruro de acetilcolina&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2661</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Norepinefrina&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7256</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Clorhidrato de dopamina&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PHR1090</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>GABA&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2129</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Histamine&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H7125</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Glutamato&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>49621</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Epinefrina&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4642</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Somatostatin&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1763</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>5HT&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H9523</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>VIP&nbsp;</td><td>Alpha Diagnostics Inc.&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>SP-69627</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Orexin A</td><td>Alpha Diagnostics Inc.&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>12-p-01</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Sustancia P&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6883</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Adenosina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4036</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Melatonina&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5250C</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Lector de placas de fluorescencia y software</td><td>Molecular Devices</td><td>Flexstation 3</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>&nbsp; DMEM (alto contenido de glucosa) con Glutamax&nbsp; &nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>10569-010 Cultivo de</td><td>tejidos</td></tr><tr><td>&nbsp; Suero fetal bovino</td><td>Life Technologies</td><td>10082-139 Cultivo de</td><td>tejidos</td></tr><tr><td>&nbsp; Pluma/estreptococo&nbsp; antibióticos</td><td>Life Technologies</td><td>15140-122 Cultivo de</td><td>tejidos</td></tr><tr><td>&nbsp; Puromicina&nbsp; &nbsp;</td><td>InvivoGen</td><td>ant-pr-1 Cultivo de</td><td>tejidos</td></tr><tr><td>&nbsp; Fibronectina&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0895</td><td>Cultivo</td></tr><tr><td>de tejidos CoolCell LX Caja de congelación celular de tasa controlada sin alcohol</td><td>Bioexpress</td><td>D-3508)</td><td>Pegamento</td>de</tr><tr><td>cianoacrilato para cultivo de tejidos&nbsp;</td><td>Loctite</td><td>Loctite nº 495</td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>película de parafina plástica&nbsp;</td><td>VWR</td><td>Parafilm&reg;</td><td>Cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Nanoinyector</td><td>Drummond</td><td>3-000-204</td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Electrodos de vidrio</td><td>Drummond</td><td>3-000-203G</td> cirugía <td>e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>taladro de mano</td><td>OSADA</td><td>Exl-M40</td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Rebabas para taladro</td><td>Fine Scientific</td><td>19007-05; 19007-07)</td><td>cirugía e inyección</td></tr> <tr><td>estereotáxicaBaño esterilizador</td><td>FST</td><td>18000-45, Esterilizador de perlas</td><td>calientes Cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Cámara/mascarilla de isoflurano</td><td>Highland Medical Equipment</td><td>564-0427, HME 109 Máquina anestésica de mesa con vaporizador de isoflurano, caudalímetro de O2, válvula de banda; 564-0852, cámara de inducción 16X7X7.5cm</td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>visor 3D con brazo</td><td>Cirugía Zeiss</td><td></td><td>e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>cirugía de luz</td><td></td><td></td> de fibra óptica <td>e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Betadine&nbsp;</td><td></td><td></td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>70 % (v/v) de alcohol</td><td></td><td></td> isopropílico <td>para cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Povidona-Yodo Almohadillas de preparación</td><td>dynarex</td><td>1108</td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>NaCl 0,9% (inyección, USP, 918610)</td><td></td><td></td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>CYCLOSPORINE (INJECTION, USP)</td><td></td><td></td><td>cirugía y inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Buprenex (inyección) buprenorfina (0,03 &mu; g por g roedor)</td><td>Cirugía Sigma-Aldrich</td><td></td><td>e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Pomada oftálmica&nbsp;</td><td>Akorn</td><td>NDC 17478-235-35</td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Surgifoam</td><td>Ethicon</td><td></td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Grip cemento dental</td><td>Dentsply</td><td>#675571,</td><td>cirugía 675572 e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Instant SuperGlue&nbsp;</td><td>NDindustries</td><td></td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>LOCTITE 4041</td><td></td><td></td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>METABOND</td><td>C& B</td><td></td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>n.º 0 cubreobjetos</td><td>Cirugía de Fisher</td><td></td><td>e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>marco estereotáxico&nbsp;</td><td>Cirugía Kopf</td><td></td><td>e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Sonda rectal y almohadilla térmica</td><td>FHC</td><td>40-90-8D, controlador de temperatura de CC,40-90-2-06, 6.5X9.5cm almohadilla térmica40-90-5D-02, termistor rectal</td><td>Cirugía de sonda e inyección estereotáxica</td></tr> placa de <tr><td>pruebas óptica para imágenes</td><td>Cirugía de Thorlabs</td><td></td><td>e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Aceite mineral</td><td>Fisher</td><td>S55667</td><td>cirugía y inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Kwik-Cast (Elastómero de silicona)</td><td>World Precision Instruments</td><td></td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Sutura&nbsp; &nbsp;</td><td>Ethicon</td><td>18' ', 1667, 4-0</td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Tijeras</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>91500-09, 15018-10</td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Forcepts</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>11252-30; #55, 11295-51; Grafe, 11050-10</td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Estudiante Halsted-Mosquito Hemostáticos</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>91308-12</td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Kit cauterizador de vasos pequeños Fine Scientific</td><td>Tools</td><td>18000-00</td> cirugía <td>e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Esterilizadores de perlas calientes</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>18000-45</td><td>cirugía e inyección</td></tr> <tr><td>estereotáxicaEstuche de instrumentos con esterilla de silicona</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>20311-21</td> cirugía <td>e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Recipientes de esterilización de plástico con estera de silicona</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>20810-01</td><td>cirugía e inyección estereotáxica</td></tr><tr><td>Osciloscopio de fluorescencia de platina fija 2P para in vivo</td><td>Olympus</td><td>FV1200 MPE</td><td>Imagen in vivo</td></tr><tr><td>Láser</td> <td>multifotónicoSpectraPhysics</td><td>Mai Tai DeepSee Imágenes</td><td>in vivo</td></tr><tr><td>Láser verde</td><td>Olympus</td><td>473 nm Láser</td><td>in vivo</td></tr><tr><td>Imágenes XY Base traslacional Scientifica</td><td></td><td>MMBP</td><td>Imágenes in vivo</td></tr><tr><td>FRET Cubo de filtro para YFP y CFP</td><td>Olympus</td><td></td><td>Imágenes in vivo</td></tr><tr><td>Objetivos de inmersión en agua 10x y 40x</td><td></td> Mesa <td>de aire para imágenes in vivo</td>Olympus <td></td></tr><tr><td></td><td>Imágenes in vivo</td>de <td>Newport</td><td></td></tr><tr><td>Jaula hermética a medida</td><td>Thorlab</td><td></td><td>in vivo</td></tr></tbody></table>

