Name: Colección de tejido adiposo ratón y procesamiento para el análisis de ARN (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 13 s
Description: Aprende a colectar tejido adiposo blanco de ratón y extraer ARN de alta calidad para estudios de expresión génica en metabolismo y biología molecular. Este método permite investigar modificaciones genéticas.

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Este trabajo fue apoyado por Canadá de Diabetes.

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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Siguiente HF-dieta alimentación, encontraron a ratones obesos tengan más cuerpo y peso del tejido adiposo blanco en comparación con ratones alimentados con una dieta de N. RNA extraído con fenol solución rindió muestras de buena pureza. La leptina es un adipoquinas producidas principalmente por el tejido adiposo y se sabe que correlacionan positivamente con la masa grasa16. Como se esperaba, la expresión de mRNA de leptina aumentó en ratones obesos en concomitancia con su masa grasa.
<p class=...

La obesidad es una epidemia en todo el mundo que puede conducir a complicaciones tales como tipo 2 diabetes1. Modelos animales obesos y modificados genéticamente inducida por la dieta se utilizan con frecuencia para la investigación en la obesidad y sus complicaciones asociadas. Tradicionalmente, el tejido adiposo blanco es conocido como un compartimiento de almacenamiento para el exceso de energía y sobre todo se compone de lípidos y tejido adiposo marrón convierte la energía en calor2,3. Tejido adiposo es dinámico y ampliará y encogen dependiendo de muchos factores como el consumo de alimentos y actividad física. Por lo tanto, para determinar los factores que contribuyen a estos cambios, manejo y colección adecuada de tejido adiposo son necesarios4.
Entre los blancos de los tejidos adiposos, está generalmente aceptado que los depósitos de grasa subcutáneos y viscerales tienen diferentes propiedades tales como la localización anatómica y función2,5. En consecuencia, para evitar resultados contradictorios o gran variabilidad, atención debe ser tomado para evitar la contaminación cruzada entre los diferentes depósitos de grasa al recoger cojines gordos.
Por otra parte, hay tres grandes retos cuando aislar RNA o proteína del tejido adiposo de ratones blancos. En primer lugar, recogiendo los cojines gordos en ratones obesos no es tarea fácil como la frontera que separa los diferentes depósitos de grasa blanco no siempre es clara, a diferencia de otros órganos como los riñones y el corazón6. En segundo lugar, debido al contenido alto de lípidos del tejido adiposo, durante el aislamiento de ARN o proteína, una capa de lípidos flota en la parte superior y evita el acceso directo a la muestra. En tercer lugar, a diferencia del tejido adiposo marrón u otros tejidos, tejido adiposo blanco tiene mucho menor contenido de RNA y proteínas y esto es de gran preocupación al usar ratones jóvenes, ratones alimentaron con una dieta normal (N) y ratones que tienen masas de grasa bajo (es decir, KO modelos, tratamiento con fármacos, ejercen entrenamiento, etcetera.) 7 , 8.
Por lo tanto, es fundamental elegir el método adecuado para aislar el ARN del tejido adiposo. Métodos alternativos a la extracción de fenol/cloroformo son kits comerciales. Se basan típicamente en un paso de extracción de fenol inicial, seguido de purificación de RNA en una columna9. Sin embargo, los kits son típicamente más caros y dan muestras de menor rendimiento, mientras que la calidad del RNA puede ser variable pero mucho menos tiempo. Sin embargo, una de las mayores ventajas para la extracción del fenol/cloroformo solución descrita aquí es la posibilidad de aislar RNA, DNA y proteína de una sola muestra de10. Desde cojines gordos ratones son generalmente pequeñas y dan pequeñas cantidades de RNA y proteínas (especialmente en modelos de ratón magro), estos protocolos maximizan los datos que uno puede salir de una pequeña muestra.
El objetivo de este trabajo es describir detalladamente un método para garantizar la obtención adecuada de depósitos de tejido adiposo blanco tres ratones, así como cantidad y calidad de aislamiento de RNA. RNA obtenido siguiendo este protocolo se puede utilizar para realizar análisis PCR en tiempo real. Este protocolo no está diseñado para el aislamiento de RNA de adipocitos cultivados de primarias.

