Name: Desarrollo de un modelo de colitis impulsado por el antígeno para el Estudio de la presentación de antígenos por células presentadoras de antígenos a las células T (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Aprenda a desarrollar un modelo de colitis impulsado por antígeno para estudiar la presentación de antígenos por células presentadoras a células T CD4 en la lámina propia intestinal. Este método permite investigar las interacciones inmunes durante la enfermedad inflamatoria intestinal.

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Los autores no tienen nada que revelar.

Al igual que con cualquier otro modelo, el modelo de colitis antígeno impulsado descrito anteriormente puede presentar algunos problemas que el investigador realiza la técnica debe tener en cuenta. Cuando se inyecta el AT-II / rojo + T CD4 + CD62L + células en los ejércitos, el investigador debe ser muy suave y cuidado de insertar la aguja en la cavidad peritoneal. El no hacerlo puede resultar en el desgarramiento del intestino del ratón, que podría conducir a la muerte, o una administra...

El intestino es la mayor superficie del cuerpo que está expuesta al ambiente externo. matrices extensas de microbios residentes colonizan el intestino humano para formar la microbiota intestinal (o microflora). Se estima que esto constar de hasta 100 billones de células microbianas y constituye uno de los hábitats bacterianas más densamente poblados conocidos en la biología 1-3. En el GIT bacterias colonizan un nicho intestinal donde sobreviven y se multiplican 4. A cambio, la microbiota dota a la máquina con características funcionales adicionales no codificadas en su genoma 1. Por ejemplo, la microbiota estimula la proliferación de las células epiteliales, produce vitaminas que alberga no puede producir por sí mismos, regula el metabolismo y protege contra patógenos 4-6. Dada esta relación beneficiosa, algunos autores han sugerido que los humanos son &quot;súper-organismos&quot; o &quot;holobionts&quot; que son una mezcla de genes bacterianos y humanos 7,8. Dado el impacto beneficioso de la microbiota en el host (humana), el sistema inmune intestinal necesita para tolerar los microbios comensales para permitir su existencia en la luz, sino también matar a los patógenos que invaden desde el lado luminal 9-11. El sistema inmune intestinal ha desarrollado mecanismos para distinguir entre los microbios inofensivos luminales y potencialmente dañinos; sin embargo, estos mecanismos no están todavía bien entendidas 12. El mantenimiento de la integridad intestinal requiere una homeostasis inmune estrechamente regulado para mantener el equilibrio entre la tolerancia y la inmunidad 13. Un desequilibrio en la homeostasis inmune contribuye a la inducción de enfermedades intestinales tales como la enfermedad inflamatoria del intestino (IBD) 3,14. Hay dos tipos principales de IBD: la enfermedad de Crohn (CD) y la colitis ulcerosa (UC). Los pacientes con estas enfermedades por lo general sufren de sangrado rectal, diarrea y dolor abdominal 15,16. La causa de la EII es todavíadesconocido, pero una combinación de factores genéticos, factores ambientales y las respuestas inmunes dysregulated podría ser el evento clave para el desarrollo de la enfermedad 15. Los modelos animales de EII se han utilizado durante más de 50 años. En las últimas décadas nuevos sistemas modelo de EII se han desarrollado para probar las diversas hipótesis relativa a la patogénesis de la EII 17,18. El modelo mejor caracterizado de colitis crónica es el modelo de transferencia de células T que induce la interrupción de la homeostasis de células T 19,20. Este modelo implica la transferencia de células T vírgenes de ratones inmunocompetentes en huéspedes que carecen de T y células B (como RAG - / - y ratones SCID) 16,21. El desarrollo de la enfermedad en este modelo se supervisa durante 3-10 semanas mediante la evaluación de la presencia de diarrea, la reducción de la