Control óptico de una proteína neuronal utilizando un ácido Unnatural Amino genéticamente codificados en las neuronas

El objetivo general de este procedimiento es controlar ópticamente la función de una proteína neuronal utilizando un aminoácido no natural codificado genéticamente en las neuronas. Este método puede ayudar a responder preguntas clave sobre la contribución de una proteína neuronal específica a la señalización neuronal en la función cerebral con resolución espacio-temporal. La principal ventaja de esta técnica es que tiene el potencial de ser aplicada a varias proteínas neuronales para lograr la regulación óptica de varios procesos neuronales.

Comience este procedimiento colocando las neuronas del hipocampo en cubreobjetos en una placa de 24 pocillos con 500 microlitros de medio de crecimiento, después de filtrar a través de una malla de nailon de 40 micrómetros. Después de eso, incubar el cultivo neuronal a 35 grados centígrados en una incubadora humidificada con un cinco por ciento de dióxido de carbono y un 95 por ciento de aire durante 2 a 3 semanas. El día de la transfección, prepare una solución fresca de cloruro de calcio 2,5 molares en agua bidestilada y fíltrela estérilmente con un filtro de 0,22 micrómetros.