Aislamiento de proteínas de filamento intermedio de múltiples tejidos de ratón para estudiar las modificaciones postraduccionales asociadas al envejecimiento

El objetivo general de este procedimiento bioquímico es aislar fracciones enriquecidas con filamentos intermedios de múltiples tejidos de ratón con el fin de estudiar las modificaciones postraduccionales de las diferentes proteínas de filamentos intermedios específicos de tejidos. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de los filamentos intermedios, como por ejemplo, cómo se ve afectada la función y la regulación de estas importantes proteínas del citoesqueleto que protegen contra el estrés durante el envejecimiento de los mamíferos. La principal ventaja de esta técnica es que la incorporación de un paso automatizado de lisis de tejidos permite a los usuarios procesar múltiples muestras de tejido de forma rápida y eficiente.

Para comenzar, agregue un mililitro de tampón Triton X-100 helado complementado con inhibidores de la proteasa en un homogeneizador de tubo de vidrio y colóquelo sobre hielo. Retire un pequeño trozo de tejido del almacenamiento de nitrógeno líquido y colóquelo directamente en el homogeneizador de vidrio. Luego, mientras mantiene el homogeneizador y la muestra en hielo en todo momento, use aproximadamente 50 golpes de una pastilla de politetrafluoroetileno para homogeneizar la muestra y minimizar la formación de burbujas.