<table><tbody><tr><td>1 mL de seringes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1X solución TE (10 mM de Tris-HCl y 1 mM de EDTA&bull; Na2. pH 8.0)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Agujas de 22 G Agujas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>de 26 G</td> Etanol <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>75%</td></tr><tr><td>Calentador de bloque (baño seco)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cloroformo</td><td>Sigma</td><td>C2432-500mL</td><td></td></tr><tr><td>dATP&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Termo científico</td><td>R0141</td><td></td></tr><tr><td>dCTP&nbsp; &nbsp;</td><td>Termo científico</td><td>R0151</td><td></td></tr><tr><td>dGTP&nbsp; &nbsp;</td><td>Thermo scientific</td><td>R0161</td><td></td></tr><tr><td>DNasa I (1 U/&micro; l)&nbsp;</td><td>Termo científico</td><td>EN0521</td><td></td></tr><tr><td>dTTP&nbsp;</td><td>Thermo scientific</td><td>R0171</td><td></td></tr><tr><td>Faststart Universal SYBR green Master (Rox)</td><td>Roche</td><td>4913922001</td><td></td></tr><tr><td>Faststart universal SYBR green master (Rox) colorante fluorescente&nbsp;</td><td>Roche</td><td>4913914001</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas de puntas</td><td></td><td></td><td></td>filtradas</tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Instrumentarium</td><td>HB275</td><td></td></tr> Martillo de <tr><td>gasa</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dieta</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>para roedores con alto contenido de grasa</td><td>Bio-Serv, Frenchtown, NJ</td><td>F3282</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol&nbsp;</td><td>Laboratoire MAT</td><td>IH-0101</td><td></td></tr><tr><td>Imprimación de PCR directa de leptina (5'-GGGCTTCACCACCATTGA-3') 10 uM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cebador de PCR inversa de leptina (5'-GGCTATCTGCAGCACATTTTG-3') 10 uM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nitrógeno</td><td></td><td></td><td></td>líquido</tr><tr><td>Máxima transcriptasa inversa (enzima y tampón 5x)</td><td>Thermo scientific</td><td>EP0742</td><td></td></tr><tr><td>Agua nanopura (denominada agua ultrapura)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Guantes de examen de nitrilo Guantes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td>de<td>nitrilo</td></tr><tr><td>Dieta normal para roedores</td><td>Harlan Laboratories, Madison, WI</td><td>Harlan 2018</td><td></td></tr><tr><td>P1000 pipetman</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>P2 pipetman</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>P20 pipetman</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>P200 pipetman</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solución de fenol (TRIzol)&nbsp;</td><td>Ambion Life Technologies</td><td>15598018</td><td></td></tr><tr><td>Papel</td><td></td><td></td><td></td>de aluminio preidentificado</tr><tr>Cubeta <td></td><td></td><td></td>de<td>espectrofotómetro de cuarzo</td></tr><tr><td>Rack para tiras de tubos de</td><td></td><td></td><td></td>PCR</tr><tr><td>Racks para tiras de tubos de RT-PCR</td> Hexámeros <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>aleatorios&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>58875</td><td></td></tr><tr><td>Sistema genético de rotor de PCR en tiempo real&nbsp;</td><td>Corbett research</td><td>RG-3000 Rotor-Gene termociclador</td><td></td></tr><tr>Centrífuga <td></td><td></td><td></td><td>refrigerada de sobremesa</td></tr><tr><td>RiboLock Inhibidor de RNasa&nbsp;</td><td>Thermo scientific</td><td>EO0381</td><td></td></tr><tr><td>Tubos eppendorf de 1,5 mL sin RNasa Tubos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>con tapón de rosca de 1,5 mL sin RNasa Tiras</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>de tubos de PCR (0,2 mL) y tapones sin</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>RNasa Agua sin RNasa&nbsp;</td><td>Hyclone</td><td>SH30538.02</td><td></td></tr><tr><td>Máquina RT-PCR</td><td>Qiagen</td><td>Rotor-Gene Corbett 3000</td><td></td></tr><tr><td>RT-PCR tiras (0,1 mL) y tapas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>S16 cebador de PCR directo (5'-ATCTCAAAGGCCCTGGTAGC-3') 10 uM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>S16 cebador de PCR inversa (5' ACAAAGGTAAACCCCGATCG-3') Espectrofotómetro de 10 uM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Biochrom</td><td>Ultrospec 3100 pro</td><td></td></tr><tr><td>Mortero</td><td></td><td></td><td></td>de acero inoxidable</tr><tr><td>Almohadillas quirúrgicas</td><td>Hecho en casa una tabla de espuma envuelta en una almohadilla</td><td></td><td></td>absorbente desechable</tr><tr><td>Tijeras quirúrgicas&nbsp;</td><td>Instrumento</td><td>130.450.11</td><td></td></tr><tr><td>Termociclador</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Termociclador&nbsp;</td><td>Biometra</td><td>Termociclador</td><td></td></tr><tr>Mezclador <td></td><td></td><td></td><td>de vórtice</td></tr><tr><td>Espátula de</td><td></td><td></td><td></td> pesaje</tr></tbody></table>