actividad física, y la pérdida de peso corporal. Esto se llama así el síndrome de desgaste 16. En comparación con los ratones sano el tejido del colon de los ejércitos trasplantados es Thicker, más corto y más pesado 16. Usando el modelo de transferencia de células T, es posible comprender cómo los diferentes poblaciones de células T pueden contribuir a la patogénesis de la EII 22. El modelo de transferencia de células T no analiza las interacciones entre APCs y células T en el proceso de la enfermedad de una manera específica de antígeno. Se ha demostrado que la interacción entre las células mieloides y células linfoides podría ser responsable del desarrollo de la inflamación intestinal 23. Aunque no se han aclarado muchos aspectos de la EII, los eventos iniciales que conducen al desarrollo de la enfermedad todavía tienen que ser claramente entendido. Se ha demostrado que, en ausencia de colitis transferencia microbiota no se puede establecer 24. Recientemente, varias teorías sugieren que la EII podría ser el resultado de una respuesta inmunitaria contra bacterias comensales 25. también han propuesto Autores que las bacterias comensales son esenciales para inducir la inflamación en el intestino distal26. En libre de gérmenes (GF), los animales del sistema inmunitario intestinal es generalmente deteriorada 27,28, pero una colonización de estos ratones con una mezcla de específico libres de patógenos bacterias resultados en el desarrollo del sistema inmunitario intestinal totalmente competente 29. Por lo tanto, la microbiota parece ser un elemento clave en la patogénesis de la EII, ya sea como un mecanismo que predispone a o protege contra el desarrollo de la inflamación intestinal 30,31. Las teorías actuales sugieren que la EII es el resultado de un desequilibrio microbiano, llamada disbiosis, en pacientes predispuestos genéticamente 32, pero no es claro aún si el disbiosis es la causa o la consecuencia de la enfermedad 12. Teniendo en cuenta el papel de los microorganismos en el desarrollo de la EII, en experimentos in vitro mostraron que las células T CD4 + se pueden activar por APCs pulsadas con bacterias intestinales 33,34. Por otra parte, se ha demostrado que los antígenos dediferentes especies de bacterias comensales, tales como E. coli, Bacteroides, Eubacterium y Proteus, son capaces de activar células T CD4 + 35. Esto indica que la presentación de antígenos bacterianos a las células T es de importancia para el desarrollo de la EII. Para reducir la complejidad de múltiples antígenos derivados por la microflora en el proceso de la enfermedad, una cepa de E. coli ha sido creado que produce el antígeno OVA. La colitis transferencia fue inducida por la inyección de células T específicos de OVA en RAG - / - animales colonizados con OVA-expresión de E. coli. Este modelo se basa en la evidencia reciente sugiere que la CX 3 CR1 + parlamentarios, un subconjunto de células importante en la lámina propia del colon (CLP) 36, están interactuando con las células T CD4 + durante la transferencia de la colitis 37. Los diputados de la muestra La luz intestinal para el antígeno de partículas, tales como bacterias, utilizando sus dendritas 36, 38,39. Estudios previosdemostró que los parlamentarios también puede tomar hasta antígenos solubles, tales como OVA, introducidos en el lumen intestinal 40,41. Dada la abundancia de CX 3 CR1 + parlamentarios en el CLP, es posible que estas células pueden degustar las bacterias luminales e interactuar con las células T CD4. Confocal de imágenes de los ratones trasplantados con células T CD4 + específicos de OVA colonizados con E. coli CFP-OVA, muestran que CX 3 CR1 + MPs están en contacto con las células OT-II T CD4 + durante el desarrollo de colitis antígeno impulsado. Este modelo permite el estudio del proceso de la presentación del antígeno entre APCs intestinales y células T específicas únicamente para determinados bacterias que expresan el antígeno en la luz intestinal.

