Nötr Kılcal kullanılarak monoklonal antikor izoformlannın Kapiler Elektroforez Ayırma

Günümüzde, kılcal hücre elektroforezi tekniği, monokolonal antikorlar gibi biyo-moleküllerin analizi için en kararlı ve hassas varlıklardan birini oluşturmaktadır. Ancak bu tekniğin başarılı bir şekilde uygulanması, numune ve sistem hazırlıkları sırasındaki kritik adımlarda analistin bilgi ve becerilerine bağlıdır. Bu eğitim, başarılı bir analizin nasıl yapılacağına, çözelti ve numunelerin hazırlanmasının gerçekten ayrıntılı bir şekilde açıklanmasına, kapiler elektroforez sisteminin hazırlanmasına, cihaz yönteminin kurulumuna ve veri kararı ve işlenmesine yöneliktir.

Genel olarak bu protokol, analitik kimya laboratuvarlarının hazırlanmasında görev alan personelin becerilerinin geliştirilmesi ve iyileştirilmesi için kullanılabilir. 100 mililette yüzde 0,05'lik bir nihai konsantrasyon elde etmek için HPMC miktarını tartın. HPMC bazik bir elastik polimer olduğundan, ilk adım olarak, kabı bir cam kabın içine dökün ve tozu ayırmak için yavaşça 80 mililitre su ekleyin.

Ardından, toz kalıntılarını gidermek için ıslatma tepsisini suyla durulayın. Kalan vekilleri normal şekilde ekleyin ve çözeltiyi karıştırın. PH değerini yüzde 50 asidik asit ile 4.8'e ayarlayın.

Ve çözeltinin beş dakika boyunca stabilize olmasına izin verin. Bundan sonra, PH'ı gerektiği gibi ayarlayın. 100 mililitrelik son hacmi oluşturmak için su ekleyin.

Hazırlanan KŞ çözeltisini nötrofilik bir zardan süzün ve bir cam şişeye dökün. Son olarak, cam şişeyi uygun şekilde etiketleyin ve buzdolabında saklayın. Numuneyi hazırlamak için, ilk adım olarak 1,5 mililitrelik bir tüpe 162 mikrolitre eser tampon çözeltisi ekleyin.

Daha sonra, mililitre başına 10 miligram konsantrasyonda önceden hazırlanmış bir harita örneğinden 18 mikrolitre ekleyin. Üçüncü adım olarak, 200 mikrolitrelik bir nihai numune hacmi elde etmek için önceden hazırlanmış yüzde bir histamin çözeltisinden 20 mikrolitre ekleyin. Bir sonraki adım, beş saniye boyunca bir numune hazırlayın.

Ve beş saniye santrifüjleyin. Numunenin toplam hacmini aspire edin. Ve herhangi bir kabarcık girmesini önlemek için yukarı doğru bir mikro şişeye dağıtın.

Son olarak, şişeyi kapatın ve buzdolabında saklayın. Güç düğmesine basarak CE cihazını kapatın. Ve ön kapıyı aç.

Arayüz bloğunun altına yeni bir hareketli mendil yerleştirin. Elektrotları bir yıkama şişesi kullanarak arayüz bloğundan suyla durulayın. Suyun deliklerden damlamasına izin verin ve arayüz bloğunu iyice kurulayın.

Mendili kullanarak elektrotlardaki fazla suyu dikkatlice çıkarın. Bu işlem sırasında elektrotların içinde olmamaya dikkat edin. Mendili numune tutma sisteminden çıkarın.

Numune tepsilerinin yüzeyini yeni bir suyla temizleyin damphareket etmeyen mendil. Ve tampon tepsilerinin yüzeyi. Tampon tepsilerini yukarı kaydırın, numune tutma sistemini kaldırın ve mendili kullanarak yüzeylerini temizleyin.