colección de tejido adiposo ratón y procesamiento para el análisis de arn

Mouse Adipose Tissue Collection and Processing for RNA Analysis

En comparación con otros tejidos, tejido adiposo blanco tiene un contenido considerablemente menos RNA y proteína para aplicaciones posteriores como PCR en tiempo real y Western Blot, ya que en su mayoría contiene lípidos. Aislamiento de RNA de las muestras de tejido adiposo también es un reto como pasos adicionales son necesarios para evitar estos lípidos. Aquí, presentamos un procedimiento para recoger tres anatómicamente diferentes blancos los tejidos adiposos de los ratones, para procesar las muestras y realizar aislamiento de RNA. Además describimos la síntesis del cDNA y del gene experimentos de expresión usando PCR en tiempo real. El protocolo aquí descrito permite la reducción de la contaminación de pelo y sangre en almohadillas de grasa, así como la contaminación cruzada entre diferentes cojines gordos durante la recogida de tejido del animal. También se ha optimizado para garantizar la adecuada cantidad y calidad del ARN extraído. Este protocolo puede ser ampliamente aplicada a cualquier modelo de ratón donde las muestras de tejido adiposo son requeridas para experimentos de la rutina como PCR en tiempo real pero no está diseñado para el aislamiento de cultivos celulares de adipocitos primarios.

Siguiendo el procedimiento de necropsia, tres tejidos adiposo blanco fueron recogidos y ponderados de los dos grupos de ratones (N y HF alimentados con dieta). Como era de esperar, ratones en la dieta HF habían aumentado peso final y ganancia de peso en comparación con hermanos de camada en dieta de N (tabla 1). Estas observaciones fueron acompañadas por más de un aumento de 2 dobleces en el peso de la PGF, el PRF y el SCS en ratones obesos en comparación con aquellos en ...

El objetivo de este trabajo es presentar un procedimiento paso a paso para recoger diferentes tejidos adiposos blancos de ratones, procesar las muestras de grasa y extracto de RNA.

Colección de tejido adiposo ratón y procesamiento para el análisis de ARN

Compared to other tissues, white adipose tissue has a considerably less RNA and protein content for downstream applications such as real-time PCR and ...