<table><tbody><tr><td>LB Broth, Miller (Luria-Bertani)</td><td>Difco</td><td>244620</td><td></td></tr><tr><td>Batido rotativo</td><td>Reiss Laborbedarf e. K.</td><td>Modelo 3020 GFL</td><td></td></tr><tr><td>2 mm gap couvettes&nbsp;</td><td>Peqlab Biotechnologie GmbH</td><td>71-2020</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5516-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Gene Pulsser Xcell system&nbsp;</td><td>BioRad Laboratories GmbH</td><td>1652660</td><td></td></tr><tr><td>LB Agar, Miller (Luria-Bertani)</td><td>Difco</td><td>244510</td><td></td></tr><tr><td>Ampicilina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9393-5G</td><td></td></tr><tr><td>SOC Medio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1797-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Kit de aislamiento de plásmidos de alta pureza</td><td>Roche 11754777001</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Agarosa</td><td>Carl Roth GmbH & Co</td><td>3810.1</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9884-100G</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5941</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético glacial</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>537020&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Cámara de gel&nbsp;</td><td>PEQLAB Biotechnology GmbH</td><td>40-0708</td><td></td></tr><tr><td>Colorante de carga</td><td>Thermo Fisher</td><td>R0611</td><td></td></tr><tr><td>GeneRuler 1 kb DNA Ladder&nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>SM0312</td><td></td></tr><tr><td>Solución de bromuro de etidio</td><td>Carl Roth GmbH & Co. KG</td><td>2218.3</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de documentación fotográfica&nbsp;</td><td>Decon Science Tech GmbH</td><td>DeVision G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Secuenciación de ADN&nbsp;</td><td>MWG-Biotech GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Biochrom</td><td>L182-50</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio fluorescente&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>HBO 100</td><td></td></tr><tr><td>mini-PROTEAN Tetra System</td><td>Bio-Rad Laboratories GmbH</td><td>1658005</td><td></td></tr><tr><td>PageRuler Escalera de proteínas preteñida&nbsp;</td><td>Fermentas, St. Leon-Rot, Alemania</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IstanBlue Solution</td><td>Expedeon, Cambridgeshire, Reino Unido</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Membrana de nitrocelulosa&nbsp;</td><td>Macherey-Nagel GmbH & Co. KG</td><td>741280</td><td></td></tr><tr><td>Electro secante&nbsp;</td><td>Biometra GmbH</td><td>846-015-600</td><td></td></tr><tr><td>Albúminas séricas bovinas (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6003-25G</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-ovoalbúmina&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab181688</td><td></td></tr><tr><td>Anti-conejo IgG&nbsp; HRP</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0545&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Pierce ECL Plus Western Blotting Substrate</td><td>Pierce Biotechnology, Thermo Fischer Scientific Inc</td><td>32132</td><td></td></tr><tr><td>Forene</td><td>Abbott</td><td>2594.00.00</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>10500-064</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Cell Strainers</td><td>Fischer Scientific&nbsp;</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de amonio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>254134-5G</td><td></td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10708976001</td><td></td></tr><tr><td>CD4+ CD62 L+ Kit de aislamiento T&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-227&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Columnas MACS LS&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS MS Columnas&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>MidiMACS Separador</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-302</td><td></td></tr><tr><td>MiniMACS Separador</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de alimentación 20G</td><td>SouthPointe Surgical Supply, Inc</td><td>FN-7903</td><td></td></tr><tr><td>Solución de formalina, neutro tamponado, 10%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Parafina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1496904</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxilina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H9627</td><td></td></tr><tr><td>Eosina Y</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>230251&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Colagenasa tipo VIII</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C-2139</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) medio</td><td>AppliChem</td><td>A2044, 9050</td><td></td></tr><tr><td>Azida sódica</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>438456</td><td></td></tr><tr><td>ratón BD Fc Block</td><td>BD Pharmingen</td><td>553141</td><td></td></tr><tr><td>Unión de mAb conjugada con FITC V&szlig; 5.1, 5.2&nbsp;</td><td>BD Pharmingen</td><td>553189</td><td></td></tr> unión <tr><td>de mAb conjugado con APC CD4 GK1.5&nbsp;</td><td>eBioscience</td><td>17-0041-83</td><td></td></tr><tr><td>FACS Calibur&nbsp;</td><td>Software BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FCS Express V3 Microscopio</td> confocal de barrido <td>DeNovo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Meta&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>LSM 710&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Estación de trabajo Zeiss</td><td>Zeiss</td><td>LSM 7</td><td></td></tr><tr><td>Software Zeiss ZEM&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>v4.2.0.121</td><td></td></tr><tr><td>Placas inmunológicas Maxisorp&nbsp;</td><td>NUNC, Roskilde</td><td>442404</td><td></td></tr><tr><td>Estreptavidina fosfatasa alcalina conjugada</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>016-050-084</td><td></td></tr><tr><td>Sustrato de fosfatasa alcalina 4-Nitrofenil fosfato sal disódica hexahidratado</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71768-5G</td><td></td></tr><tr><td>mAb R4-6A2</td><td>BD Biosciences</td><td>551216</td><td></td></tr><tr><td>mAb XMG1.2&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>554410</td><td></td></tr><tr><td>Lector de microplacas-ELISA TECAN</td> Software EasyWin <td>Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DNase I recombinante</td><td></td><td>4536282001</td><td></td></tr></tbody></table>