Tampon tepsilerini tekrar yerlerine getirin. Bunlardan sonra arayüz bloğunu iyice temizleyin. Kelepçe çubuğunu ve UV lambası muhafazasını temizleyin.

Sonunda, kullanmadan önce sistemi denediğinizden emin olun. Açma kollarını bir yıkama şişesi kullanarak suyla durulayın. Tozu ve biriken tuzları temizlemek için yüzeylerini hareket etmeyen yeni bir mendille iyice temizleyin.

Son olarak, yüklemeden önce bunları denediğinizden emin olun. Fiber optik kablonun iki ucunu suyla nemlendirilmiş mikro fiber bezle temizleyin ve uçlar arasındaki ışık bölmesini onaylayın. Paketinden yeni bir nötr kılcal damar çıkarın.

Şimdi kılcal damarın koruyucu borusunun bir ucunu çalışma tezgahına götürün. Plastik boruyu açın ve düzeltin ve kılcal damarı borudan dikkatlice dışarı çekin. Aşağıdaki ölçüm işaretlerini içeren bir parça kağıdı tezgaha yapıştırın.

Kılcal pencereyi sıfır noktasına santimetre ölçüm işaretlerine aşağıdaki gibi hizalayın: Bundan sonra, kılcal uçları bantla tezgaha sabitleyin. Kılcal uçları ölçüm işaretlerinin iki milimetre dışında işaretleyin. Koruyucu kapağı pencereden en uzak kılcal uçtan kesin.

Ve kılcal damarın iç kaplamasında kalıcı hasarı önlemek için kılcal ucu suyla dolu bir CE şişesine daldırın. Kılcal damarı şişeden çıkarın ve bu ucu kartuşun çıkış tarafına dikkatlice yerleştirin. Kılcal damar diğer tarafta göründüğünde, kılcal pencere kartuş penceresine ortalanana kadar gerekli olanı aşağıdaki gibi çekin.

Bundan sonra, kartuşu çevirin ve diyafram tapasını kartuş penceresine takın ve yerine oturması için bastırın. Bu işlem sırasında kılcal pencereyi kırmamaya dikkat edin. Geniş ışık kaynağına maruz kaldığında ışığın pencereden geçtiğini onaylayın.

Kılcal boruyu, önceden monte edilmiş boru ile, vahşi olmayan ve o-ring ile önceden oluşturulmuş soğutma sıvısı borusuna sokun. Kılcal damar diğer tarafta görünene kadar kılcal damarı borunun içinden itin. Ardından, borunun ucunu kartuşun çıkış tarafına yerleştirin ve boru somunlarını sıkın.

Kılcal giriş ucunu kartuşun giriş tarafına yerleştirin. Kılcal damar diğer tarafta göründüğünde, gerektiği gibi çekin. Bunu takiben, borunun ucunu kartuşun giriş tarafına yerleştirin ve boru somunlarını sıkın.

Koruyucu kapağı pencereye en yakın kılcal uçta kesin. Ve hücre tutucu klipsleri kılcal uçların üzerine takın ve aşağıdaki gibi yerine oturması için bastırın. Kılcal uzatılmış plakalar üzerindeki referans çizgilerinin altında kılcal uçları kesin.

Kılcal uçları bir büyüteçle kontrol ettiğinizden emin olun. Kılcal uçlar pürüzsüz değilse, cleven taşını kullanarak parlatın. Diyafram o-ringini diyafram mavisi deliğine yerleştirin.

Ve o-ring yerleştirme aletini kullanarak dikkatlice yerleştirin. Son olarak, suyla doldurulmuş CE şişelerini kartuş kutusuna yerleştirin ve kartuşu, kılcal uçları şişelere yerleştirilmiş olarak hemen kutuya yerleştirin ve buzdolabında saklayın. Pipet hacmini ayarlayın.