El objetivo general de este procedimiento es garantizar una recolección adecuada de muestras de depósitos de tejido adiposo blanco de diferentes ratones y aislar una gran cantidad de ARN de buena calidad del tejido. Este método puede responder a preguntas clave en los campos del metabolismo, la bioquímica y la biología molecular que, por ejemplo, se refieren a la expresión génica en el tejido adiposo de ratones tratados o modificados genéticamente. La principal ventaja de esta técnica es que permite el aislamiento de grandes cantidades de ARN de buena calidad del tejido adiposo, que suele tener un bajo contenido de ARN.La demostración del procedimiento estará a cargo de Emilie Pepin, una asistente de investigación de mi laboratorio. Después de sacrificar a un ratón, corte la piel sobre la línea alba de acuerdo con el protocolo de texto, luego haga dos incisiones de aproximadamente dos centímetros desde la mitad de la caja torácica hacia el brazo derecho y cerca de los órganos genitales por encima de la extremidad trasera derecha. Estira una esquina de la piel abierta y usa una aguja de calibre 22 para sujetarla en la almohadilla.Luego, sujeta la otra esquina. Con unas tijeras quirúrgicas colocadas contra la piel lo más plana posible, realice una disección roma de la grasa subcutánea abdominal, o SCF, y luego transfiérala a un trozo de papel de aluminio precortado. Repite la disección para el lado izquierdo del animal.Luego, tire de las almohadillas de grasa recolectadas a la izquierda y a la derecha en el papel de aluminio y use nitrógeno líquido para congelar la muestra. Para acceder al tejido adiposo visceral, corte el músculo abdominal a lo largo de la línea alba. Luego, haga una incisión en los músculos abdominales desde los genitales hacia la parte posterior del ratón en ambos lados.La grasa alrededor de los órganos reproductivos es la grasa perigonadal, o PGF. Separe las almohadillas de grasa izquierda y derecha del epidídimo, los testículos y el conducto deferente y transfiéralo al papel de aluminio preetiquetado. Luego, congele la muestra en nitrógeno líquido.Empezando por el lado izquierdo, exponga los riñones alejando el intestino de la cavidad abdominal hacia el lado derecho. El tejido adiposo que se observa aquí alrededor del riñón y las glándulas suprarrenales es la grasa perirrenal, o PRF. Aísle y extraiga las glándulas suprarrenales antes de recolectar la PRF.Esto puede ser tedioso ya que son un poco más rosados que el tejido adiposo. Ahora, aísle el PRF de la pared muscular posterior y corte el uréter, la arteria renal y la vena que separa el PRF y el riñón del resto del cuerpo. A continuación, aísle la PRF del riñón cortando y extrayendo la cápsula renal.Después de aislar el PRF derecho, transfiera la muestra al papel de aluminio con el tejido del lado izquierdo y use nitrógeno líquido para congelar las muestras. Enfríe tubos cónicos de 1,5 mililitros libres de RNasa, un mortero y una espátula en nitrógeno líquido según el protocolo de texto. Coloque la muestra de tejido adiposo en el mortero, luego use unas capas de papel marrón para levantar el mortero del nitrógeno líquido y encajarlo en el mortero.Mientras sostienes el mortero con el papel, usa el martillo para golpear la parte superior del mortero una o dos veces. A continuación, muela la muestra con un movimiento giratorio hasta obtener un polvo fino. A continuación, retire el mortero, retire la espátula del nitrógeno líquido y utilícela para transferir la muestra al tubo cónico preenfriado de 1,5 mililitros correspondiente.Vuelva a sumergir la espátula en nitrógeno líquido de vez en cuando para evitar que la muestra se derrita. Además, mantenga el tubo cónico sobre hielo seco para evitar que la muestra se descongele. Llene el tubo cónico hasta aproximadamente 2/3 de su capacidad con una muestra molida para obtener un rendimiento adecuado de ARN.Luego, prepare las muestras restantes de acuerdo con el protocolo de texto. Bajo una capucha química y con una bata de laboratorio, guantes y gafas de seguridad, retire una muestra molida de nitrógeno líquido. Abra lentamente el tubo y agregue 500 microlitros de solución de fenol.Cierre la tapa del tubo y el vórtice a máxima velocidad durante unos cinco segundos, luego abra lenta y cuidadosamente el tubo para liberar la presión del nitrógeno. Se escuchará el sonido del aire que sale del tubo. Pipetee 500 microlitros adicionales de solución de fenol en el tubo.Luego, vórtice y ábralo lentamente como antes. Agite la muestra hasta que se disuelva por completo. Luego, abra el tubo para liberar la presión antes de procesar muestras adicionales.Una vez que se hayan procesado todas las