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DOI: 10.3791/60113-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study presents a protocol for evaluating the balance between glutamate release and clearance at single corticostriatal glutamatergic synapses using acute slices from adult mice. By employing the fluorescent sensor iGlu u for glutamate detection, researchers can identify local mismatches in transmitter dynamics, aiding in the investigation of dysfunctional synapses in disease contexts.
Presentamos un protocolo para evaluar el equilibrio entre la liberación de glutamato y el aclaramiento en sinapsis glutamatérgicas corticostriatales en rodajas agudas de ratones adultos. Este protocolo utiliza el sensor fluorescente iGluu para la detección de glutamato, una cámara sCMOS para la adquisición de señal y un dispositivo para la iluminación láser focal.
La imagen de alta resolución de una sola sinapsis que expresa un sensor de glutamato rápido permite una detección de discordancia local entre la liberación y la absorción del transmisor. En el caso de la enfermedad, este método se puede utilizar para identificar sinapsis disfuncionales. Para la corrección de autofluorescencia, primero, coloque una rebanada cerebral del ratón de interés en la cámara de grabación de un microscopio de un solo fotón.
Sumerja la rebanada en líquido cefalorraquídeo artificial oxigenado y utilice el objetivo de inmersión en agua de 20x para localizar el estriado dorsal. Fije las rodajas con una rejilla de nylon en un arpa de platino para minimizar el movimiento del tejido, y cambie al objetivo de inmersión en agua 63x. Usando un filtro de paso alto a 510 nanómetros, adquiera una imagen de las estructuras positivas del sensor autofluorescente y glutamato juntos.
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