construcción de base de células fluorescentes de neurotransmisores (engineered reporteros cnifers) para la detección óptica de los neurotransmisores<em&gt; en vivo</em

Construction of Cell-based Neurotransmitter Fluorescent Engineered Reporters (CNiFERs) for Optical Detection of Neurotransmitters In Vivo

Reporteros de ingeniería a base de células fluorescentes (neurotransmisor CNiFERs) proporcionan una nueva herramienta para los neurocientíficos para detectar ópticamente la liberación de neurotransmisores en el cerebro in vivo. Un CNiFER específica se crea a partir de una célula de riñón embrionario humano que expresa de forma estable una proteína G-receptor acoplado específica, que se acopla a G q / 11 proteínas G, y una basada en FRET Ca 2+ -detector, TN-XXL. La activación del receptor conduce a un aumento en la señal de FRET. CNiFERs tienen sensibilidad nM y una respuesta temporal de segundo porque un clon CNiFER utiliza el receptor nativo para un neurotransmisor particular, por ejemplo, D2R para la dopamina. CNiFERs se implantan directamente en el cerebro, lo que les permite detectar la liberación de neurotransmisores con una resolución espacial de menos de un centenar de micras, lo que es ideal para medir la transmisión de volumen in vivo. CNiFERs también se puede utilizar para detectar otros fármacos para el potencial de reactividad cruzada en vivo. Recientemente hemos ampliado la familia de CNiFERs para incluir los GPCR que se acoplan a G i / o proteínas G. CNiFERs están disponibles para la detección de la acetilcolina (ACh), dopamina (DA) y norepinefrina (NE). Teniendo en cuenta que cualquier GPCR puede ser utilizado para crear una novela CNiFER y que hay aproximadamente 800 GPCRs en el genoma humano, como se describe aquí el procedimiento general para diseñar, realizar, y probar cualquier tipo de CNiFER.

A CNiFER se deriva de una célula de riñón embrionario humano (HEK293) que está diseñado para expresar de forma estable al menos dos proteínas: una proteína G específica de receptores acoplados (GPCR) y un codificado genéticamente sensor [2 + Ca], TN-XXL. TN-XXL se somete a la transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET) entre las proteínas fluorescentes cian y amarillo, eCFP y citrino, respectivamente, en respuesta a los iones Ca2 + <su...

Se presenta un protocolo para crear reporteros de ingeniería a base de células fluorescentes (neurotransmisor CNiFERs) para la detección óptica de la liberación de neurotransmisores volumétrica.

Construcción de base de células fluorescentes de neurotransmisores (Engineered Reporteros CNiFERs) para la detección óptica de los neurotransmisores<em&gt; En Vivo</em

Cell-based neurotransmitter fluorescent engineered reporters (CNiFERs) provide a new tool for neuroscientists to optically detect the release of ...

El objetivo general de este video es describir la metodología para la construcción y prueba de Sensores Fluorescentes Celulares de Neurotransmisores, o CNiFERs, que pueden utilizarse para monitorear ópticamente la liberación de neurotransmisores específicos in vivo. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en neurociencia sobre el momento y la liberación de neuromoduladores en el cerebro. La principal ventaja de esta técnica es que puede adaptarse para cualquier tipo de neurotransmisor o neuromodulador que actúe a través de GPCS.La demostración regional de este método es útil. La inyección in vivo y la posterior obtención de imágenes de los CNiFERs son técnicamente difíciles. Para comenzar este procedimiento, observe las células HEK293 que contienen el detector de calcio basado en el frente y la proteína G quimérica en un matraz T-25.A continuación, cultive las células en un incubador humedecido a 37 grados Celsius, con cinco por ciento de CO2, hasta alcanzar aproximadamente un 50 % de confluencia. Posteriormente, aspire el medio del frasco T-25. Añada dos mililitros de la mezcla de medio de lentivirus e incube el frasco T-25 a 37 grados Celsius, con 5 % de CO2.Al día s

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Neurociencia

Con el creciente interés en terapias con células madre, las técnicas de imagen molecular son ideales para el comportamiento de las células madre de seguimiento tras el trasplante. Genes luciferase reportero le han permitido no invasiva, la evaluación repetida de la supervivencia celular, la ubicación y la proliferación in vivo. Este vídeo demuestra cómo realizar el seguimiento proliferación de células madre en un ratón vivo.

In vitro e in vivo de imágenes de bioluminiscencia gen reportero de células estaminales embrionarias humanas

Hemos desarrollado una nueva técnica para cuantificar los cambios de los receptores nicotínicos de acetilcolina en las regiones subcelulares de los subtipos específicos de neuronas del sistema nervioso central para comprender mejor los mecanismos de la adicción a la nicotina mediante el uso de una combinación de enfoques que incluyen el etiquetado proteína fluorescente del receptor con el golpe-en el enfoque y espectral imagen confocal.