desarrollo de un modelo de colitis impulsado por el antígeno para el estudio de la presentación de antígenos por células presentadoras de antígenos a las células t

Development of an Antigen-driven Colitis Model to Study Presentation of Antigens by Antigen Presenting Cells to T Cells

La enfermedad inflamatoria intestinal (EII) es una inflamación crónica que afecta al tracto gastrointestinal (TGI). Una de las mejores formas de estudiar los mecanismos inmunológicos implicados durante la enfermedad es el modelo de transferencia de células T de la colitis. En este modelo, los ratones inmunodeficientes (receptores de RAG-/-) se reconstituyen con células T CD4+ vírgenes de huéspedes sanos de tipo salvaje.
Este modelo permite examinar los eventos inmunológicos más tempranos que conducen a la enfermedad y la inflamación crónica, cuando la inflamación intestinal se perpetúa pero no depende de un antígeno definido. Para estudiar el papel potencial de las células presentadoras de antígenos (APC) en el proceso de la enfermedad, es útil contar con un modelo de enfermedad impulsado por antígenos, en el que un antígeno derivado de un comensal definido conduce a la colitis. Por lo tanto, se ha desarrollado un modelo de colitis impulsada por antígenos. En este modelo, las células T CD4+ OT-II, que solo pueden reconocer epítopos específicos en la proteína OVA, se transfieren a huéspedes RAG-/- desafiados con E. coli que expresa CFP-OVA. Este modelo permite examinar las interacciones entre las APC y las células T en la lámina propia.

Para establecer un modelo de colitis antígeno impulsado por una E. coli cepa ha sido construido que contiene un plásmido en el que el gen de la PPC se fusiona a la secuencia codificante para la proteína ovoalbúmina de pollo y la construcción de fusión se expresa bajo el control del promotor constitutivo fuerte P hiper (Figura 1A). Microscopía fluorescente muestra que la E. recombinante coli pCFP-OVA, pero no el pa...

En este modelo de colitis impulsada por antígenos, las células T CD4+ OT-II que expresan una proteína fluorescente roja se transfirieron adoptivamente a ratones RAG-/- que expresan una proteína fluorescente verde en fagocitos mononucleares (MP). Los huéspedes fueron desafiados con Escherichia coli (E. coli) que expresa la proteína ovoalbúmina (OVA) fusionada con una proteína cian fluorescente (CFP).

Desarrollo de un modelo de colitis impulsado por el antígeno para el Estudio de la presentación de antígenos por células presentadoras de antígenos a las células T

Inflammatory bowel disease (IBD) is a chronic inflammation which affects the gastrointestinal tract (GIT). One of the best ways to study the immunological ...

