Protocolo de diferenciación cerebelosa 3D optimizada con modificación 2D opcional
December 9th, 2017
Describimos un medio de protocolo para hPSCs, utilizando la diferenciación 3D simplificada y reducida de factores de crecimiento, capaces de generar agregados de células con estructuras neuroepiteliales temprano y el positivos para cerebelosa asociada a marcadores, así como un opcional Modificación 2D para diferenciar las células como una monocapa para generar neuronas funcionales.
El objetivo general de estos cultivos de diferenciación es generar linajes celulares cerebelosos en entornos 2D o 3D. Estos métodos pueden ayudar a responder preguntas básicas sobre los nuevos desarrollos o los mecanismos de las enfermedades subyacentes a los trastornos cerebrales infantiles utilizando células madre derivadas de pacientes. La principal ventaja de esta técnica es que tiene una puesta en marcha y mantenimiento sencillos con pocos factores y que se puede utilizar como base para probar protocolos neuronales más complejos. La demostradora del procedimiento estará a cargo de Lisa, una técnica de mi laboratorio. Para establecer la diferenciación con el método modificado, el método G de paso de hPSC transfiere el volumen requerido de medio de mantenimiento neural a un tubo estéril y complementa con 4 nanogramos por mililitro de FGF2 y un inhibidor de roca de diez micromolares. Luego, mantenga el tubo mediano a temperatura ambiente o en baño de agua a 37
Información general
Este artículo presenta un protocolo simplificado de diferenciación 3D para células madre pluripotentes humanas (hPSCs) que utiliza medio definido y factores de crecimiento reducidos. El protocolo es capaz de generar agregados celulares con estructuras neuroepiteliales tempranas y marcadores asociados con el desarrollo cerebeloso.
Componentes clave del estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia
- Biología de células madre
- Diferenciación celular
Fundamentos
- Entender las líneas celulares del cerebelo es crucial para estudiar trastornos cerebrales infantiles.
- Las células madre derivadas de pacientes pueden proporcionar información sobre los mecanismos de las enfermedades.
- El protocolo tiene como objetivo simplificar el proceso de diferenciación.
- Permite tanto entornos de cultivo 2D como 3D.
Propósito del estudio
- Desarrollar un método sencillo para generar tipos de células cerebelosas.
- Facilitar la investigación sobre trastornos cerebrales infantiles.
- Proporcionar una base para protocolos de diferenciación neural más complejos.
Métodos utilizados
- Utilización de un medio de mantenimiento neural definido.
- Suplemento con FGF2 e inhibidor de ROCK.
- Cultivo de hPSCs en formatos 2D y 3D.
- Monitoreo de la diferenciación hacia linajes cerebelosos.
Principales resultados
- Generación exitosa de agregados celulares con estructuras neuroepiteliales.
- Expresión de marcadores asociados al cerebelo en células diferenciadas.
- Demostración de la simplicidad y efectividad del protocolo.
- Potencial para una mayor aplicación en estudios neurales complejos.
Conclusiones
- El protocolo proporciona un método confiable para la diferenciación cerebelosa.
- Se puede adaptar para diversas aplicaciones de investigación en neurociencia.
- Estudios futuros pueden construir sobre esta base para investigaciones neurales avanzadas.
Preguntas frecuentes
Chapters in this video
0:05
Title
0:44
3D "Organoid" Differentiation
4:32
Alternative 2D Differentiation Culture
8:28
Results: 3D Products Exhibit Markers and Structures of Early Neuroepithelium, and 2D Products Exhibit Cerebellar Markers and Functional Neuronal Activity
9:48
Conclusion