Tepsi A1, B1 ve F6 koordinatlarını tampon girişine doğru hacimde su ekleyin. Ve tampon çıkış tepsisine A1, B1, C1, E6 ve F6 koordinatları. Tampon giriş tepsisi koordinatları C0.1 ve E1'ya normal HCl 6 ekleyin. Ve BGE'yi arabellek giriş tepsisi koordinatları D1 ve E6'ya ekleyin. Ve tampon çıkış tepsisi koordinatı D1'e. Son olarak, tampon giriş ve çıkış tepsilerindeki tüm CE şişelerini kapatın. İşlem sırasında, karbon sızıntısını önlemek için flakon kapaklarını ıslatmaktan kaçının. CE cihazının ön kapısını açın.

İlk olarak, UV dedektörünü takın ve vidayı saat yönünde çevirerek sabitleyin. İç kapıyı kaldırın ve açma kollarını arayüz bloğuna bastırarak takın. Fiber optik kabloyu kelepçeye yerleştirin ve saat yönünde döndürün.

Ve diğer ucunu dedektöre bağlayın. Fiber optik kabloyu dikkatli kullanın, çünkü bükülme kırılmasına neden olabilir. Numune tepsisini numune tutma sistemine yerleştirin ve yerine oturtun.

Aynı prosedürü izleyerek, tampon tepsilerini numune tutma sistemine yerleştirin. Kelepçe çubuğunu kaldırın ve kılcal kartuşu arayüz bloğuna yerleştirin. cl'ye basınamp her iki uçtaki çubuk ve saat yönünde çevirerek düğmeleri sıkın.

İç kapıyı kapatın ve ön kapıyı kapatın. Son olarak, güç düğmesine basarak CE cihazını açın. Koşullandırma aracı yöntemini oluşturun.

Voltaj, kartuş ve sampdepolama sıcaklığı ve tetikleme ayarları dahil olmak üzere başlangıç koşul personelindeki parametreleri yapılandırın. Edinme dalga boyu olarak iki bin on dört seçin. Parametreleri zamanla programlanmış hücrelere yapılandırarak cihaz tarafından gerçekleştirilecek eylemleri bildirin.

Her durulama, enjeksiyon ve ayırma adımı için özel ayarlar dahil. Koşullandırma çalıştırma ve kapatma cihazı yöntemlerini oluşturmak için bu prosedürü uygulayın. Bir sonraki adım, yeni bir dizi oluşturmaktır.

Şartlandırma yöntemini kullanarak kılcal damarı şartlandırma için programlayın. Kılcal damar ilk kez kullanılıyorsa, dört tekrar programlayın. Aksi takdirde, iki tekrar programlayın.

Ardından, çalışma yöntemini kullanarak analiz edilecek numuneleri programlayın. Son olarak, kapatma yöntemini kullanarak kılcal damarı depolama için programlayın. Kılcal hücre elektroforezi analizi 30 dakika içinde tamamlanır.

İlk sonuç, adeque sistem performansının bir ölçüsü olarak histamin internalist standardına karşılık geldi. Bunu, ebaluadith monoklonal anthiberi'nin kendine özgü bazik, ana ve asidik buz formları takip eder. Tüm ayırma, yaklaşık 30 mikoamper civarında sabit bir akım altında çalışır.

Deneyi çalıştırdıktan sonra, ham verileri yakalama yazılımından dışa aktarın ve işlenmek üzere güçlendirme yazılımı aracılığıyla içe aktarın. Her bir buz formunun yüzde içeriği, elektrofarogram profilinin dikey damla çizgisi entegrasyonundan sonra elde edilir. Burada, kılcal hücre elektroforezi ile oluşturulan monoklonal aktivitelerin analizini yapmak için ayrıntılı bir adım adım kılavuzu temsil ettik.

Potansiyel sorunları azaltmak için çeşitli önerilerin yanı sıra, ek olarak mevcut protokol, iletkenlik ve PH parametrelerindeki kısa değişiklikler göz önüne alındığında diğer proteinlerin analizi için kolayca özelleştirilebilme avantajını sunar.