muestras, vórdelas brevemente a máxima velocidad e incubalas a temperatura ambiente durante cinco minutos. Centrifugar los tubos a 12.000 veces G y cuatro grados centígrados durante 10 minutos. Luego, vuelva a colocar los tubos a temperatura ambiente.Para evitar la contaminación, utilice una pipeta P1000 con una punta filtrada para aislar la mayor cantidad posible de ARN de la capa rosa intermedia perforando la fase lipídica cerca del lateral del tubo. Dispense el ARN en los nuevos tubos cónicos sin tocar los lados de los tubos para evitar la transferencia de lípidos presentes en el exterior de la punta. Agregue 200 microlitros de cloroformo puro a cada muestra y mezcle los tubos por inversión durante 15 segundos.Luego, después de incubar las muestras a temperatura ambiente durante 10 minutos, centrifugar los tubos a 12.000 veces G y cuatro grados Celsius durante 15 minutos y volver a llevar los tubos a temperatura ambiente. Para cada muestra, utilice una pipeta P1000 y puntas filtradas para transferir la mayor cantidad posible de fase superior acuosa y transparente que contenga ARN al segundo conjunto de tubos cónicos correspondientes. A continuación, agregue 500 microlitros de isopropanol al 100% a cada muestra y mezcle los tubos por inversión durante 15 segundos.Luego, incube las muestras a temperatura ambiente durante 10 minutos. Centrifugar los tubos a 12.000 veces G y cuatro grados centígrados durante 10 minutos antes de volver a poner los tubos a temperatura ambiente. Deseche el isopropanol vertiéndolo fuera de cada tubo.Ahora, agregue un mililitro de etanol al 75% a cada muestra y haga un vórtice breve de los tubos a la velocidad máxima. A continuación, centrifugar las muestras a 7.500 veces G y cuatro grados centígrados durante cinco minutos. Después de girar las muestras y llevarlas a temperatura ambiente, deseche el etanol al 75% invirtiendo cada tubo y encendiéndolos golpeándolos contra el papel marrón para eliminar cualquier etanol residual.Deje la tapa abierta y seque al aire el pellet de ARN durante unos 15 a 20 minutos. Después de evaluar el tamaño de los gránulos de ARN, agregue de 10 a 25 microlitros de agua libre de ARNasa a cada muestra. Incubar las muestras en un bloque de calor a 60 grados centígrados durante cinco minutos.Luego, vórtice brevemente los tubos. Incube las muestras en el mismo bloque de calor durante cinco minutos más. Luego, gire rápidamente todas las muestras e inmediatamente colóquelas en hielo.Realizar RT-PCR para la expresión génica en tejido adiposo según el protocolo de texto. Como se esperaba, los ratones con la dieta alta en grasas habían aumentado de peso corporal y aumentaron de peso en comparación con los compañeros de camada con la dieta normal. Estas observaciones se acompañaron de un aumento de más del doble en el peso de PGF, PRF y SCF en ratones obesos en comparación con los que seguían la dieta normal.Esta tabla muestra que para cada tejido adiposo blanco, el aislamiento de ARN por solución de fenol produjo muestras con un OD260 sobre OD280 de alrededor de 2.0 que se considera puro para el ARN. Como se ve en este gráfico de barras, los datos de PCR en tiempo real mostraron que la expresión del ARNm de leptina fue significativamente mayor en PGF, PRF y SCF de ratones obesos en comparación con los que seguían una dieta normal. Las diferencias observadas en la expresión del ARNm de leptina no se debieron a una variación de s16, el gen de referencia utilizado para normalizar los resultados entre los dos grupos de ratones, ya que los valores de CT no se alteraron.Una vez dominada, esta técnica se puede realizar en cuatro horas si se realiza correctamente. Al intentar este procedimiento, es importante recordar que debe trabajar en un entorno libre de ARNasa durante el procedimiento de extracción de ARN. Siguiendo este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como la amplificación por PCR en tiempo real, para responder a preguntas adicionales, como las modificaciones de la expresión génica.Tras su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo del metabolismo exploraran las modulaciones del tejido adiposo relacionadas con la obesidad y la diabetes en roedores. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo aislar diferentes almohadillas de grasa y aislar el ARN de ellas. No olvide que trabajar con la solución de fenol puede ser extremadamente peligroso, y siempre se deben tomar precauciones como usar una bata de laboratorio y guantes mientras se realiza este procedimiento.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Presentamos un procedimiento para aislar ARN con alta integridad del páncreas de ratón rico en ribonucleasa.