El objetivo general de este modelo de colitis inducida por antígeno es determinar si los fagocitos mononucleares positivos para CX3CR1 interactúan con y activan linfocitos T CD4 positivos durante la colitis específica para antígeno, y si esta expansión de linfocitos T efector dependiente de fagocitos mononucleares ocurre dentro de la lámina propia intestinal. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la enfermedad inflamatoria intestinal, como qué tipos de interacción ocurren entre las células presentadoras de antígenos y los linfocitos T efector en la lámina propia del colon. La principal ventaja de esta técnica es que permite el estudio de la interacción de las células inmunitarias y de los elementos que conducen a la patogenicidad de la enfermedad inflamatoria intestinal.Este método utiliza el modelo de colitis por transferencia de linfocitos T, en el cual linfocitos T CD4 vírgenes específicos para un antígeno, que expresan fluorescencia roja, se transfieren a un huésped inmunodeficiente que expresa la proteína verde fluorescente en sus células mononucleares. Tras la transferencia celular, se administra por vía oral, mediante cánula, bacterias que expresan un antígeno con fluorescencia azul. Los eventos inmunitarios que ocurren en la lámina propia intestinal de los huéspedes pueden monitorizarse en diversas etapas del desarrollo de la enfermedad.Utilice tijeras de disección para abrir longitudinalmente el colon y lave el tejido en una placa de Petri que contenga 25 mililitros de PBS para eliminar cualquier resto y moco. Corte el colon en fragmentos de cinco a ocho milímetros y coloque los fragmentos resultantes en 20 mililitros de DPBS fresco sin calcio ni magnesio, suplementado con 10 milimolares de HEPES y 5 milimolares de EDTA. Vortexee el tubo con la muestra durante 30 segundos a velocidad máxima.A continuación, incubar a 37 grados Celsius durante diez minutos con agitación suave para eliminar el epitelio. Al final de la incubación, vortexear nuevamente durante 30 segundos. Luego, desechar el sobrenadante que contiene las células epiteliales.Transfiera los fragmentos de tejido a un nuevo tubo que contenga 20 mililitros de tampón de PBS, HEPES y EDTA fresco, y repita la incubación con los pasos de vortexado antes y después. Después de la tercera repetición, todas las células epiteliales se han eliminado y el sobrenadante está claro. Lave suavemente los fragmentos de tejido con PBS para eliminar cualquier célula epitelial residual.Corte los fragmentos de tejido en trozos de dos por dos milímetros y transfiera los trozos a diez mililitros de medio RPI, suplementado con 0,5 miligramos por mililitro de colagenasa tipo ocho y diez unidades por mililitro de DNAsa uno. Vortexee las muestras durante 30 segundos. A continuación, incube los trozos de tejido a 37 grados Celsius con agitación durante 30 a 35 minutos y vortexee el tubo cada cinco minutos durante la incubación.Una vez que el tejido esté digerido, filtre la suspensión resultante a través de un filtro celular de 70 micrones hacia un tubo cónico de 50 mililitros. Lave el filtro celular una vez y centrifugue la suspensión de células individuales. Finalmente, lave las células una vez con PBS y centrifugue.Luego, determine el número de células viables mediante la exclusión con azul de tripano. La proteína de ovoglobulina con proteína fluorescente cianada que produce E. coli activa la producción de interferón gamma en células OT-II in vitro, a diferencia de E.coli que expresan solo CFP. La imagen confocal tridimensional ex vivo del tejido colónico de ratones transgénicos que expresan la proteína verde fluorescente, alimentados con ovo de e. coli PCFP, demuestra la presencia de bacterias que expresan la proteína fluorescente dentro de las criptas colónicas cerca de las células epiteliales intestinales y co-localizadas con los fagocitos intestinales del hospedador.En animales OT-II rojos, las células T positivas para CD4 se caracterizan por su coexpresión de la proteína fluorescente roja y del V beta cinco punto uno. Cuando se desafían con e. coli PCFP ova, ratones transgénicos deficientes en linfocitos BNT que expresan la proteína fluorescente verde y que han sido trasplantados adoptivamente con células T positivas para CD4 OT-II rojas y positivas para el ligando CD62 pierden rápidamente peso corporal y desarrollan signos clínicos de colitis.Siete días después de la transferencia celular, solo unos pocos fagocitos del hospedador han tomado muestras de ova de e. coli PCFP y no se detectan células OT-II rojas positivas. Catorce días después de la transferencia celular, los fagocitos del hospedador que han tomado muestras del e.Los ovos de PCFP de e. coli se encuentran en estrecha proximidad con las células OT-II positivas rojas transferidas adoptivamente. A los 21 días después de la transferencia celular, un gran número de células del hospedador han tomado contacto con los ovos de PCFP de e. coli y con las células donantes OT-II positivas rojas, que se encuentran dispersas a lo largo de la lámina propia colónica y están en estrecho contacto con los fagocitos intestinales del hospedador.Una vez dominada, esta técnica puede completarse en cuatro horas si se realiza adecuadamente. Tras seguir este procedimiento, se pueden llevar a cabo otros métodos, como la tinción de linfocitos intestinales y el análisis de citocinas en suero, para responder preguntas adicionales sobre el estado de activación de las células T CD4 y para confirmar la gravedad de la colitis. Tras cada avance, esta técnica allana el camino para la investigación en el campo de la inmunología, permitiendo explorar los pequeños eventos que conducen a la enfermedad inflamatoria intestinal en el modelo murino.Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo aislar células inmunitarias de la lámina propia colónica para el análisis ex vivo posterior.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Aquí, le detallamos una metodología para el aislamiento rápido de las células dendríticas de ratones intestinales (DCS) y los macrófagos. Caracterización fenotípica de los países en desarrollo y los macrófagos intestinales se realiza utilizando varios colores, mientras que el flujo de análisis de citometría de enriquecimiento de bolas magnéticas seguido por la selección de células se utiliza para producir poblaciones de alta pureza para los estudios funcionales.

Aislamiento y caracterización de las células dendríticas y los macrófagos del intestino delgado de ratón

Este video muestra una técnica para generar un modelo murino de colitis inducido químicamente, una enfermedad inflamatoria intestinal. Se permite que el ratón consuma una solución de sulfato de sodio de dextrano (DSS) durante un tiempo adecuado. Al consumirlo, el DSS daña la mucosa y la barrera de la capa epitelial en el colon, lo que permite que los microbios intestinales ingresen al tejido subyacente, donde son detectados por las células inmunitarias residentes para mediar una respuesta...