Imagen confocal espectral de marcado con fluorescencia receptores nicotínicos en Knock-en ratones con administración crónica de nicotina

Fuente: Lacin, E., et al. Construcción de reporteros de ingeniería fluorescente de neurotransmisores basados en células (CNiFER) para la detección óptica de neurotransmisores in vivo. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra una técnica para obtener imágenes de la liberación de neurotransmisores in vivo utilizando reporteros de ingeniería fluorescente de neurotransmisores basados en células (CNiFER), células reporteras especializadas preinyectadas en la corteza del ratón. Colocado bajo un...

Obtención de imágenes de liberación de neurotransmisores mediante reporteros de ingeniería fluorescente de neurotransmisores basados en células

Con su pequeño cuerpo transparente y bien documentado neuroanatomía y una serie de técnicas genéticas susceptibles y...

Formación de imágenes in vivo de calcio neuronal en C. elegans

Aquí presentamos una novela Ca 2+ -Imagenología enfoque utilizando un reportero bioluminiscente. Este método utiliza una construcción GFP-aequorina fundida que se une a Ca 2+ y emite luz, eliminando la necesidad de excitación luz. Significativamente este método permite la proyección de imagen continua de largo, el acceso a las estructuras cerebrales profundas y alta resolución temporal.

En Vivo Cerebral Funcional Imaging Enfoque Basado en calcio bioluminiscente Indicador GFP-aequorina

Aquí presentamos un protocolo de calcio imagen señalización en poblaciones individuales de tipos de células en la Unión neuromuscular murino.

Ex Vivo Proyección de imagen del calcio celular específicos de señalización en la sinapsis tripartita del diafragma del ratón

En este informe, describimos un protocolo simple para estudiar el crecimiento de neurita en neuronas corticales de rata embrionaria mediante la co-transfección con EGFP y la proteína de interés.

Un ensayo mejorado basado en proteínas de fluorescencia verde para el estudio del crecimiento de neurita en las neuronas primarias

Presentamos un protocolo de dos partes que combina imágenes fluorescentes de calcio con hibridación in situ, permitiendo al experimentador correlacionar patrones de actividad de calcio con perfiles de expresión génica a nivel de una sola célula.

Imágenes fluorescentes de calcio y posterior hibridación in situ para la caracterización de precursores neuronales en Xenopus laevis

Se describen dos métodos relacionados para visualizar los eventos subcelulares necesarios para la transmisión sináptica. Estos protocolos permiten el monitoreo en tiempo real de la dinámica de la afluencia de calcio presináptico y la fusión de la membrana de vesícula sináptica utilizando imágenes de células vivas de neuronas cultivadas in vitro .

Medición fluorescente en tiempo real de las funciones sinápticas en modelos de esclerosis lateral amiotrófica

Utilizando ratones fluorescentes transgénicos, se describen protocolos detallados para evaluar el transporte axonal in vivo de endosomas de señalización y mitocondrias dentro de los axones motores y sensoriales del nervio ciático intacto en animales vivos.

Ampliación del kit de herramientas para imágenes in vivo del transporte axonal

Los métodos actuales describen un enfoque no ratiométrico para imágenes de calcio subcompartimentales de alta resolución in vivo en Caenorhabditis elegans utilizando indicadores de calcio codificados genéticamente fácilmente disponibles.

Imágenes subcelulares del manejo neuronal del calcio in vivo

Aprende a construir CNiFERs con células HEK293 para detectar neurotransmisores en vivo mediante imagen fluorescente. Esta técnica permite monitorear dinámicas neuronales en tiempo real.

Construcción de base de células fluorescentes de neurotransmisores (Engineered Reporteros CNiFERs) para la detección óptica de los neurotransmisores En Vivo (Video) | JoVE Journal

Construcción de base de células fluorescentes de neurotransmisores (Engineered Reporteros CNiFERs) para la detección óptica de los neurotransmisores

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