Aislamiento de ARN de ratón Páncreas: Un tejido de ribonucleasa-rica

Consecutivos crio-secciones se recogen para permitir que las aplicaciones histológicas y enriquecimiento de ARN para mediciones de la expresión de genes usando las regiones adyacentes de un músculo esquelético solo ratón. ARN de alta calidad se obtiene a partir de 20 - 30 mg de cryosections y mediciones agrupadas están directamente comparación entre aplicaciones.

Cryosectioning de regiones contiguas de un músculo esquelético solo ratón para la expresión de genes y análisis histológicos

Aquí, describimos un protocolo para un microdissection de la captura del laser reproducible (LCM) para aislar la red trabecular (TM) para posteriores análisis de ARN. La capacidad de analizar los cambios en la expresión génica en el TM ayudarán en la comprensión de los mecanismos moleculares subyacentes de enfermedades oculares relacionadas con la TM.

Microdissection de la captura del laser de la malla Trabecular muy pura de ojos de ratón para análisis de expresión génica

Se desarrolló un protocolo de microdisección de captura láser (LCM) para obtener una cantidad suficiente de ARN de alta calidad para el análisis de la expresión génica en células óseas. El estudio actual se centra en las secciones del fémur del ratón. Sin embargo, el protocolo LCM reportado aquí se puede utilizar para estudiar la expresión génica en células de cualquier tejido duro.

Un protocolo de microdisección de captura láser que produce ARN de alta calidad a partir de huesos de ratón congelados

Se desarrolló un método de pulverización criogénica para procesar patas murinas utilizando un molino congelador de nitrógeno líquido para mejorar el rendimiento y la calidad del ARN o proteína extraída de los tejidos y permitir el análisis de perfiles moleculares asociados con Respuestas.

Un protocolo de Cryo-pulverización para el procesamiento de patas de ratón para evaluar las vías moleculares de la inflamación del tejido en un modelo de artritis inducida por colágeno

Este procedimiento describe la recolección de regiones cerebrales congeladas discretas para obtener proteínas y ARN de alta calidad utilizando herramientas baratas y comúnmente disponibles.

Colección de regiones cerebrales de roedores congelados para análisis posteriores

Esta publicación describe un protocolo para el aislamiento de núcleos de adipocitos maduros, purificación por clasificación activada por fluorescencia y transcriptómica a nivel de una sola célula.

Aislamiento de núcleos de tejido adiposo para aplicaciones genómicas de una sola célula

Este protocolo proporciona un método eficiente de digestión de colagenasas para el aislamiento de adipocitos viables y células de la fracción vascular estromal-SVF de grasa visceral humana en un solo proceso, incluida la metodología para obtener ARN de alta calidad de los adipocitos y la fenotipificación de los macrófagos SVF mediante la tinción de múltiples marcadores unidos a la membrana para su análisis por citometría de flujo.

Aislamiento de adipocitos viables y fracción vascular estromal a partir de tejido adiposo visceral humano adecuado para análisis de ARN y fenotipado de macrófagos

Aquí, proporcionamos un procedimiento práctico para diseccionar y realizar análisis histológicos y de expresión génica del tejido adiposo marrón supraclavicular murino.

Disección, procesamiento histológico y análisis de expresión génica del tejido adiposo marrón supraclavicular murino

Este protocolo describe un método para aislar ARN de regiones histológicas definidas de tejido hepático de ratón incrustado en compuesto de paraformaldehído y compuesto de Temperatura Óptima de Corte mediante microdissección por captura láser, permitiendo un análisis dirigido de expresión génica posterior.

Microdisección por captura láser de tejido hepático de ratón fijado con paraformaldehído para análisis de ARN

Aprende a colectar tejido adiposo blanco de ratón y extraer ARN de alta calidad para estudios de expresión génica en metabolismo y biología molecular. Este método permite investigar modificaciones genéticas.

Colección de tejido adiposo ratón y procesamiento para el análisis de ARN

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