Una técnica para generar un modelo murino de colitis inducida por sodio con sulfato de dextrano

DNBS / TNBS colitis inducida ofrece un método alternativo y barato para estudiar la patobiología de la enfermedad inflamatoria del intestino. El protocolo descrito en este documento se describen la aplicación exitosa de DNBS para inducir la colitis en ratones y ratas y permite estudiar a fondo las respuestas intestinales mediados por el huésped.

Modelos DNBS / TNBS colitis: Proporcionar ideas sobre la enfermedad inflamatoria intestinal y efectos de la grasa en la dieta

Aquí, presentamos un protocolo para inducir inflamación colónica en ratones mediante la transferencia adoptiva de células Taltas CD4 + CD45RB singénicas a receptores deficientes de células T y B. Las características clínicas e histopatológicas imitan las enfermedades inflamatorias intestinales humanas. Este método permite estudiar el inicio de la inflamación colónica y la progresión de la enfermedad.

La inducción de la inflamación intestinal murino por transferencia adoptiva de Efector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Alta</sup&gt; T células en ratones inmunodeficientes

Existen distintos subconjuntos de células dendríticas como poblaciones raras en los órganos linfoides y, por lo tanto, son difíciles de aislar en número y pureza suficientes para los experimentos inmunológicos. Aquí describimos un método de alta eficiencia y alto rendimiento para el aislamiento de todos los principales subconjuntos actualmente conocidos de células dendríticas esplénicas de ratón.

Un método de rendimiento eficiente y de alta para el aislamiento de ratón subconjuntos de células dendríticas

Describimos aquí un modelo de ratón reportero transgénico para visualizar las células productoras de IL-22 dentro de diferentes tejidos de ratón. Este método se puede utilizar para rastrear la ubicación de otras citocinas o proteínas secretaria en el ratón.

La visualización de IL-22 que expresan linfocitos utilizando ratones Reporter

Murino colostomía distal proporciona un modelo murino para la colitis de la diversión humana, una colitis linfocítica predominante en el segmento de colon excluido de la corriente fecal.

Murino colostomía Distal, un modelo novedoso de desvío Colitis en ratones C57BL/6

El protocolo presenta un modelo murino completo validado inducido por TNBS de la enfermedad de Crohn y métodos para la visualización de receptores de estrógeno por inmunohistoquímica utilizando inmunofluorescencia de secciones de colon fijas en formalina incrustadas en parafina.

Visualización de receptores de estrógeno en colones de ratones con enfermedad de Crohn inducida por TNBS utilizando inmunofluorescencia

En este protocolo, se describe un modelo de colitis por transferencia adoptiva de células T específicas de antígeno de la microbiota intestinal. Las células T CD4+ se aíslan de ratones transgénicos CBir1 TCR. Estos son específicos para un antígeno inmunodominante de la microbiota intestinal CBir1 flagelina, que se transfiere a los ratones Rag1-/- receptores, lo que lleva a la inflamación intestinal.

Inducción de la inflamación intestinal por transferencia adoptiva de células T CD4+ transgénicas CBir1 TCR a ratones inmunodeficientes

Un nuevo método de CC independiente para la inducción y la expansión de células T específicas de antígeno se describe. HLA A2-Ig células antígeno artificial basada en la presentación (AAPC) se cargan con el HLA-A2 péptidos restringidos a expandirse de manera eficiente CTL del antígeno específico diverso. Esta tecnología tiene un gran potencial para el CTL basado inmunoterapia adoptiva.

HLA-Ig celdas en función de antígeno artificiales presentación para mejorar la eficiencia Ex vivo Ampliación de los Derechos Humanos CTL

Aprenda a desarrollar un modelo de colitis impulsado por antígeno para estudiar la presentación de antígenos por células presentadoras a células T CD4 en la lámina propia intestinal. Este método permite investigar las interacciones inmunes durante la enfermedad inflamatoria intestinal.

Desarrollo de un modelo de colitis impulsado por el antígeno para el Estudio de la presentación de antígenos por células presentadoras de antígenos a las células T (Video) | JoVE Journal

Desarrollo de un modelo de colitis impulsado por el antígeno para el Estudio de la presentación de antígenos por células presentadoras de antígenos a las células T

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